来源：中国色谱技术网
摘要：目的：建立毛细管区带电泳法测定元胡止痛片和元胡止痛口服液中延胡索乙素的含量。方法：0．2mol/Ltris-45mmol/L磷酸二氢钠(磷酸调pH5．30)-40％异丙醇为缓冲液，分离电压为29kV，检测波长200nm，50cm×50μm，未涂层石英毛细管，每次进样前分别用0．1mol/L的盐酸、氢氧化钠和缓冲液冲洗5min；进样方式：压力进样2s。操作温度：25℃。结果：延胡索乙素在0．04～1．60mg/mL范围呈线性，RSD小于2．9％，回收率大于97％。结论：实验结果表明，该方法简便、快速、结果准确可靠，有较好的重复性。
关键词：毛细管电泳元胡止痛片元胡止痛口服液延胡索乙素
元胡止痛片和元胡止痛口服液是由中药元胡和白芷组成的复方中药制剂，元胡中主要含延胡索乙素和甲素等生物碱类化合物，其中延胡索乙素的止痛作用较强。元胡药材中延胡索乙素的含量测定方法有高效液相色谱法、薄层扫描法和非水毛细管电泳法，元胡止痛片中的延胡索乙素的含量测定方法有薄层扫描法。总生物碱含量测定方法有离子对比色法。本文采用毛细管区带电泳法测定了元胡止痛片和元胡止痛口服液中的延胡索乙素的含量。实验表明，操作简便，样品分离完全，峰形对称，重复性好，结果准确可靠。
1、仪器与试药
P／ACE5500毛细管电泳仪(美国，Beckman公司)，UV检测器，Gold软件控制仪器和数据采集；元胡止痛片，元胡止痛口服液(市售成药)；对照品：延胡索乙素，盐酸小檗碱(中国药品生物制品检定所)；磷酸二氢钠、磷酸、三羟基甲基氨基甲烷(Tris)、异丙醇、盐酸、氢氧化钠、浓氨水、乙醚、甲醇均为分析纯，二次重蒸馏水。
2、电泳条件
毛细管柱：未涂层石英毛细管(河北永年光导纤维厂生产)总长度57cm，有效长度50cm，内径50m；缓冲液：0．2mol/Ltris-45mmol/L磷酸二氢钠(磷酸调pH5．30)-40％异丙醇；分离电压：29kV；检测波长为200nm；每次进样前分别用0．1mol/L的盐酸、氢氧化钠和缓冲液冲洗5min；进样方式：压力进样2s。操作温度：25℃。
3、标准曲线和线性范围
分别取延胡索乙素对照品及内标盐酸小檗碱适量，用甲醇溶解，定容，分别制得2．0mg。mL对照品溶液及5．0mg/mL内标溶液。分别取对照品溶液0．1，0．25，0．5，1．0，1．5，2．0，4．0mL置5mL量瓶中，各加内标溶液0．5mL，用甲醇稀释至刻度，按选定的电泳条件测定，所得的延胡索乙素峰面积与内标峰面积的比值和延胡索乙素对照品的浓度(C，mg/mL)作回归曲线，线性范围为0．04～1．60mg/mL，标准曲线方程为：Y：0．0029+1．2056Cr=0．998
4精密度试验：对同一份供试品溶液，重复进样，测定其延胡索乙素含量，计算RSD(n=6)，元胡止痛片为2．9％．元胡止痛口服液为2．6％。
5样品溶液的配制和测定：取元胡止痛片20片，小心除去糖衣，精密称定．研细，精密称取适量(约相当于10片的重量)，置圆底烧瓶中，加浓氨水1mL，乙醚50mL回流2h，定量转移置100mL量瓶中，加乙醚至刻度。滤过，取续滤液80mL置蒸发皿中，在水浴上蒸干后，残渣用甲醇溶解，转移至5mL的量瓶中，加入内标溶液0．5mL，加甲醇至刻度，摇匀，即得。精密吸取元胡止痛口服液10mL，置分液漏斗中，加浓氨水1mL，用乙醚萃取4次，每次10mL，合并乙醚萃取液，置蒸发皿中，在水浴上蒸干后，残渣用甲醇溶解，转移至5mL的量瓶中，加入内标溶液0．5mL，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
按选定的方法，测定了元胡止痛片和元胡止痛口服液中延胡索乙素的含量。
6、回收率试验
采用加样回收法，按“5”项下方法精密称取约相当于10片量的元胡止痛片粉末5份，另精密吸取元胡止痛口服液10mL5份，分别加2．1mgmL的对照品甲醇溶液0．5mL，继续按“5”项方法操作，求得元胡止痛片平均回收率为97．52％．RSD为0．54％；元胡止痛口服液平均回收率为97．91％，RSD为0．82％。
7、讨论
为使样品组分得到更好的分离，保证峰形的对称和尖锐，对有机改性剂甲醇和异丙醇的添加的影响进行了摸索。实验表明添加异丙醇较甲醇得到的峰形更为对称，且峰更尖锐。随着异丙醇的比例增加，电泳的电流变小，出峰时间延长，综合考虑，选择异丙醇的比例为40％。为提高定量分析的精密度，采用内标对比法。最后选择了盐酸小檗碱为内标，它与样品的所有峰均达到基线分离。
来源：东方医药网
摘要：本文采用超临界CO2流体萃取法从延胡索中萃取延胡索乙素。在预试验的基础上，进行了以延胡索乙素含量为标准的四因素三水平的正交试验，得出最佳试验条件为：粒度：中(24目)；夹带剂乙醇浓度：70％；萃取压力：20MPa；萃取温度：55～50～45℃。同时与传统溶媒水和甲醇提取法进行了比较，结果表明超临界CO2流体萃取法优于传统溶媒提取法。
关键词：超临界CO2流体萃取法延胡索延胡索乙素含量
延胡索RhizomaCorydalis为常用中药，系罂粟科植物延胡索CorydalisyanlhusuoW．T．Wang的块茎。含延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素、延胡索丁素、延胡索戊素、延胡索己素、延胡索丑素等20多种生物碱。目前临床上用的延胡索制剂中延胡索的提取方法均为传统的溶媒提取法，费时、费能且不利于有效成份的提出，为此对采用超临界CO2流体萃取法从延胡索中萃取有效成份进行了研究。
