当前位置:首页 > 医源资料库 > 医学文档库 > 心血管相关 > 载脂蛋白A-I对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

载脂蛋白A-I对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

载脂蛋白A-Ⅰ对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响
唐朝克  姜志胜  易光辉  王佐  刘录山  任 重  王 双  杨永宗
 南华大学心血管病研究所
 国家自然科学基金资助项目 (30470720)
前   言
     三磷酸腺苷结合盒转运体(ABC)超家族, 目前已发现有七个家族, 分别为A、B、C、D、E、F、G, 它们共有48个成员,A家族共有12个成员, ABCA1是A家族成员之一。它的主要功能与促进细胞内胆固醇流出有关。
负荷乙酰化低密度脂蛋白胆固醇酯的人单核源性巨噬细胞其ABCA1蛋白质增加似乎与ABCA1 mRNA增加不均衡。
巨噬细胞ABCA1蛋白质降解非常迅速。这些结果说明ABCA1蛋白质降解在ABCA1功能调节中起作用。
ABCA1横接于apoA-I,这就产生apoA-I调节ABCA1降解的可能性。
  技 术 路 线
THP-1巨噬细胞

加ox-LDL

THP-1巨噬细胞源性泡沫化

载脂蛋白A-Ⅰ

   胆固醇流出检测、油红O染色、高效液相色谱分析、流式细胞术、RT-PCR、Western 印迹检测等

实验方法
1、 细胞培养
2、 LDL的分离、修饰及鉴定
3、胆固醇流出实验
4、油红O染色
5、高效液相色谱分析
6、流式细胞术
7、逆转录聚合酶链反应
8、Western 印迹检测
9、统计学处理

