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人体间期细胞X—小体的制备

来源:医学加加 作者: 2007-9-25

摘要: 一、原理 1949年Barr等发现,在雌性体细胞中的两条X染色体有一条(或这条的大部分)处于凝集不活动状态,从而形成X-小体(或称X-染色质、性染色质、Barr小体)。进而发现,所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体,当在个用雌或雄体中,有多于2条X染色体时,在间期细胞内除一条外,其余均形成X-小体。 人类正常的......


  

一、原理

    1949年Barr等发现,在雌性体细胞中的两条X染色体有一条(或这条的大部分)处于凝集不活动状态,从而形成X-小体(或称X-染色质、性染色质、Barr小体)。进而发现,所有哺乳类雌体细胞中都有一条这种表现的X染色体,当在个用雌或雄体中,有多于2条X染色体时,在间期细胞内除一条外,其余均形成X-小体。

    人类正常的男女体细胞中,22对常染色体并无区别,但其性染色体分别为XY和XX。女性的两条X染色体中,有一条在间期呈现浓缩状态,可由适当的染料显示。正常女性间期细胞中X小体阳性率约为30—50%。

  二、仪器、用品及试剂

    光学显微镜,恒温水浴箱;

    牙签、载玻片、染色缸;

    Carnoy固定液(甲醇∶冰乙酸=3∶l)70%乙醇,硫堇染液;

    5N HCl,0.2%甲苯胺兰染液。

  三、操作步骤

  (一)方法一

  l.取材、涂片:取女性口腔上皮细胞均匀涂布在洁净载玻片上。

  2.固定:涂片后立即95%乙醇中固定30分钟(不可干燥)。气干。

  3.染色:玻片在蒸馏水中冲洗几次后5N HCl(22℃)水解10分钟,蒸馏水洗去多余HCl,硫堇染色30分钟。水洗。

  4.镜检、气干后即可镜检。若背景颜色过深可在75%乙醇、95%乙醇中分色后再镜检。

  (二)方法二

  l.取女性口腔上皮细胞涂片。待干燥。

  2.Carnoy固定液中固定15分钟。干燥。

  3.5N HCl中10分钟。水洗。干燥。

  4.0.2%甲苯胺兰染色2—5分钟。水洗。气干。

  5.镜检。

  四、注意事项

  l.涂片时应均匀涂成单层,取材细胞要多些。取材前应漱口。

  2.镜检应选择完整、核质中颗粒均匀的细胞观察,X-小体大小约为1μm,多位于细胞核边缘。

  3.统计X-小体阳性率,计数应选300—500个细胞。

  五、试剂

  1.硫堇染液配方:

  ①4%硫堇原液:4g硫堇粉末置研钵中以50%乙醇100ml研磨溶解。过滤。

  ②Michaelies缓冲液:醋酸钠9.714g,巴比妥钠14.714g加双蒸水至500ml。

  ③硫堇工作液(PH5.7):0.1N HCl 32ml

         Michaelies缓冲液28 ml

         4%硫堇原液400ml

  2.甲苯胺兰染液配方:

  0.2g甲苯胺兰粉末溶于100ml双蒸水中即可。


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