主题:VitC

+ 关注 ≡ 收起全部文章
336*280_ads

反相高效液相色谱法测定尿样中维生素C、B 1 和B 2 的浓度

  水溶性维生素与人体的生长发育和健康有着密切关系,在人体的生命活动中具有十分重要的作用,它们在人体内的含量是衡量一个人的健康指标。目前VitC,VitB 1 和VitB 2 传统测定方法中,VitC常用2,4-二硝基苯肼比色法和2,6-二氯靛酚钠盐滴定,这两个方法灵敏度较低,特异性差,目前一般科研项目都不采用这个滴定法;Vit B 1 和Vit B 2 可用荧光法,但该法前期处理操作繁冗,费时费力,其处理方法和过程增加了影响检测精确度欠佳的人为因素。本文数据采用液相色谱法分离检测。

  1 实验部分
   
  1.1 仪器 SY5000LIQUID CHROMATOGRAPII(BEIFN)具UV/VIS检测器,色谱柱:Lichrosphcr C18,4.6×250,5μm,TL9900色谱数据工作站。
    
  1.2 试剂 本实验所用水为石英亚沸蒸馏水,以0.45μm水性微孔滤膜过滤。所用试剂均为分析纯(AR),甲醇为一级色谱纯,标样维生素C、B 1 、B 2 贮备液以0.01mol/L草酸配制,在4℃冰箱中保存。VitC临用新配。流动相A:0.05ml/L KH 2 PO4缓冲液(pH6.00);流动相B:甲醇。均经0.45μm水性微孔滤膜过滤,超声波脱气后使用。整个操作应避光,且操作过程要迅速,以防维生素被氧化。
   
  1.3 样品处理 检测学生起床后将昨晚尿排空,空腹以200ml水送服VitC500mg,VitB 1 5mg和VitB 2 5mg,然后收集服药后4h内排出的尿于1000ml广口棕色瓶中,并加4%的草酸防护,尿液经0.45μm微孔过滤器过滤 [4]  ,超声波脱气后即可上色谱柱分离检测。
   
  1.4 色谱仪工作条件 色谱检测的流动相由磷酸二氢钾A和甲醇B组成,其比例为90∶10和65∶35。流速1.0ml/min,柱温:室温,波长:266nm,柱前压:168~240ATM。
   
  1.5 标准曲线制作 配制一系列不同浓度的混合液,经检测得出的数据作出如下3种维生素的标准曲线(如图1示)。

  1.6 色谱检测 分时间段采样,每采一批样有30个左右尿样。样品处理后,按标准样品检测的条件,以外标法检测VitC、VitB 1 和VitB 2 ,经TL9900色谱数据工作站处理检测出的数据和图形。

  2 检测结果
   
  经检测,得出样品中所含3种维生素的量,通过分析可得出如下结果(图2为一个样品的VitC、VitB 1 和VitB 2 3种维生素的色谱分析图):
   
  色谱法检测得此样品中VitC、VitB 1 和VitB 2 的峰高分别为1805mV、40mV和386mV,从标准曲线计算出其4h内排出尿样中的三种维生素的量分别为2.58mg、0.44mg和0.42mg。从五个斑151个尿样检测结果来看,VitC缺乏的占检测总数的15.23%,不足的占13.90%,正常的占70.87%;VitB 1 缺乏的占1.99%,不足的占3.31%,正常的占94.70%;VitB 2 不足的占16.56%,正常的占52.31%,良好的占31.13%(正常以上的占83.44%) [1]  。

  3 讨论与总结
   
  3.1 检测波长的选择 待检测的3种维生素中,VitC在261nm,VitB 1 在246nm,VitB 2 在260nm波长处有最大的吸收 [2,3]  ,本次实验曾分别选用以上3种波长检测这三种维生素混合液,以上波长都不是这3种维生素混合液的最大吸收波长,经试验,最后确定266nm波长为三种待检测维生素的最佳检测波长。
   