结     果
     1  THP-1巨噬细胞源性泡沫化
THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇和胆固醇酯的检测
2  载脂蛋白A-Ⅰ对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇的影响
*P<0.05 νs 0 h group or BSA group and control group
*:P<0.05, 与0h组比较
       3  载脂蛋白A-Ⅰ对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响(n=3)
    4  载脂蛋白A-Ⅰ对THP-1巨噬细胞源性     泡沫细胞ABCA1表达的影响
0h    6h    12h   24h   BSA   control
0h    6h  12h  24h  BSA  con    M
*: P<0.05, 与0h组比较
5  载脂蛋白A-Ⅰ对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞
平均ABCA1荧光强度的影响
0h
6h
12h
24h
BSA
control
31.4
30.9
42.6
38.7
32.4
31.2
6  蛋白酶抑制剂对ABCA1蛋白质降解的影响
1        2      3      4        5      6       7       8
1: 10 μg/ml apoA-I; 2:10 μg/ml apoA-I﹢50 μmol/L ALLN; 3:10 μg/ml apoA-I﹢500 μg/ml leupeptin; 4:10 μg/ml apoA-I﹢20 μmol/L pepstatin A; 5:10 μg/ml apoA-I﹢10 μmol/L aprotinin; 6:10 μg/ml apoA-I﹢250 μg/ml phosphoramiddon; 7: 10 μg/ml apoA-I﹢5 μmol/L lactacytin; 8:10 μg/ml apoA-I﹢5 mmol/L NH4C1. * P<0.05 νs control group
2, 3    巯基蛋白酶抑制剂
4,5,6 蛋白酶抑制剂
7       蛋白体抑制剂
8      溶酶体抑制剂
 *   *
7  apoA-I和巯基蛋白酶抑制剂协同增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出
1: control group; 2: 2.5 μg/ml apoA-I group; 3: 5 μg/ml apoA-I group; 4: 10 μg/ml apoA-I group; 5: 20 μg/ml apoA-I group; 6: 50 μmol/L ALLN group; 7: 10 μg/ml apoA-I+ 50 μmol/L ALLN group. * P<0.05 νs control group
*
*
*
*
*
8  蛋白酶抑制剂对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响
1: 10 μg/ml apoA-I; 2:10 μg/ml apoA-I﹢50 μmol/L ALLN; 3:10 μg/ml apoA-I﹢500 μg/ml leupeptin; 4:10 μg/ml apoA-I﹢20 μmol/L pepstatin A; 5:10 μg/ml apoA-I﹢10 μmol/L aprotinin; 6:10 μg/ml apoA-I﹢250 μg/ml phosphoramiddon; 7: 10 μg/ml apoA-I﹢5 μmol/L lactacytin; 8:10 μg/ml apoA-I﹢5 mmol/L NH4C1 (n=3). * P<0.05 νs control group
*
*
2, 3    巯基蛋白酶抑制剂
4,5,6 蛋白酶抑制剂
7       蛋白体抑制剂
8      溶酶体抑制剂
 9  巯基蛋白酶抑制剂ALLN浓度依赖性增加巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出
1: 10 μg/ml apoA-I; 2:10 μg/ml apoA-I﹢10 μmol/L ALLN; 3:10 μg/ml apoA-I﹢20 μmol/L ALLN; 4:10 μg/ml apoA-I﹢30 μmol/L ALLN; 5:10 μg/ml apoA-I﹢40 μmol/L ALLN; 6:10 μg/ml apoA-I﹢50 μmol/L ALLN.
*
*
讨   论
本研究显示apoA-I增加细胞内胆固醇流出, 降低细胞内胆固醇聚积,引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性减少, 而ABCA1蛋白质水平、细胞平均ABCA1荧光强度以及细胞内胆固醇流出呈时间依赖性增加,但ABCA1 mRNA没有明显变化。
巯基蛋白酶抑制剂增加ABCA1蛋白质水平,而其它蛋白酶抑制剂不增加ABCA1蛋白质水平,蛋白体抑制剂和溶酶体抑制剂也不影响ABCA1蛋白质水平。巯基蛋白酶抑制剂阻碍ABCA1蛋白质的降解。因此, ABCA1蛋白质分解作用很可能由巯基蛋白酶介导的途径即钙激活中性蛋白酶来完成。
由于蛋白体抑制剂不影响ABCA1蛋白质水平, 所以蛋白体对ABCA1蛋白质分解作用可以被排除。溶酶体抑制剂不影响ABCA1蛋白质水平, 溶酶体也不大可能对ABCA1蛋白质起分解作用。apoA-I通过阻碍ABCA1蛋白质降解, 而增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质水平。
因此, 载脂蛋白通过阻碍ABCA1蛋白质降解途径来稳定ABCA1蛋白质并导致THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质水平增加。巯基蛋白酶的抑制可进一步增加ABCA1蛋白质水平和THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出。
结      论
 载脂蛋白A-I可提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1   蛋白质水平, 增加细胞内胆固醇流出, 降低细胞内胆固   醇聚积。
参  考  文  献
[1]  唐朝克,严鹏科,杨永宗. ABCA1在巨噬细胞胆固醇流出中的作用[J]. 中国病理生理杂志,2003, 19(10): 1427 – 1431.
[2]  Rigot V, Hamon Y, Chambenoit O, et al. Distinct sites on ABCA1 control distinct steps required for cellular release of phospholipids[J]. J Lipid Res, 2002, 43 (12): 2077 – 2086.
[3]  Langmann T, Klucken J, Reil M, et al. Molecular cloning of the human ATP-binding cassette transporter 1 (hABC1): evidence for sterol-dependent regulation in macrophages[J]. Biochem Biophys Res Commun, 1999, 257 (1): 29 – 33.
[4]  Oram JF, Lawn RM, Garvin MR, et al. ABCA1 is the cAMP-inducible apolipoprotein receptor that mediates cholesterol secretion from acrophages[J]. J Biol Chem, 2000, 275 (44): 34508 – 34511.
[5]  唐朝克,杨峻浩,易光辉,等. 油酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达和胆固醇流出的影响[J]. 生物化学与生物物理学报, 2003, 35 (12): 1077 –1082.
[6]  Sawle A, Higgins MK, Olivant MP, et al. A rapid single-step centrifugation method for determination of HDL, LDL, and VLDL cholesterol, and TG, and identification of predominant LDL subclass[J]. J Lipid Res, 2002, 43 (2): 335 – 343.
[7]  唐朝克,贺修胜,易光辉,等. 肝X受体α在泡沫细胞胆固醇流出中的调控作用[J]. 生物化学与生物物理进展, 2003, 30 (6): 940 – 944.
[8]  唐朝克,易光辉,王佐,等. 干扰素-γ对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和ABCA1表达的影响[J]. 生物化学与生物物理进展, 2004, 31(2): 127 – 133.
[9]  唐朝克,王佐,易光辉,等. Rolipram对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和ABCA1表达的影响[J]. 中国药理学通报, 2003, 19 (10): 1177 – 1182.
[10]  唐朝克,易光辉,唐国华,等. 三磷酸腺苷结合盒转运体A1在泡沫细胞胆固醇流出中的作用. 中国动脉硬化杂志, 2003, 11(4): 304-308
[11]  唐朝克,杨永宗,易光辉,等. 三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用[J]. 中国病理生理杂志, 2003, 19(8): 1084 – 1088.
[12]  唐朝克,杨永宗.c ABCA1在动脉粥样硬化发生与发展中的作用[J]. 生命的化学, 2003, 23(2): 138 – 140.
[13]  Chambenoit O, Hamon Y, Marguet D, et al. Specific docking of apolipoprotein A-I at the cell surface requires a functional ABCA1 transporter[J]. J Biol Chem, 2001, 276 (13): 9955 – 9960.
[14]  Rock KL, Gramm C, Rothstein L, et al. Inhibitors of the proteasome block the degradation of most cell proteins and the generation of peptides presented on MHC class I molecules[J]. Cell, 1994, 78 (5): 761 – 771


医学百科App—医学基础知识学习工具


页:
返回顶部】【打印本文】【放入收藏夹】【收藏到新浪】【发布评论


察看关于《载脂蛋白A-I对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响》的讨论


关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容