1、实验材料与仪器
1．1实验材料：延胡索采自东阳市药材医药有限公司种植基地，并按大(10目)、中(24目)、小(50目)颗粒各加工5kg。延胡索乙素对照品，由中国药品生物制品检定所提供，批号：0726—9906。甲醇：色谱纯；三乙胺、磷酸、乙醇均为分析纯。
1．2实验仪器：HA231—50—2．5型超临界萃取装置，江苏南通华安超临界萃取有限公司；WATERS高效液相色谱仪，AGILENT高效液相色谱仪。
2、胡索乙素含量测定方法的建立
2．1色谱条件：流动相：甲醇-0．1％磷酸(用三乙胺调pH至6．0)(60：40)，色谱柱：DiamonsilT—MCl8(250×4．6mn，5m)，流速：1．0ml／min，波长：280nm，进样量：20l。
2．2线性关系的考察：精密称取五氧化二磷减压干燥过夜的延胡索乙素对照品l0．2mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取上述贮备液0．25、0．5、1、2、3、4ml，分别置l0ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别进样20μl，以峰面积为纵坐标，以对照品的量为横坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y=704．7+80863．6X，r=0．9993。表明延胡索乙素在0．102～1．632μg之间有良好的线性关系。
2．3回收率试验：采用加样回收率测定法，精密称取已知含量的延胡索样品1g，分别精密加入一定量的延胡索乙素对照品，按“样品测定”项下操作；结果(见表1)平均回收率为98．78％，RSD为2．75％(n=6)表1延胡索乙素回收率测定结果
2．4稳定性考察：精密吸取对照品溶液20ml，隔1h进样1次，共进样6次，测得延胡索乙素峰面积，计算RSD为1．05％，表明延胡索乙素在5h内稳定。
2．5精密度试验：取延胡索乙素对照品，用甲醇制成每1ml中含40g的溶液，精密吸取20μl重复进样6次，测峰面积，计算RSD为0．42％。
2．6重复性试验：精密称取样品，按“样品含量测定”项下操作，在相同条件下测定同一批号样品6份，计算含量，其RSD为2．25％。
2．7样品测定供试品溶液制备：精密称取延胡索粉(24目)2g。加入甲醇20．00ml，称定重量，超声处理30min，冷却用甲醇补足重量，用0．45μm微孔滤膜过滤，取滤液在上述色谱条件下进样分析：平行做6份，结果平均每克延胡索药材含延胡索乙素为0．543mg，RSD为2．02％。
3、CO2超临界萃取条件的预试验
对影响萃取的关键因素(CO2的流速、萃取压力、萃取温度和延胡索的粒度)进行了预试验实验结果表明，用夹带剂的萃取率高，25～35之间的萃取压力与萃取率无明显关系，以上实验的萃取出的延胡索乙素均比文献报导低(文献报导浙江产延胡索乙素含量为0．6mg／g左右)，说明实验条件需进一步优化。为此，我们以95％乙醇和无水乙醇为夹带剂，在萃取压力下对萃取效率的影响进行了试验。CO2的流速在30～35kg／h之间对萃取率影响不明显，夹带剂用无水乙醇不如乙醇，以上实验萃取出的延胡索乙素均比上述文献报道低。说明实验条件仍需进一步优化。我们进一步对CO2超临界萃取与水煎煮和醇提取的效率进行试验。实验结果表明，60％乙醇提取比水煎煮效果好，且上述二次CO萃取效果均不如60％乙醇提取与水煎煮。说明萃取条件未选好，药粉量与夹带剂用量的比例可能对萃取率有关，需再做预试验。最后，我们对CO2超临界萃取延胡索乙素的条件进行了再优选。
4、CO2超临界萃取的最佳条件试验
4．1药粉用溶剂浸泡再进行CO2萃取的试验对CO2萃取率偏低进行了分析，并同水煎煮和醇提取二种方法进行比较分析，认为偏低的主要原因，可能是在萃取过程中细胞壁渗透不完全所致。为此采用把夹带剂直接加入药粉中，浸泡一段时间后再进行萃取试验。本次预试验选定四个参数：乙醇浓度、浸泡时间、萃取压力和萃取时间。(1)CO2的流速：30kg／h，萃取压力：25MPa、分离釜I压力：8MPa、分离釜Ⅱ压力：6MPa，萃取温度：55℃、分离釜I温度：50℃、分离釜Ⅱ温度：45℃，延胡索的粒度24目，萃取容器50L，延胡索药粉的用量165g，60％乙醇200ml浸泡18h，萃取时间1h放出萃取液后，再继续萃取0．5h。(2)95％乙醇200ml浸泡18h，萃取压力20MPa，其余同(1)。(3)95％乙醇200ml浸泡18h，萃取压力25MPa，其余同(1)。(4)95％乙醇200ml浸泡24h，萃取压力20MPa，其余同(1)实验结果表明，以每克延胡索药粉含延胡索乙素毫克数表示：
前1h：(1)0．667(2)0．250(3)0．195
(4)0．326；后0．5h：(1)0．012(2)0．005(3)
0．003(4)0．006。
其中实验(1)的萃取率基本达到了文献报导值，说明夹带剂先浸泡后再萃取效果好，其它三个实验结果均较低，可能与乙醇的浓度有关。实验结果表明萃取率与乙醇浓度关系较大，而与浸泡时间关系不大；实验结果同时表明后半小时萃取率与前1h萃取率相比，从成本与效益考虑几乎可以不计，故萃取时间选定1h。