  3.2 回收率 测得人体尿样的3种维生素的含量,再加入已知浓度的标准品,混合后按1.6项操作,测其含量,得出其平均回收率的范围是90.12%~99.85%,变异系数在1.98%~6.56%之间,说明此种方法检测人体尿样中的维生素C、B 1 和B 2 3种水溶性维生素的含量是可靠的。
   
  3.3 流动相确定 流动相由磷酸二氢钾缓冲液和甲醇组成,本实验曾以不同比例的流动相和波长对3种维生素C、B 1 、B 2 进行反复分离检测。通过实验,最终摸索出检峰形好,保留时间短的流动相组成比例。在磷酸二氢甲缓冲液∶甲醇=90∶10情况下,VitC保留时间在2.280~2.300min之内,VitB 1 在5.250~5.400min之内,VitB 2 在20min之后。此种情况分析一个的混合样至少需要25min(含平衡时间)。 在流动相比例65∶35的情况下,VitB 1 保留时间9.120~9.310min。中VitC和VitB 1 出峰不好,拖尾严重。本实验曾试行以梯度洗脱法检测,可将3种维生素分开,但检测时间长,至少在25min以上,且出现拖尾情况。考虑到本实验要检测的样品数目多,需以尽快的速度检测,故采取分步检测法:在流动相比例90∶10和65∶35情况下分别检测VitC、VitB 1 和VitB 2 ,两次检测合计不用20min,且它们分离得好,波型都是VV波型。
   
  3.4 标准样品溶剂的选择 在VitC、VitB 1 和VitB 2 的标准溶液配制中,本实验曾采用盐酸、偏磷酸和草酸作溶剂。从实验情况来看,草酸是以上3种维生素较好的溶剂,其获得检测数据误差小,检测波型好,这可能是草酸对VitC、VitB 1 和VitB 2 具有更好的稳定作用。
   
  3.5 流速 流速对检测精确度影响不大,但对检测保留时间影响较大。如流速1.0ml/1min,柱前压稍大一些,在200~240ATM之间,但仪器仍然可承受;如果流速变小,如0.8ml/min,虽然柱前压随之变小,约168atm,但保留时间却延迟5~10min,这对要检测大量样品是不可取的。故本实验采用1.0ml/min流速。
   
  3.6 待检样品处理的注意事项 由于维生素类物质稳定性不好,样品在检测之前,加入适当的保护剂,力求低温保存,防强光照,争取在最短时间内进行检测,以防维生素被氧化。这些都是取得较高检测精确度的重要性举措。
   
  3.7 总结 液相色谱法检测快捷,特异性好,灵敏度高;加上仪器具有色谱数据工作站软件,对数据和图形处理极为方便。故该方法是检测维生素物质的理想方法。

  (本文图片资料见附页2)(略)

  参考文献
    
  1 于守祥,刘志诚.营养与食品卫生监督检测方法指南.北京:人民卫生出版社,1980,9.
   
  2 潘建国,王开发.高效液相色谱法同步测定花粉中的水溶性维生素.上海:同济大学出版社,2001,581-583.
   
  3 成志强,孙成均.反相高效色谱法同时测定食品和多维片中8种水溶性维生素.分析化学,2001,(9):1068-1071.
   
  4 陈永明,刘放南.反相高效液相色谱法测定血中维生素C浓度.肠外与肠内营养,1998,(3):163-164.
    
  (收稿日期:2004-06-10)

  (编辑秋 实) 

  ˇ 基金项目:广东省教育九五规划科研课题“大学生营养监测与干预”(项目编号:JYA02021)
   
  作者单位:510225广东广州仲恺农业技术学院医疗中心( △ 实验中心) 

日期:2005年9月22日 - 来自[2004年第2卷第9A期]栏目
循环ads

银屑病 红斑狼疮 湿疹患者血清维生素C定量检测的结果分析

  维生素C(VitC)虽然早已广泛应用于多种皮肤病的治疗,但对其在皮肤病患者血清中定量检测结果的分析报道较少。为进一步研究VitC与某些皮肤病的关系,我们对三种皮肤病(银屑病、红斑狼疮、湿疹)共79例患者的血清VitC定量检测的结果进行了分析,现报告如下。