4．2正交试验：上述预试验结果表明用夹带剂的表萃取率高；25～35MPa之间的萃取压力与萃取率无关；CO2的流速在30～35kg／h之间与萃取率无关；药粉量与夹带剂用量的比例可能对萃取率有关；夹带剂先浸泡后再萃取效果好；萃取率与乙醇浓度关系较大，而与浸泡时间关系不大。故选定四因素三水平的正交试验：萃取温度(55～40℃)、粒度(大、中、小)、夹带剂乙醇的浓度(50％、60％、70％)和萃取压力(20MPa、25MPa、30MPa)。其它实验条件CO，的流速：30kg／h，萃取溶器50L，延胡索药粉65克用夹带剂(乙醇)100ml浸泡24h，萃取时间1h。
5、讨论
5．1在建立延胡索含量测定方法时考虑到延胡索乙素为叔胺类生物碱，难溶于水而溶于有机溶剂，根据其性质分别考察了甲醇、乙醇、氯仿，结果以甲醇为溶剂提取效率明显较其它溶剂高。
5．2从正交试验中结果可以得出最佳试验条件为A1B2C3D1；因素的主次顺序：B—C—D—A。B2C3D1A1为CO2超临界萃取的最佳试验条件：粒度：中(24目)；乙醇浓度：70％；压力：20MPa；温度：55～50～45℃。
5．3采用超临界CO2流体萃取，每克延胡索药粉含量延胡索乙素毫克数可达136．56，比文献报道要高出一倍多，且明显优于传统的溶媒提取法，该方法可能是中药材某些有效成分提取的一种高效的方法。
延胡索，是中药“浙八味”之一，又名玄胡索、元胡索、延胡。是罂粟科植物延胡索的块茎，在我国已有一千多年的药用历史，始载于《开宝本草》一书。最早主产于河北承德，辽宁朝阳、锦州一带，大约在明末清初才逐渐南移，到浙江后由于水土适宜生长，故成为浙江特产药材之一。延胡索是多年生草本植物，头年寒露过后栽，次年立春后长苗，叶似竹叶，4月开紫红小花，立夏前后待茎叶枯萎后采挖。根丛生如芋卵样，黄褐色，块茎入药。以个大、饱满、质坚、色黄、内色黄亮者为佳。
中医认为，延胡索性温，味辛苦。入肝、胃经，有活血、散瘀、理气、止痛的功效，可治心腹腰膝诸痛等。
据现代药理证实，延胡索内含紫菀碱等物质，具有止痛、镇静、催眠和安定的作用。历来医家用治心腹腰膝诸痛，月经不调、癥瘕、崩中、产后血晕、跌打损伤等症。《日华子本草》谓：“除风，治气，暖腰膝，破症瘕，扑损瘀血，落胎，及暴采腰痛。”《本草纲目》谓其“活血，利气，止痛，通小便。”并说“延胡索，能行血中气滞，气中血滞，故专治一身上下诸痛，用之中的，妙不可言。”在《本草汇言》上有：“玄胡索，凡用之行血，酒制则行；用之止血，醋制则止；用之破血，非生用不可；用之调血，非炒用不可。随病制宜，应用无穷者也。”
在许多止痛理气的中成药内都含有延胡索成分，如元胡止痛片、茴香桔核丸、十香止痛丸、金铃散、千金止带丸等等。
延胡索用醋炒后，可使其生物碱在水中的溶解度提高。有关资料表明，延胡索还可用于局部麻醉，用延胡索提取制成0.2%延胡索注射液进行局部麻醉，有效率在90%以上。
【摘要】 目的延胡索乙素作为对照品，建立高效液相色谱（HPLC）法控制复方元胡止痛胶囊的质量。方法采用Alltima C18色谱柱（5μm，4.6 mm×250 mn），用甲醇-水-三乙胺（65∶35∶0.5）为流动相，检测波长280 nm；柱温30℃；流速1.0 ml/min。结果延胡索乙素含量在0.102 9～1.028 8 μg范围内呈良好线性关系，得回归方程Y＝4.840 1X +0.089 5，r=0.999 7，平均加样回收率及RSD分别为101.17%和1.02%。结论以延胡索乙素为对照品，采用HPLC法控制复方元胡止痛胶囊质量的方法简便快速、准确可靠、重复性好，专属性强。
【关键词】 复方元胡止痛胶囊；高效液相色谱； 延胡索乙素
Abstract：ObjectiveTo establish the method for determining the content of tetrahydropalmatine in complex Yuanhu Zhitong capsule by HPLC. MethodsThe separation was performed on Alltima C18 column (5μm, 4.6mm×250mm) with methanol-H2O -triethylamine (65∶35∶0.5) as mobile phase .The detection wavelength was at 280 nm, the column temperature was 30 ℃, and the mobile phase speed was 1.0ml per min.ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.1029 to 1.0288 μg for the tetrahydropalmatine content and the linear equation was y＝4.840 1x +0.089 5(r=0.999 7). The average recovery rate was 101.17% and the relative standard deviation was 1.02%. ConclusionThe method is simple,rapid,accurate and reproducible.It can be used for the determination of tetrahydropalmatine content complex Yuanhu Zhitong capsule.
Key words：HPLC； Rhizoma Corydalis Decumbentis； Protopine； Content determination
复方元胡止痛胶囊是由延胡索（醋制）、香附（醋制）、川楝子、徐长卿4味药组成的中药复方制剂，是在复方元胡止痛片的基础上经剂型改变而来，功能疏气止痛，可用于肝胃气痛，胃脘胀痛，胸肋痛，月经痛［1］。延胡索为方中君药，现代研究表明，其主要有效成分为生物碱，其中以延胡索乙素的镇痛作用较强，另外还有延胡索甲素（d-紫堇碱）、延胡索丙素、延胡索丁素（1-四氢黄连碱）、延胡索戊素（dl-四氢黄连碱）、黄连碱、非洲防己碱、d-海罂粟碱等［2］。为了提高产品的质量可控性，我们建立了HPLC测定样品中延胡索乙素含量的质量控制法。现报道如下。
1 器材与方法
1.1 仪器
高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司)：P200 II型高压恒流泵，UV200 II 紫外可变波长检测仪，Rheodyne 7725i 高压六通进样阀，20 μl定量环；HW色谱工作站（南京千谱软件有限公司）；百万分之一电子天平（瑞士Mettler公司M3型）。
1.2 试药
复方元胡止痛胶囊（由本实验室自制）；延胡索乙素对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号0726-200208）；甲醇为色谱纯（中国医药集体上海化学试剂公司）；三乙胺（中国医药集体上海化学试剂公司）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为Alltima C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mn）；流动相为甲醇-水-三乙胺（65∶35∶0.5），使用前用孔径为0.45 μm的有机滤膜减压过滤，超声20 min；检测波长280 nm；柱温30℃；流速1.0 ml/min；进样量10 μl。
2.2 可行性实验精密称取供试品2 g，精密加入浓氨试液-甲醇（1∶20）50 ml，称定重量，回流90 min（75℃），放冷，再称定重量，用浓氨试液-甲醇(1∶20)补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液25 ml置水浴锅上蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至5 ml，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为HPLC检测的供试品溶液。取配制好的延胡索乙素对照品溶液、供试品溶液分别进样，原儿茶醛峰保留时间为9.275 min（见图1～3）。由图1～3可知，延胡索乙素保留时间为16.5 min左右，与其它组分分离很好，且阴性对照无干扰峰。理论板数以延胡索乙素计算为3 000。
2.3 线性关系的考察精密称取延胡索对照品1.286 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，浓度为0.051 44 mg/ml。从中分别精密吸取2，5，10，15，20 μl注入色谱仪，测定其峰面积，以延胡索乙素进样量为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。见图2。由图2可知，延胡索乙素在0.102 9～1.028 8μg范围内进样量与峰面积有良好线性关系，回归方程为Y＝4.840 1X +0.089 5，r=0.999 7（n=5）。
2.4 精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl注入液相色谱仪，记录峰面积，重复测定6次，RSD为0.64%。结果见表1。结果表明精密度好。表1 精密度测定结果（略）
2.5 样品回流时间考察取本品50粒，去胶囊壳后，混匀，取约2 g（批号20040501），精密称定，称取4份，分别置平底烧瓶中，精密加入浓氨-甲醇（1∶20）50 ml，密塞，称定重量，分别回流30,60,90,120 min（75℃），放冷，再称重，用浓氨-甲醇(1∶20)补足减失的重量，摇匀，过滤，精密取续滤液25 ml置水浴锅上蒸干，残渣用甲醇溶解定容至5 ml，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。依上述的方法测定。结果见表2。由表2可知，样品回流90 min即可。表2 不同回流时间测得的延胡索乙素含量（略）
2.6 稳定性实验取供试品溶液（批号20040501），间隔一定时间进针1次，共考察12 h，测定延胡索乙素峰面积积分值，结果表明本品12 h内稳定，RSD为0.97%。结果见表3。表3 稳定性实验结果（略）
2.7 重复性实验取本品50粒（批号20040501），去胶囊壳后，称定重量，混匀，称取5份，2 g/份，精密称定，按供试品制备方法，制备供试品溶液，照样品含量测定方法测定。结果见表4。结果表明本测定方法重复性较好。表4 重复性实验结果（略）
2.8 加样回收率实验取本品已知含量，同一批号（批号20040501）样品共6份，每份约1 g，精密称定，置平底烧瓶中。另取延胡索乙素对照品用浓氨试液-甲醇(1∶20)配制成浓度为0.055 mg/ml的溶液，每份样品中精密加入50 ml此溶液，称定重量，回流90 min，放冷，再称定重量，用浓氨试液-甲醇(1:20)补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液25 ml置水浴锅上蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至5 ml,用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
照上述供试品制备方法制备供试品溶液，按含量测定方法测定延胡索乙素含量，按以下公式计算回收率。结果见表5。结果表明本法回收率较高，方法可行。表5 延胡索乙素含量测定加样回收率的实验结果（略）
2.9 样品含量测定按上述方法制备供试品溶液和对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μl，依上述色谱条件测定10批样品延胡索乙素的含量（n＝4）。结果见表6。由表可知，本品的延胡索含量为0.068 5～0.083 5 mg/粒，暂定本品每粒含延胡索乙素（C21H25NO4 ）不得少于0.05 mg。表6 样品含量测定结果（略）
3 讨论
延胡索对中枢神经系统具有明显的镇痛作用，并能使肌肉松弛具有解痉效应，口服能产生类似吗啡以及可待因的效果，能缓解一般神经痛、头痛、腰痛、关节痛、月经痛、肿疡疼痛等。延胡索乙素是延胡索生物碱中具有较强镇痛作用的成分，因此选择延胡索乙素作为控制质量标准的指标之一，有一定意义。
在原剂型复方元胡止痛片的部颁标准中，只有3个理化性质鉴别，专属性不强，也没有含量测定项，显然已经不符合我国中医药现代化的要求。本实验室在参考文献［4～6］的基础上，先后考察了不同的预处理方法与流动相，最终选用了甲醇-水-三乙胺（65∶35∶0.5）为流动相，分离效果好。方法学考察结果表明，采用HPLC法测定延胡索乙素在复方元胡止痛胶囊制剂中的含量，稳定性好、精密度高、结果可靠、专属性强，而且它是一个主要的活性成分，这样就可以更好地控制产品质量，使产品更符合我国中药现代化的要求。
【参考文献】
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［6］龚青，周蒂，王碧娟.HPLC 法测定延胡索中延胡索乙素的含量［J］.中国现代应用药学杂志, 2000, 17 (4) ：315.
延胡索，又称元胡索、玄胡索，简称为延胡、元胡或玄胡，为罂粟科植物延胡索的块茎，是常用的止痛中药。据《本草纲目》记载：明代荆穆王妃胡氏，因食荞麦面时发怒，患了胃脘疼痛的疾病，发病时痛不可忍。医生用过吐、下、行气、化滞等各种药物，一入口马上吐出，不能奏效，大便已有3日不通。后来请名医李时珍诊视。李想到《雷公炮炙论》中的一句话：“心痛欲死，速觅延胡”，就用延胡索3钱(9克)，温酒调服。服后王妃即能受纳，不再吐出；过了一会大便通畅，胃痛停止，数年未再犯。
延胡索为何有如此神奇的止痛效果呢?原来，其药性温辛、味苦，入肝、脾经，有活血散瘀，行气止痛的功用，故可用于因血瘀气滞所致的脘腹疼痛、胸痹心痛、痛经、跌打损伤等症。著名方剂如金铃子散，用延胡索与川楝子等份配伍，研末服用，治胃脘胸胁疼痛、疝气疼痛、妇女经行腹痛等。现代研究表明：延胡索对中枢神经系统有止痛和催眠等作用，且有抑制胃液分泌及抗溃疡作用，无论是复方煎剂或研末口服，均有良好的止痛功效。临床也可用于局部麻醉。延胡索可谓是中药中的吗啡。
下面，介绍几款延胡索人药的单方验方：
妇女痛经元胡15克，血竭(冲)3克，蒲黄(包)、山楂、川楝子各10克，刘寄奴、五灵脂(包)各12克，柴胡、青皮各6克。水煎服，经前7天开始服用，连服10剂，服用3个月经周期，疗效显著。
胃下垂元胡3克，蓖麻子10粒，升麻6克。捣烂调醋，敷百会穴30分钟。敷药前先服补中益气汤10剂，效果更佳。
传染性肝炎症见发热恶寒，食欲减退，肝区痛引胸胁，恶心呕吐，厌油食，食后脘腹饱胀，肝功能减退，舌质边有瘀点，苔薄白微腻，脉细弦者。元胡12克，柴胡、白芍、厚朴各10克，枳实9克，甘草3克，郁金7克，丹参12克。水煎服。疏肝理气，活血止痛。主治传染性肝炎。
摘要 用薄层扫描色谱法测定了复方中药制剂中延胡索乙素的含量，方法回收率为102.2%±1.85%，在0.51～4.6μg范围内呈良好的线性关系，并用薄层色谱法对本品中的冰片进行了鉴别。
关键词 延胡索乙素；冰片；薄层色谱扫描
强痛宁是由延胡索乙素、高乌甲素、蟾酥、三七和冰片等9味中药材制成的复方中药胶囊制剂，主要用于治疗各种癌症引起的疼痛。本文采用薄层色谱扫描法对本品中的延胡索乙素进行含量测定［1］，并对该制剂中的冰片进行了定性鉴别［2］。
1 仪器与试药
CS-930薄层色谱扫描仪(日本岛津)；硅胶G、硅胶H(青岛海洋化工厂)；延胡索乙素(四川什都中药厂)；强痛宁(浙江医学科学院药物所)；其余试剂均为分析纯试剂。
2 延胡索乙素的含量测定
2.1 试剂的配制
2.1.1 精密称取延胡索乙素对照品适量，加氯仿制成0.5mg/ml的对照液。
2.1.2 供试品溶液的制备：取胶囊内容物0.1g,加二乙素胺3滴，加CHCl3定容至10ml，充分振摇后，于暗处放置30min，过滤，弃去初滤，收集续滤液，作供试液。
2.1.3 缺延胡索乙素的阴性对照液制备：按处方量配制一份缺延胡索乙素的试样，同供试药溶液同样处理，制得缺延胡索乙素的阴性对照品溶液。
2.2 实验条件
2.2.1薄层板：硅胶H-0.5% CMC-Na板,110℃活化1h;展开剂：苯-丙酮(7∶3),于层析缸内放置一小瓶氨水预饱和后，于暗处上行展开，展距为10cm左右。
2.2.2 扫描条件：单波长锯齿扫描，测定波长280nm，狭缝：3×2,扫描宽度为1cm,速度为0.2mm/每次。
2.2.3 线性考察：精密吸取延胡索乙素对照液(99.52%)1,3,5,7和9μl分别点样于同块薄层板上，按上述层析方法展开，扫描测定，测得的色谱峰面积与点样量进行线性回归，得回归方程如下:A=14161.2-25459.9X,r=0.996。结果表明，延胡索乙素在0.51～4.6μg之间点样量与色谱峰面积呈良好的线性关系。
2.2.4 薄层斑点稳定性试验：取延胡索乙素对照液5μl,点样于硅胶H板上，按上述条件展开，每间隔0.5h测定斑点的色谱峰面积积分值，结果表明，在2h内，斑点色谱峰面积基本稳定,RSD=2.1%(n=5),在3h内,RSD=4.16%。
2.2.5 精密度试验：精密吸取对照品溶液5μl，共6份，分别点于同块薄层板上，展开，测定斑点峰面积，其RSD=1.31%。
2.2.6 干扰因素的考察：按处方量配制缺延胡索乙素的成药，按供试品溶液制备方法制成空白对照液，进行测定，结果在延胡索乙素的色谱峰位置无吸收峰，表明其它组份对延胡索乙素无干扰，见附图。（略）
2.2.7 回收率试验：精密称取缺延胡索乙素的样品0.1g,分别准确加入延胡索乙素对照品适量(3～8mg),照样品测定项下的方法提取，并与延胡索乙素对照品溶液于同块薄层板上点样，展开后测定，计算其平均回收率102.2%±1.85%。
2.2.8 样品测定：精密吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl,均3份，分别交叉点样于同一薄层板上，依2.2项展开，取出，晾干，扫描，测定了3批复方强痛宁胶囊中的延胡索乙素的含量，分别为标示量的98.34%,95.24%和95.58%。
3 冰片的鉴别
对照液的配制：精密称取冰片对照品适量，用无水乙醇稀释成20mg/ml,作对照液，备用。
样品液的配制：准确称取样品0.5g,置一小烧杯中，盖一块玻璃片，用小火缓缓加热，在玻璃片上得到白色升华物，取升华物用1ml无水乙醇溶解，即得。
阴性对照液的配制：准确称取缺冰片的模拟样品0.5g,与样品液同法处理，得到缺冰片的阴性对照液。
层析条件：含0.5%的CMC-Na硅胶G薄层板,110℃活化1h,以石油醚-乙酸乙酯(19∶2)为展开剂，上行展开，晾干后，喷以5%的磷钼酸乙醇溶液显色，热风吹干，结果表明冰片的最低检测限为0.5μg。
分别取对照品液、样品液和阴性对照液5μl进行薄层色谱检查，结果表明阴性对照液不干扰样品的检查，且样品斑点明显。
作者单位：俞 滢(杭州 310004 杭州教育学院生物系；
徐红辉 浙江医科大学药学院97届毕业实习生)
参考文献
1 熊英，邬晓鸥.延胡索及其制剂复方镇痛丸中延胡索乙素的薄层扫描法测定.药物分析杂志，1996，16(5)∶327.
2 张贵君.常用中药鉴定大全.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1993∶26.
【摘要】 目的：测定延胡索及其与川楝子配伍中总生物碱的含量,研究中药配伍的合理性。方法：采用有机溶剂提取法对样品中生物碱进行提取，酸碱滴定法分别测定延胡索及延胡索与川楝子配伍水煎液中总生物碱的含量。结果：延胡索和延胡索与川楝子配伍中总生物碱含量分别为２．２１９ ｍｇ／ｇ和３．４２２ ｍｇ／ｇ，配伍后较延胡索单品中生物碱含量高１．２０３ ｍｇ／ｇ，经统计学处理，Ｐ ＜ ０．０１。结论：川楝子与延胡索配伍，对其生物碱的含量有显著的影响。
【关键词】 延胡索；川楝子；延胡索乙素；生物碱
配伍是中医用药的特色与优势，在长期的临床实践中，由于经验积累逐步形成了配伍理论，并把配伍理论视为中医组方用药的基础。开展配伍规律研究是中医药现代化的关键科学问题和难点，对于继承、发展和揭示方剂配伍理论具有重要的理论意义，也为有效指导临床用药和中药新产品的研发提供依据，有重要的现实意义。
延胡索（Ｒｈｉｚｏｍａ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ）为罂粟（Ｐａｐａｖｅｒａ ｃｅａｅ）紫堇属（Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ）植物延胡索Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｙａｎ ｈｕｓｕｏ Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ的干燥块茎，又名元胡、玄胡，为理气止痛、活血化瘀的常用药,常用于血瘀气滞所致机体各部位的疼痛［１］。其含有多种生物碱，如ｄ－紫堇碱（ｄ Ｃｏｒｙｄａｌｉｎｅ，即延胡索甲素）、ｄ１－四氢巴马亭ｄ１ Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ ｐａｌｍａｔｉｎｅ, 即延胡索乙素、原鸦片碱（Ｐｒｏｔｏｐｉｎｅ, 即延胡索丙素）、１－四氢黄连碱（Ｉ Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ ｃｏｐｔｉｓｉｎｅ, 即延胡索丁素）、ｄ１－四黄连碱（即延胡索戊素）、ｌ－四氢非洲防己碱（ｌ Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ ｃｏｌｕｍｂａｍｉｎｅ，即延胡索己素）、ｄ－紫堇鳞茎碱（ｄ Ｃｏｒｙｂｕｌｂｉｎｅ，即延胡索庚素）、ｄ－海罂粟碱（ｄ Ｇｌａｕｃｉｎｅ，即延胡索壬素及延胡索葵素）、ａ－别隐品碱（ａ Ａｌｌｏ ｏｒｙｐｔｏｐｉｎｅ, 即去氢延胡索甲素）等?眼２?演。主产于浙江。性味辛温、苦，归肝、脾经，能行血中气滞、气中血滞。所以古有延胡索主一身上下诸痛之说。延胡索止痛作用显著，作用部位广泛，且持久而不具有毒性，是一味比较优良的止痛药。现代药理研究证明，延胡索中含有多种生物碱，对中枢神经有较强的镇痛、解痉等作用。最具有代表性的是延胡索乙素，其镇痛作用较强，对轻度痉挛性疼痛的有效率大致与杜冷丁相当［２］。川楝子Ｆｒｕｃｔｕｓ Ｔｏｏｓｅｎｄａｎ为楝科植物川楝Ｍｅｌｉａ ｔｏｓｅｎｄａｎ ｓｉｅｂ．ｅｔ Ｚｕｃｃ的果实，其主要化学成分为川楝素、生物碱、树脂、鞣质。川楝广泛分布于中国的四川、湖北、湖南、河南、贵州及甘肃南部，全株有毒，果实毒性较大，可作为杀蛔虫药，民间也作为土农药用，在中华人民共和国药典中已有收载［３］。中国化学工作者对楝树皮的化学成分作了详细的研究，认为其树皮的主要成分为三萜类化合物苦楝素和异苦楝素［４］。近几年，还有不少人从根、皮中不断分离出新的物质如类固酮、萜类。从果实中分离出三萜类化合物如苦楝酮、苦楝醇、苦楝二醇、苦楝三醇和川楝素；苯环化合物如香草酸、香草醛；新木脂类如苦楝新醇［５］。国外从２０世纪６０年代起对楝树果实中化学成分的研究已经相当活跃，已报道的化合物有几十种，其中主要为三萜类化合物。昌军等?眼６?演从川楝子的水溶性成分中分离出两个新的苯丙三醇苷，同时首次分离出苏式—愈创木甘油。延胡索与川楝子的配伍在中医上称为金铃子散，是疏肝泄热、理气止痛的基本方剂，具有理气、活血、止痛的作用,为临床常用药，广泛用于胃痛、胁痛、腹痛等疼痛症的治疗。现代研究表明，延胡索镇痛的主要物质基础为延胡索乙素，复方金铃子散亦有显著的镇痛作用。川楝子与延胡索配伍时，川楝子对延胡索中主要的有效成分延胡索乙素的影响，目前未见报道。
本文通过对延胡索单品及延胡索与川楝子的配伍中生物碱含量的测定，研究中药配伍的合理性，揭示中药配伍后协同增效作用的物质基础。
１ 材料与试剂
延胡索、川楝子由甘肃中医学院方剂教研室提供。氯仿（天津博迪化工有限公司）、氨水、０．４５ ｍｏｌ／Ｌ硫酸、氢氧化钠试剂、甲基红—溴甲酚绿指示剂由兰州大学药物分析教研室提供。
２ 方法
２．１ 实验方法
２．１．１ 药品制备
将延胡索及川楝子生药品进行粉碎至颗粒，备用。
２．１．２ 生物碱的提取
由于生物碱盐类易溶于水，难溶于有机溶剂；而游离碱易溶于有机溶剂，难溶于水，所以对其水煎液用浓氨水进行碱化使之游离出生物碱，然后用有机溶剂氯仿进行提取。
２．１．３ 含量测定
采用酸碱滴定法，加入过量的硫酸使之与生物碱充分反应，然后用氢氧化钠滴定未反应的硫酸，从而得出与生物碱反应的硫酸的量。每１ ｍｏｌ的延胡索乙素消耗２ ｍｏｌ的硫酸，以延胡索乙素衡量其所含总生物碱的量，每１ ｍＬ ０．０１ ｍｏｌ／Ｌ的硫酸相当于７．１０８４ ｍｇ的延胡索乙素。
２．１．４ 指示剂的选取
影响指示剂变色的因素主要有温度、用量及溶剂３方面。温度的改变能够引起电离常数的变化，从而影响到指示剂的变色范围；指示剂用量的多少直接影响到准确度，通常被滴定试液为２０ ～ ３０ ｍＬ时，指示剂的用量约为１ ～ ４滴；溶液的电离常数不同，变色范围也不同。当指示剂为弱酸性时，变色范围向ｐＨ较大的方向改变；若为碱性时，则向ｐＨ较小的方向改变。综上考虑，本实验选取甲基红—溴甲酚绿指示剂，因其具有变色范围窄（４．６ ～ ５．０）、变色较灵敏（红色→蓝绿色）的优点，在滴定过程中其用量统一确定为４滴，以排除其用量所造成的影响。本实验对样品的滴定选取在同一时间段，以避免温度对其造成的影响。
２．１．５ 影响因素
除了上述对指示剂的影响外，酸碱滴定中本身还有很多可影响的因素。比如，滴定终点的确定、指示剂颜色变化的灵敏度及停止滴定时颜色的判断、滴定液及样品液的移取与读数等，直接影响着滴定的准确度，而这些操作误差影响是不可避免的；再者，药物中生物碱的含量较少，这些误差会使测定结果变化较大。在实验过程中，对不同样品的制备及滴定，尽量在平行条件下、在同一时间段内多次操作，以尽量避免其操作误差。
２．１．６ 计算公式
ＶＨ２ＳＯ４＝■ （１）
Ｍ生物碱＝■ × ７．１０８４ （２）
（１）式为计算滴定中未与生物碱反应所剩余的硫酸的量。
（２）式为计算生物碱的含量。
２．２ 延胡索总生物碱含量的测定
２．２．１ 样品液的制备
精密称取延胡索颗粒各１０ ｇ，平行２份,置于１０００ ｍＬ烧杯中加水第１次４００ ｍＬ，第２次
２００ ｍＬ煎煮２次，每次微沸２５ ｍｉｎ，用脱脂棉过滤后合并滤液，加水调至一定体积（５００ ｍＬ），移入分液漏斗中，以浓氨水调ｐＨ值至１１ ～ １２，用氯仿萃取３次１００ ｍＬ，８０ ｍＬ，４０ ｍＬ，合并萃取液，加无水硫酸钠３ ｇ脱水后，回收氯仿至４０ ｍＬ左右，转入５０ ｍＬ容量瓶中，加氯仿至刻度，备用。
２．２．２ 总生物碱含量测定
精密吸取样品液５ ｍＬ于烧杯中，精确加入０．０１ ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液２０ ｍＬ，置于水浴上除去氯仿，加甲基红—溴甲酚绿指示剂０．１ ％甲基红醇液与０．２ ％溴甲酚绿醇液以２ ： ３比例混合）４滴，用０．０２ ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液滴定，终点由红色转为蓝绿色。滴定结果见表１。
２．２．３ 计算方法
总生物碱含量以延胡索乙素计算，每毫升０．０２ ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液相当于７．１０８４ ｍｇ延胡索乙素，以延胡索乙素计算其总生物碱含量。结果 见表２。
２．３ 延胡索与川楝子配伍中生物碱含量的测定
２．３．１ 样品液的制备
精密称取延胡索颗粒各１０ ｇ、川楝子颗粒各
５ ｇ（以延胡索：川楝子量为２ ： １配伍），平行２份，置于１０００ ｍＬ烧杯中，加水第１次４００ ｍＬ，第２次２００ ｍＬ煎煮２次，每次微沸２５ ｍｉｎ，用脱脂棉过滤后合并滤液，加水调至一定体积（５００ ｍＬ），移入分液漏斗中，以浓氨水调ｐＨ值至１１ ～ １２，用氯仿萃取３次１００ ｍＬ，８０ ｍＬ，４０ ｍＬ，合并萃取液，加无水硫酸钠３ ｇ脱水后，回收氯仿至４０ ｍＬ左右，转入５０ ｍＬ容量瓶中，加氯仿至刻度，备用。
２．３．２ 总生物碱含量测定
精密吸取样品液５ ｍＬ于烧杯中，精确加入０．０１ ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液２０ ｍＬ，置于水浴上除去氯仿,加甲基红—溴甲酚绿指示剂４滴，用０．０２ ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液滴定，终点由红色转为蓝绿色。滴定结果见表１。
２．３．３ 计算方法
其生物碱含量以延胡索乙素为标准衡量计算，每毫升０．０２ ｍｏｌ／Ｌ硫酸溶液相当于７．１０８４ ｍｇ延胡索乙素，以延胡索乙素计算其总生物碱含量。结果见表２。
３ 结果
延胡索和延胡索与川楝子配伍中总生物碱含量分别为２．２１９ ｍｇ／ｇ和３．４２２ ｍｇ／ｇ，较延胡索单品中生物碱含量高１．２０３ ｍｇ／ｇ。为了研究中药延胡索与川楝子配伍后，川楝子中化学成分对延胡索中生物碱含量的影响，比较单品与配伍后生物碱含量变化的大小，对所测得的延胡索单品以及延胡索与川楝子配伍后的生物碱含量的测定结果进行了ｔ检验。结果表明：两者中生物碱的含量具有非常显著性差异Ｐ ＜ ０．０１。说明配伍后生物碱的含量明显提高，这不仅是由于川楝子中含有少量的生物碱，川楝子与延胡索配伍，对延胡索中生物碱的溶出率有一定的提高作用，而且中医方剂配伍后，具有药理上的协同作用，即化学成分的变化及其药物之间的相互作用影响其含量，使之表现出活性增大、疗效增强。
４ 结论
川楝子与延胡索配伍后，其生物碱的含量显著提高，川楝子中所含的生物碱对其与延胡索配伍生物总碱的含量具有一定的影响。另外，中医方剂配伍后，其化学成分间相互影响，对其配伍后生物总碱的含量也具有一定影响。
近年来对川楝子的研究多集中在对其毒性及川楝素方面的研究，主要研究方向为农业杀虫及化工农药。在所含生物碱方面，大量参考文献只提及到其含有生物碱，而对其结构、化学性质等方面没有具体报道。延胡索中含有的生物碱种类较多，达２０余种，成分也较为复杂。川楝子与延胡索配伍后，川楝子中的某些化学成分对延胡索中生物碱的溶出率可能具有一定的促进作用，延胡索与川楝子中的一些化学成分所发生的化学反应对延胡索中所含生物碱的成分及提取具有一定的影响。
金铃子散为中医疏肝泄热、理气止痛的传统方剂，应用已有千年的历史。在大量的临床检验及观察中发现，金铃子散在理气止痛方面的药效较延胡索显著，这可能就是由于上述因素造成的，这在中医方剂配伍理论中解释为协同增效作用。对该实验具体增效的原理还有待于进一步的药理实 验加以证明。
【参考文献】
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［３］国家药典委员会． 中华人民共和国药典［Ｍ］． 北京：化学工业出版社，２００５：２９．
［４］杨光忠，陈玉，张世琏，等． 苦楝树皮化学成分的研究［Ｊ］． 天然产物研究与开发，１９９８，１０４：４５－４７．
［５］汪文陆，赵善欢． 苦楝果实中化学成分进一步研究及生物活性测定［Ｊ］． 华南农业大学学报，１９９３，１４３：６４－６９．
［６］昌军，宣利江，徐亚明． 川楝子中两个新的苯丙三醇甙［Ｊ］． 植物学报，１９９９，４１１１：１２４５－１２４８．
作者单位：１．甘肃省医药职工中专学校，甘肃 兰州 ７３００２０；２．甘肃中医学院，甘肃 兰州 ７３００００；３．兰州大学药学院，甘肃 兰州 ７３００００
胃得康片是佛山冯了性药业有限公司生产的中药成方制剂，由延胡索、佛手、鸡骨香、白及、枯矾、石菖蒲6味药组成，具有行气止痛的功效，用于气滞胃痛、胃及十二指肠溃疡疗效较好。为更好地控制该产品的质量，作者采用薄层扫描法对其处方中的君药延胡索中所含主要成分延胡索乙素进行含量测定。实验结果表明，该方法操作简便，结果可靠，能有效控制产品的内在质量。
1 仪器与试药
岛津CS-930双波长薄层扫描仪。延胡索乙素由中国药品生物制品检定所提供，批号726-9004。胃得康片由佛山冯了性药业有限公司生产。试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 对照品溶液的配制 取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2．2 供试品溶液的配制 取本品30片，研细，取约5g，精密称定，置锥形瓶中，加乙醚40mL、浓氨溶液2mL，混匀，放置24h后超声处理15min，滤过；药渣用乙醚洗涤3次，每次10mL，合并滤液及洗液，用10％醋酸溶液振摇提取4次(15，10，10，10 mL)，酸液用浓氨溶液调节pH值至10～11，再用氯仿振摇提取3次，每次15mL，合并氯仿提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解并定容至1mL，作为供试品溶液。
2．3 薄层色谱条件薄层板：用1％氢氧化钠加0.3％羧甲基纤维素钠溶液制备。展开剂正己烷-氯仿-甲醇(7.5：4：1)。显色剂稀碘化铋钾试液。
2．4 薄层扫描条件单波长反射法锯齿色谱扫描，狭缝0.4mm×0.4mm，线性化参数Sx=3，灵敏度中等，测定波长510nm。
2．5 标准曲线及线性范围 用定量毛细管精密吸取延胡索乙素对照品溶液2，3，4，5，6μL，分别点于同一块薄层板上，按拟定的色谱和扫描条件，测定各斑点面积的积分值，以点样量为横坐标(X)，斑点峰吸收面积积分值为纵坐标(Y)，得一不通过原点的直线。回归方程为：Y=29770+17850X，r=0.9993线性范围为2.12～6.36μg。
2．6 精密度实验同板精密度试验：在同一块薄层板上，重复点供试品溶液5μL 5个点，展开，显色，扫描，测定，结果RSD=2.7％(n=5)。异板精密度试验：取同一批号供试品溶液5μL，点样于5块薄层板上，展开，显色，测定，结果RSD=2.9％(n=5)。
2。7 稳定性实验 取供试品溶液和对照品溶液，点样、展开、显色，每30min至1h测定1次样品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算含量，连续测定6h。结果表明6h之内，样品含量基本不变(RSD=2.4％，n=8)。
2。8 重复性实验 精密称取同一批号的样品约5g，共5份，按上述方法提取并制备成供试品溶液，取上述供试品溶液5μL、对照品溶液2，4μL，分别在5块薄层板上点样，展开，显色，分别测定样品含量，结果RSD=2.9％(n=5)。
2．9 加样回收试验 取已测得含量的样品，精密称取约5g，各5份，分别加入延胡索乙素对照品溶液(浓度为1.065 g/L)各0.5mL，精密量取，挥干溶剂，按供试品溶液制备方法提取，将供试品溶液5μL 、延胡索乙素对照品溶液2，6μL，交叉点于同一用1％氢氧化钠与0.3％羧甲基纤维素钠制备的硅胶G薄层板上，按拟定的色谱和扫描条件，分别测定各斑点面积积分值，计算出延胡索乙素的含量，减去已知样品中延胡索乙素的量，计算加样回收率，平均回收率为101.5％，RSD=1.9％(n=5)。
2．10 样品含量测定 取3批样品按供试品溶液制备方法操作。精密吸取样品溶液5μL、对照品溶液2，4μL，分别交叉点于同一薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇(7.5：4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，显色，扫描，测得3批样品中延胡索乙素的含量。
3 讨论
3.1 提取方法的选择参考文献n刮，根据胃得康片的处方工艺和片剂的特点，拟定了提取胃得康片延胡索中延胡索乙素的不同提取方法。
根据实验结果显示，用乙醚、氨水浸泡24h后，超声提取，用10％醋酸提取，提取液碱化后用氯仿萃取，蒸干，用甲醇定容的方法。此批样品所用的延胡索药材含延胡索乙素为0.51mg/g，每片含延胡索药材为0.072g，故所选用的方法提取较完全。
3．2 由于用稀碘化铋钾作显色剂，显色剂中含有大量的水分，薄层板显色后，样品斑点非常不稳定，而且延胡索乙素浓度稍高，显色斑点在显色几分种后就会出现斑点中心变白，而且白斑不再显色，故采用斑点显色后在烘箱(100℃)烘3min，待水分消失后，显色稳定。