  1 资料与方法

    1.1 一般资料 79例均为在我科就诊的患者,包括诊断明确的银屑病40例,红斑狼疮22例,湿疹17例。40例银屑病患者中寻常型32例(其中进行期19例,静止期13例),红皮病型5例,脓疱型3例。男43例,女36例,年龄14~74岁,平均38.11岁。正常对照组为体检人群中确定为无疾患者103例。全部被检测者1个月内未应用过VitC。

    1.2 方法 采集正常或病人清晨空腹静脉血。应用2,4-二硝基苯肼法测定。仪器为72型分光光度计。

  2 结果

    2.1 3种皮肤病患者与正常对照组血清VitC含量比较 见表1。

  从表1可以看出:3种皮肤病患者血清VitC的含量均低于正常对照组,其中银屑病和红斑狼疮患者血清VitC的含量降低明显,与正常对照组比较差异有显著性。

    2.2 银屑病不同类型和病程的患者与正常对照组血清VitC含量比较 见表2。

    表1 3种皮肤病患者与正常对照组血清VitC含量比较 (略)
  
  注:与正常对照组比较, ˇ P<0.002

    表2 银屑病不同类型和病程的患者与正常对照组血清VitC含量比较 (略)

  注:与正常对照组比较, ˇ P<0.001, △ P<0.05

  从表2可以看出:不同类型和病程的银屑病患者血清VitC均低于正常对照组,其中以寻常型银屑病的进行期和红皮病型银屑病患者的血清VitC的降低较为明显。

    3 讨论

  银屑病患者血清VitC的含量降低的意义是:(1)作为发病因素之一。因VitC有提高皮损内的环磷腺苷(cAMP)水平的作用,当VitC的含量降低时,cAMP的水平亦可随之降低。而cAMP是表皮抑素,有抑制表皮细胞分裂和增殖作用,其水平降低就会引起表皮细胞有丝分裂增加和转换率加快 [1]  ,上述情况在银屑病病的进行期最为明显。本文寻常型银屑病进行期的VitC的含量最低以及临床用VitC治疗进行期银屑病有效,均可说明这一点。(2)作为疾病产生的结果之一。因为银屑病的大量脱屑可能损失维生素(包括VitC),其中尤以红皮病型银屑病脱屑最多且时间最长,因而其VitC的损失也最为明显,故本文检测显示红皮 病型银屑病VitC的含量亦较低。

    红斑狼疮患者血清VitC的含量降低的意义主要是疾病产生的结果之一。因为红斑狼疮患者常存在以食欲减退为主的消化道功能紊乱,这就可能影响VitC的摄入而导致其缺乏。湿疹患者血清VitC的含量仅仅略低于正常对照组,说明湿疹的发病与VitC无明显关系,临床上治疗湿疹时应用VitC有一定疗效,是因为VitC可能增强抗组织胺药对抗原致敏的治疗效果,当然,其能够减低毛细血管通透性的功能也起了某种作用。

    致谢:对完成检测的同志表示诚挚的谢意。

  参考文献

  1 赵辨.临床皮肤病学.第三版.南京:江苏科学技术出版社,2001,761-768.

  作者单位:100010首都医科大学附属北京中医医院皮肤性病科 

日期:2005年5月31日 - 来自[检验与临床]栏目

维生素C改善硝酸甘油耐受性的实验研究

  观察维生素C(VitC)和硝酸甘油(nitroglycerin, NTG)合用对NTG耐受性的影响,并探讨其机制。

  一、材料与方法

  1.离体动物实验分组及处理:新西兰白兔32只,随机分为正常对照(NC)组、NTG组、NTG+VitC组及VitC组。NTG(贴片)和VitC的用量分别为5 mg/d和1 g·kg-1.d-1,处理时间为3日。3日后测定经去甲肾上腺素预收缩后的兔离体动脉环对累积浓度的NTG(10-9~10-4mol/L)舒张血管作用的反应性及血管组织中丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和环磷酸鸟苷(cGMP)的含量。

  2.在体动物实验:16只慢性置管的新西兰兔(导管体内端插至兔升主动脉),随机分为NTG组和NTG+VitC组。NTG及VitC的用法同离体实验。于下列时刻通过导管的体外端测定两组的平均动脉压(MAP)及恒速静脉注射NTG 1 mg/kg(1 min)后MAP下降的最大幅度(ΔP):①用NTG贴片前;②用NTG贴片后6 h;③用NTG贴片后72 h。

  二、结果

  1.兔离体动脉环对NTG舒张血管作用的反应性(以舒张程度的百分率表示):NTG+VitC组的最大舒张程度为(80.2±4.2)%,显著高于NTG组(53.5±5.9)%,P<0.01,但仍低于NC组和VitC组(P<0.01);后两组之间差异无显著性。

  2.兔血管组织中MDA、NO和cGMP的含量:NTG组MDA的含量(nmol·mg-1.ww-1)显著高于NTG+VitC组(9.44±0.63∶1.71±0.16,P<0.01),NTG+VitC组与其它两组间差异无显著性。NTG+VitC组的NO含量(10-8 mol·mg-1.ww-1)和cGMP含量(pmol·mg-1.ww-1)均显著高于NTG组(NO:6.82±0.36∶6.41±0.40,P<0.01;cGMP:29.56±1.92∶24.77±1.02,P<0.01);NC组与VitC组的NO和cGMP含量均显著低于NTG组和NTG+VitC组(P<0.01),但二者之间差异无显著性。

  3.慢性置管兔不同时刻的MAP及ΔP:用NTG贴片前,两组的MAP和ΔP差异无显著性;用NTG贴片后6 h,两组的MAP均显著下降[NTG组:(91.37±5.24) mm Hg∶(96.62±3.81) mm Hg,P<0.001;NTG+VitC组:(90.38±4.57) mm Hg∶(95.50±4.60) mm Hg,P<0.001],而ΔP无显著变化;用NTG贴片后72 h,NTG组的MAP(97.50±4.93) mm Hg与用NTG贴片前比较差异无显著性,而NTG+VitC组的MAP(92.12±4.36) mm Hg虽较用NTG贴片6 h时升高(P<0.01),但仍低于用NTG贴片前的水平(P<0.001);该时刻两组的ΔP虽均低于用NTG贴片前及用后6 h时的水平,但组间比较NTG+VitC组的ΔP仍显著高于NTG组[(33.0±4.8) mm Hg∶(17.5±4.1) mm Hg,P<0.01]。

  三、讨论

  本实验中,兔离体动脉环对累积浓度NTG舒张血管作用的反应性是在离体水平反映NTG耐受程度的指标,而MAP和ΔP的变化则用于判断在体兔是否已对NTG产生耐受。结果表明:①持续应用NTG贴片72 h可使兔产生明显的NTG耐受;②Vit C和NTG合用具有显著改善NTG耐受性的作用。近年研究表明,NTG耐受时血管组织中超氧阴离子的含量显著增多,过多的超氧阴离子能迅速灭活NTG的效应分子NO,导致NTG耐受性的产生。本研究发现NTG耐受时血管组织中MDA的含量显著升高,而NO和cGMP(NO的下游分子)的含量显著降低,表明NTG耐受时确存在氧化应激因素。VitC与NTG合用后,伴随NTG耐受程度的减轻,MDA、NO和cGMP的上述变化发生逆转,提示VitC对NTG耐受性的改善作用是通过清除过多的超氧阴离子,并进而减少NTG源性NO的失活实现的;而VitC和NTG合用并不能完全阻止NTG耐受性的原因则可能与NTG耐受性的其它机制(如巯基耗竭学说)有关。收稿日期:1998-12-08

 

日期:2005年1月1日 - 来自[心血管病学]栏目
共 1 页,当前第 1 页 9 1 :

ads

关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容
联系Email: