主题:促性腺激素

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促性腺激素释放激素激动剂在妇科疾病中的应用

    促性腺激素释放激素激动剂(GnRh-a)是将促性腺激素释放激素(GnRH)第6,10位上的氨基酸加以替换得到新的结构。新产生的肽链结构稳定,半衰期延长(1~6h),与相应受体的结合能力也增加100~200倍。 GnRh有双向调节作用,正常情况下通过脉冲式分泌,经下丘脑一垂体一门脉循环进入垂体前叶,引起垂体前叶的促性腺激素也呈脉冲式释放,刺激黄体生成素(LH)与卵泡生成素(FSH)的分泌,从而调节体内的内分泌系统和生殖系统,GnRh持续分泌/非脉冲式分泌消耗垂体的GnRH受体数量,产生垂体脱敏作用抑制促性腺激素激素的释放,利用这种抑制效应作用,在临床可针对治疗不同的性甾体细胞依赖性疾病。如性早熟、子宫内膜异位症、子宫肌瘤等等。
    子宫内膜异位症
    郎景和认为,内异症是一种真正的现代病和未来的多发病。它的治疗已越来越得到重视。2009年子宫内膜异位症诊治指南明确指出治疗内异症可供选择的药物主要有口服避孕药、高效孕激素、雄激素衍生物以及GnRHa四大类。据道GnRHa治疗内异症的症状改善率为85%~90%,腹腔镜下病灶改善率为50%~80%,停药后妊娠率为42%~60%,复发率为16%一59%。对于给药时机与用量,Olive   认为,从黄体期中期开始给药比从月经初期开始给药疗效要快。Masahiro等  通过1个24周的临床试验提出单用GnRHa反减疗法,结果说明,适当减少GnRHa用量或者使用次数,可达到既保证治疗效果又防止副作用的目的。于红侠  报道,给予GnRHa退缩疗法巩固治疗子宫内膜异位症有一定的临床疗效,可预防和减少复发,而且副反应小。对内分泌代谢及骨密度无明显影响。
    子宫肌瘤
    子宫肌瘤是激素依赖性疾病,在绝经后可萎缩。Gn.RHa治疗子宫肌瘤或作为术前预处理药物已经应用于临床,研究发现其对肌瘤中多种生长因子、肌瘤细胞的增殖及凋亡、肌瘤的组织形态及超微结构等均有一定影响,从而导致肌瘤缩小及血供减少。VandeVen   对使用GnRha患者肌瘤及肌层雌三醇变化研究显示,GnRHa对肌瘤中E3及E2的下调作用弱于对肌层的作用,即虽经GnRHa治疗,肌瘤中仍有持续的雌激素刺激,GnRHa只是下调了其水平,停GnRHa后,被下调的雌激素回升,肌瘤恢复生长。加之停GnRHa后,下丘脑、垂体、卵巢轴的功能恢复,被下调的性激素重新上升,导致停GnRHa后肌瘤的反弹。然而,作为一种非手术治疗,长效、缓释GnRHa可用于即将绝经的妇女,随着绝经的发生,子宫肌瘤有可能自然萎缩。
    辅助生殖
    在辅助生殖技术中,用药物诱导排卵之前加用GnRHa是一种普遍接受的卵巢刺激方法,在世界范围内被广泛使用。有效地控制和促进卵巢内多个卵泡的同步化发育和成熟,抑制内源性LH峰,阻遏卵泡过早黄素化及卵子早熟,提高妊娠率。根据其用药时间及作用类型不同分为长方案、短方案、超短方案。有文献报道个别病人在应用短效Gn.Rha后发生妊娠或在使用之前已妊娠,确定妊娠后应随即停用GnRHa,早期暴露于GnRHa,胎儿畸形率无增高,对继续妊娠无影响,给予安胎治疗可分娩正常婴儿。
    围绝经期异常子宫出血
    临床上常见心脏瓣膜置换术后,长期口服华法林等抗凝剂的患者,凝血功能降低,月经频发、量多,经期延长,长期下去可致严重贫血,贫血对心肌造成损害,恶性循环,严重影响患者心理及身体健康。切除子宫可能根本解决问题,患者多不能耐受手术,对于近绝经期妇女可予GnRha肌注,使其平稳过渡至绝经期。
    中枢性性早熟
    中枢性性早熟是由于下丘脑一垂体一性腺功能提前激活,卵巢分泌的雌激素使患者过早出现青春期生理变化,骨骺提前闭合,累及成年最终身高。应用GnRHa的指征是中枢早熟发育进程快伴骨龄进展快者,且效果较好。对发育进程缓慢者不需治疗,此类早熟其最终身高不一定受损。马华梅  研究发现,GnRHa治疗过程中平均每半年成年身高的改善仅约为1.2cm。因此,约需2年的疗程才能使成年身高提高5cm左右。所以,足够的疗程是保证足够的身高净获的另一重要因素。Tanaka   认为,GnRHa治疗对远期生殖功能无不利影响。
    化疗后卵巢保护
    妇科三大恶性肿瘤化疗药物均为性腺毒性,可导致卵巢萎缩和卵泡储存量减少。放疗2周后,即发生FSH上升,E2下降至绝境水平等卵巢衰竭表现。Meirow等 对用环磷酰胺(cTX)化疗的小鼠同时加用GnRHa,与对照组比较,可以减少原始卵细胞的损害。Ataya等 给予恒河猴CTX化疗并同时给予GnRHa,与对照组比较,也证明GnRHa能减少CTX引起的原始卵细胞的损害。B lumenfe ld Elo]通过14~40岁的60例患者和60例对照组者进行临床试验,评估GnRHa对联合化疗的卵巢是否有保护作用,结果肯定。该研究也证明了化疗与GnRH a联合应用可以保护卵巢功能。研究证实GnRH a能通过GnRH介导的细胞通路阻止化疗药物引起的卵巢颗粒细胞的损伤。
    GnRha虽有良好的治疗效果,但其副作用限制了它的长期应用,一般疗程在6个月之内,而停药后往往有病情的复发,需要长期或反复应用,且价格昂贵,GnRha各种药物的最佳剂量、给药时间、副作用的防治及是否有更好的药物替代还有待于进一步研究。

 

日期:2013年6月9日 - 来自[妇产科学]栏目
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促性腺激素释放激素激动剂对卵巢黄素化颗粒细胞甾体激素合成急性调节蛋白表达有影响

《中华妇产科杂志》2007年第42卷第9期 自上世纪90年代开始,促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin-releasinghormoneagonist,GnRH—a)被广泛用于辅助生育技术领域控制性超排卵治疗中。近年来,人们逐渐认识到GnRH-a在提高获卵数量和妊娠率的同时,存在着对垂体和卵巢黄体的过度抑制作用。前期研究显示,在不同剂量GnRH-a降调节方案中,启动日血清黄体生成素(LH)、雌二醇水平以及人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射日的LH、雌二醇、孕酮水平存在差异。
日期:2009年7月30日 - 来自[妇科与产科]栏目

人绒毛膜促性腺激素β亚基在大肠杆菌中的表达

人绒毛膜促性腺激素β亚基在大肠杆菌中的表达

中国免疫学杂志 2000年第8期第16卷 分子与细胞免疫学

作者:张乐鸣 刘东海 董虹 张顺

单位:张乐鸣(宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室,宁波 315010);刘东海(宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室,宁波 315010);董虹(宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室,宁波 315010);张顺(宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室,宁波 315010)

关键词:人绒毛膜促性腺激素β亚基;序列分析;基因表达;复性

  摘 要 目的:以该室克隆的PCRⅡ/hCGβ载体为模板,亚克隆到表达载体PG5中使hCGβ基因在大肠杆菌中进行高效表达。方法:改变部分hCGβ序列,得到重组PG5/hCGβ载体,经序列分析证明,再转化到表达菌BL21中表达,所得包涵体经过柱纯化,复性,免疫发光分析和动物试验测定其活性。结果:经SDS-PAGE电泳在18 kD左右有一条明显的新增蛋白带,与预期的分子量相符,并用Western印迹证实,rhCGβ约占菌体总蛋白的10%,活性为7.8 U/mg。结论:重组hCGβ在大肠杆菌中获得了较高水平的表达。且经复性后有较高的免疫活性和生物活性。

  中国图书分类号 R392.11

Expession in E.coli of human chorionic gonadotropin subunit β cDNA

ZHANG Le-Ming,LIU Dong-Hai,DONG Hong et al.

  Laboratory of Tumor Molecular Biology,Ningbo No.2 Hospital,Ningbo 315010

  Abstract Objective:Using the previously cloned vector PCRⅡ/hCGβ as the template,subclone the aimed gene into expression vector PG5,make hCGβ expressed efficiently in E.coli.Methods:Several neucleotides of hCGβ in recombinant PCRⅡ/hCGβ were altered through PCR method,then the modified hCGβ was inserted into PG5,proved by sequencing analysis,and transformed E.coli host strain BL21.The expressed inclusion body was extracted,dissolved,and refolded.Its immunological and physiological activities were measured by immunoflurescent assay and animal experiments respectively.Results:The results of SDS-PAGE electrophoresis and western blot demonstrated that the IPTG induced bacteria expressed an extra band of 18 kD in comparison with the uninduced ones.The expression level was more than 10% of the total cell lysate,and the immunological activity,7.8 u/ml.Conclusion:The recombinant PG5/hCGβ was effeciently expressed in E.coli,and the recombinant protein has high immunological and physiological activities.

  Key words hCGβ Sequencing analysis Gene expression Refolding

  人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin,hCG)是由胎盘滋养层合体细胞合成的激素,促进胚泡发育,维持妊娠。hCG与TSH(促甲状腺激素)、FSH(促卵泡激素)、LH(黄体生成素)等同为糖蛋白激素家庭一员[1]。这些激素都具有相同的α亚基和各自独特的β亚基。α亚基与信息传导有关,而β亚基则产生其激素效应[2]。作为抗原,β亚基比整个hCG分子更具有特异性,所以认为hCGβ亚基的研究具有真正的实用价值。

  我们在以前的工作中采用新鲜的人绒毛膜组织,用异硫氰酸胍酚法抽提mRNA,经逆转录生成cDNA,用PCR方法对cDNA进行扩增,然后直接克隆至PCRⅡ载体中[3]

  本研究中,我们在hCGβ亚基cDNA克隆的基础上重新设计引物,用PCR方法扩增目的DNA,将其克隆到表达质粒PG5中,经序列分析证实为正确的目的DNA后,转化到表达菌BL21中,进行表达。

  1 材料与方法

  1.1 材料

  1.1.1 酶及主要试剂 限制性内切酶NdeI、BamHI和T4DNA连接酶购自Promega公司,PCR试剂盒购自PE公司,低分子蛋白标准购自上海东风生物技术有限公司。

  1.1.2 载体与菌株 PCRⅡ/hCGβ质粒,大肠杆菌表达载体PG5,受体菌E.coli DH5α,表达菌E.coli BL21均为本室保存。

  1.1.3 PCR引物 上游引物5’-TGA ACA TAT GGA GAT GTT CAA GGG GCT-3’;下游引物5’-CTA TGG ATC CTA CCG TGC GAG GAT CGG GG-3’;由大连宝生物工程公司合成。

  1.2 方法

  1.2.1 hCGβ的PCR反应 用PCRⅡ/hCGβ质粒作为PCR反应的模板,每100 μl反应液中含KCl 50 mmol/L,Tris-Cl 10 mmol/L(pH8.3),MgCl2 4 mmol/L,dNTPs 200 μmol/L,引物400 nmol/L,TaqDNA聚合酶2.5 U,在PE-TCI上进行扩增。95℃变性5 min后,95℃30 s,55℃30 s,72℃1 min共30个循环,最后72℃延伸5 min。

  1.2.2 表达载体的构建 将PCR扩增回收的hCGβ基因片段和PG5载体,分别用NdeI和BamHI进行双酶切,酶切产物用1.5%琼脂糖电泳分离,经透析袋回收,纯化后用T4DNA连接酶连接。

  1.2.3 包涵体的纯化 rhCGβ主要存在于包涵体中。超声破碎离心后的沉淀依次用①1 mg溶菌酶,30 mmol/L Tris-Cl(pH=8.1),1 mmol/L EDTA,20%蔗糖,洗涤1次。②50 mmol/L乙酸钠(pH=5.0),1 mmol/L EDTA,1%Tris X-100洗涤3次。③20 mmol/L Tris-Cl(pH=8.1),5 mmol/L EDTA,2%脱氧胆酸盐,室温20 min。④20 mmol/L Tris-Cl(pH=8.1),5 mmol/L EDTA洗涤1次。⑤8 mol/L尿素,50 mmol/L DTT,50 mmol/L Tris-Cl(pH=8.1)溶解后纯度可达90%以上,再经Sephadex G-150过柱后,纯度可达95%以上。

  2 结果

  2.1 PCR扩增结果 经过30个循环的PCR产物,用1.5%琼脂糖凝胶电泳,PEGM3Z/HaeIII分子量标准显示在500 bp处有一条DNA带,与预期的长度相符。

  2.2 重组表达质粒的酶切及序列分析 筛选克隆阳性的菌落,增菌并提取质粒DNA,用NdeI/BamHI双酶切和PCR扩增两种方法鉴定(图1)。hCGβ的序列分析在ABI PrismTM377全自动测序仪上进行,hCGβ的序列分析结果表明所克隆的基因序列与Genbank上的hCGβ序列完全一致。

  2.3 rhCGβ在大肠杆菌中的表达 PG5/hCGβ重组质粒转化E.coli BL21的感受态细胞,挑选阳性菌落培养至600 nm波长的OD在0.4~0.6之间时,加0.5 mmol/L IPTG,继续培养4 h后,用12%的SDS-PAGE电泳鉴定表达产物[4]。染色后可见在18 kD左右有一条明显的新增蛋白带,与预期的分子量相符,激光密度扫描计算此蛋白质量约占菌体总蛋白的10%左右,未经IPTG诱导的阳性细菌并无此带(图2)。

  2.4 表达产物的Western印迹鉴定 经SDS-PAGE电泳后转移至硝酸纤维膜,与DAKO公司兔抗人hCG多克隆抗体作Western印迹。结果证明rhCGβ的分子量约为18 kD,且为单一条带。说明与兔抗人hCG多克隆抗体有特异的反应(图3)。

  2.5 包涵体的复性及初步活性测定 经SephadexG-100过柱收集活性主峰,在50 mmol/L Tris-Cl,1 mmol/L EDTA,1% Tris X-100缓冲条件下用1 mmol/L谷胱甘肽(还原型)0.1 mmol/L谷胱甘肽(氧化型)4℃缓慢复性过夜,4℃浓缩,用Beckman Access全自动免疫发光分析仪检测活性为7.8 U/mg。

  2.6 初步动物活性实验(按中国药典) 取雌性昆明鼠,鼠龄18~21 d,每一种复性方法及空白对照各5只,每天用蛋白浓度为0.1 mg/ml、免疫活性为500 mU/ml的复性液0.2 ml连续3 d,注射小鼠,第4天解剖观察子宫大小。结果:阴性对照的小鼠子宫重(65±5)mg,注射谷胱甘肽复性液后小鼠子宫重(105±5) mg,有显著的差异。

图1 PG5/hCGβ限制性内切酶酶切电泳图谱

  Fig.1 Electrophoresis of PG5/hCGβ after restrictive endonucleases digestion

  Note:1.pEGM/Hae Ⅲ maker;2.PG5/hCGβ digested by Nde I/BamH I;3.PG5/hCGβ;4.λDNA digested by EcoR I/HinDⅢ(marker)

图2 PG5/hCGβ表达产物SDS-PAGE电泳图谱

  Fig.2 SDS-PAGE analysis of PG5/hCGβ after expression products

  Note:1.Protein molecular weight markers;2.Cell lysates from uninduced BL21;3-5.Cell lysates from BL21,IPTG induced for 3,4,5 h respectively;6.Purified inclusion body;7.Renatured inclusion body lysates

图3 Western blot免疫印迹分析

  Fig.3 Western blot analysis by enhanced chemiluminescence of cell lysates from uninduced

  Note:Lane1 and Lane2 (induced) BL21 cells that contained PG5/hCGβ plasmid

  3 讨论

  自1980年Fiddes等在Nature上发表了hCGβ的mRNA序列后[5],对hCGβ的分子生物学研究日益引起大家的重视。hCGβ作为胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白激素,在胚泡发育的早期妊娠中占有重要的地位。本研究用分子生物学方法从绒毛膜组织中成功地分离到了hCGβ-cDNA,序列分析结果表明,分离到的cDNA片段包涵hCGβ整个编码区及部分非编码区及部分非编码区序列,此cDNA含有完整的开放阅读框架,经同源性分析表明同Fiddes发表的序列完全一致。

  此次在hCG引物设计时加上了NedI和BamHI两个限制性内切酶的位点,终止密码子和一些保护性碱基,减少了大肠杆菌的毒性反应。从实验结果可见,修改序列后的细菌生长快速,而未经修改的细菌生长缓慢。PG5是一个高效表达载体。构建后的载体,经过序列分析证实基因序列的符合是表达所必需的,改变表达条件,进一步提高蛋白表达量,是我们目前要做的工作,这是降低成本,进行大规模生产的前提。我们已经得到了较高的免疫活性,而其生物活性取决于23与72,9与90两对半胱氨酸二硫键之间的正确结合,从而使hCGβ蛋白分子维持在生理构象[6]

  宁波市自然科学基金资助项目(编号9827)

  作者简介:张乐鸣,男,42岁,博士,教授,主任医师,主要研究肿瘤外科及分子生物学

  4 参考文献

  [1]Talwar G P,Om Singh R,Chatterjee P N et al.A vaccine that prevents pregnancy in women.Proc Natl Acad Sci USA,1994;91:8532

  [2]颜建华,朱锡华.绒毛膜促性腺激素、生长激素的基因调控.国外医学*分子生物学分册,1993;15(1):13

  [3]张乐鸣,刘东海,董 虹.人绒毛膜促性腺激素β亚基cDNA的克隆的初步报告.宁波医学,1996;8(4):206

  [4]Sambrook J,Fritsch E F,Maniatis T.Molecular cloning-A laboratory mannual.2nd ed.New York:CSH,1989:881

  [5]Fiddes J C,Goodman H M.The cDNA FOR the β-subunit of human chorionic gonadotropin suggests evolution of a gene by readthrough into the 3'-untranslated region.Nature,1980;286(14):684

  [6]Huth J R,Mountjoy K,Perini F et al.Domain-dependent protein folding is indicated by the intracellular kinetics of disulfide bind formation of hunam chorionic gonadotrpin β subunit.J Biol Chem,1992; 267:21396

[收稿:1999-04-04 修回:1999-10-25]


日期:2009年2月21日 - 来自[检验医学]栏目
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促性腺激素释放激素阻断剂能够促进前列腺癌的治疗吗?

SOURCE: Trends in Endocrinology & Metabolism 来自英国的研究人员针对促性腺激素释放激素(gonadotropinreleasinghormone,GnRH)阻断剂的优缺点进行了全面的综述,分析了临床前以及临床的有关资料。他们认为雄激素消融是前列腺癌的一种基本治疗方法,包括手术切除以及药物治疗,如雌激素、抗雄激素和/或 GnRH 类似物。而GnRH 阻断剂是通过直接阻断GnRH受体发挥作用,其优点是不会引发起始的促性腺激素和睾丸激素的产生,也不会引起卵泡刺激素持续的抑制;缺点是可以增加组织胺的释放。对 GnRH 阻断剂的研究应该进一步深入进行。
日期:2008年12月25日 - 来自[肿瘤相关]栏目

人绒毛膜促性腺激素的特性及其临床应用

2008年09月16日 《中华妇产科杂志》2008年第43卷第1期 医学空间(MEDcyber.com)9月16日消息,人绒毛膜促性腺激素(hCG)是糖蛋白激素家族中的一员,一旦妊娠后绒毛生成,即可在血循环中检测到。hCG在正常与异常妊娠期有一定的分泌规律,滋养细胞的数量和活力与hCG的分泌密切相关,因此,血清hCG测定能够在临床上诊断早孕、异位妊娠、先兆流产、葡萄胎及妊娠滋养细胞肿瘤(GTN)等,并在治疗中和治疗后的随诊中成为重要监测指标。
日期:2008年9月16日 - 来自[妇科与产科]栏目
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单一性低促性腺激素型性腺功能减退症患者血清脂联素与睾酮水平的关系

2008年02月28日 《中华内分泌代谢杂志》-2007年23卷5期 -392-395页 医学空间(MEDcyber.com)2月28日消息,该项研究目的是观察对单一性低促性腺激素型性腺功能减退症(IHH)患者脂联素与睾酮水平的关系。采用方法是通过分析临床资料及激素测定、促性腺激素释放激素激发试验确诊IHH,检测23例IHH患者和15名正常男性血清脂联素和睾酮水平。实验结果与体重指数、腰臀比以及血压均匹配的正常对照组相比,IHH患者睾酮水平显著低于正常[(0.23±0.18 vs 4.20±1.90)μg/L,P〈0.01],其脂联素水平显著升高[(11.3±1.8vs8.7±1.2)mg/L,P〈0.01]。对两组进行相关分析显示,血清脂联素水平与睾酮水平呈负相关(r=-0.570,P〈0.01)。所以得出结论,IHH低睾酮水平人群中脂联素水平显著升高,提示脂联素与睾酮水平之间存在密切关系。
日期:2008年3月4日 - 来自[男科]栏目

中枢神经系统对促性腺激素分泌的调节作用研究中动物的选择与应用

  

  不同动物的中枢神经系统对垂体促性腺激素分泌的调节是有很大差异的。如灵长类和大鼠的垂体以同样的方式对促黄体素释放激素起反应,并以同样的形式被大剂量雌激素或雄激素所抑制。这两种动物的中枢神经系统,在自发性排卵中都是必不可少的,这是它们的共同点。但调节大鼠促性腺激素释放的中枢是视前结节系统,若视前区受损,则在排卵前雌激素不能导致促黄体激素的释放。而这一区域受损不影响恒河猴促黄体激素的释放,因为恒河猴促性腺素释放的调节中枢是结节漏头斗状系统,这是它们的不同点。

  在中枢神经系统对促性腺激素调节的研究中,大鼠是常用的动物模型,因这方面已积累了大量的有关研究资料:价格便宜,易于饲养,有规律的性周期便于检测,且周期短,易于安排实验,排卵前有自发的LH峰,所得的结果一般易于在猴子身上得到重复。

  阴道涂片可以准确地判断大鼠和小鼠动情周期的各个阶段,从而可推测排卵前LH峰及排卵,但此方法很少用于田鼠,因为田鼠在动情周期阴道有渗出物,所以不一定要做阴道涂片。推测灵长类LH峰,须测定外周血的孕激素水平,如单独根据月经出血期来推测有可能导致判断的错误。

  大鼠、小鼠和田鼠的黄体期不能自发地变成功能性黄体,在正常情况下,需交配诱发黄体激素的分泌,而恒河猴和人则自发性功能黄体。家兔和猫是诱发性(交配)排卵,一旦排卵发生,则黄体能自发地变为功能性的。

日期:2007年9月25日 - 来自[动物学技术]栏目
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人绒毛膜促性腺激素检查方法



人绒毛膜促性腺激素检查方法


  成熟女性因受精的卵子移动到子宫腔内着床后,形成胚胎,在发育成长为胎儿过程中,胎盘合体滋养层细胞产生大量的人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG),可通过孕妇血液循环而排泄到尿中。当妊娠1-2.5周时,血清和尿中的HCG水平即可迅速升高,第8孕周达到高峰,至孕期第4个月始降至中等水平,并一直维持到妊娠末期。

正常妊娠妇女血清中HCG平均值。HCG是由两个非共价键相连的肽链组成的糖蛋白激素。其单个亚基不具有生物活性,当连接成完整化合物时始具活性,分子量约为4.7万。其主要功能就是刺激黄体,有利于雌激素和黄体酮持续分泌,以促进了宫蜕膜的形成,使胎盘生长成熟。HCG-α亚单位的氨基酸排列与黄体生长激素(LH)α亚单位相似,故用完整的抗HCG分子的抗体测定HCG时与LH间有免疫交叉反应。但它们的β亚单位各不相同。因此为避免交叉反应,目前均采用高将近的抗β-HCG单克隆抗体进持特异的HCG检查,近年来还有报道采用抗β-HCG羧基末端肽单克隆抗体以进一步提高检测的敏感性和特异性。

  胶乳凝集抑制试验和血凝抑制试验。从1960年开始,国外的Wide及Gemzell,开始采用胶乳凝集抑制的试验方法(latex agglutination inhibitiontest,LAIT)技术测定尿中HCG,即将尿液与抗 HCG血清作用后,加入已吸附抗原的胶乳,如尿中含HCG较多,则先与抗 HCG结合,不再有多余的抗HCG与胶乳产生凝集而仍呈均匀的乳胶状,是为阳性。相反,不含HCG尿不与抗血清作用,当加入吸附抗原的胶乳之后,抗血清可与胶乳抗原反应,出现明显的“特”特性凝集颗粒,即为阴性。

之外,也可利用血细胞的血凝抑制试验(hemoagglutination inhibition test,HAIT),其原理与胶乳法一致只是载体由胶乳改成羊红细胞。这两种试验方便简便,灵敏度为100-500Mu/ML,适合大批标本检查,但因特异性差,不能定量,已逐渐被单克隆抗体法所取代。

  放射免疫试验(RIA)。利用放射标记的HCG与被检测尿中的HCG竞争性地结合抗-HCG抗体,当被检尿中HCG增加时,结合物的放射性减低,与不同含量标准品对比可测尿中HCG的含量。使定量检测成为可能。由于RIA需一定设备,试验手续繁杂,且有核素污染问题,不适用于临床常规应用。

  酶联免疫吸附试验(ELISA)。该方法目前已广泛应用于临床,其基本原理是运用夹心免疫酶分析技术。即采用HCG单克隆抗体包被于固相表面,样品中的HCG都将与支持物表面的抗体相结合。与样品一孵育后,冲洗耳恭听表面,然后加入特异性酶标抗β-HCG亚基的单克隆抗体,最后加入酶作用的基质,即产生颜色。该法可目测,灵感度为20-50Mu/ml,采用抗β-HCG单克隆抗体二点酶免疫法进行定量,灵敏度可达2-10mU/ml。目前免疫酶法进一步发展为更简便、适于病人自检的一步法,即免疫酶渗透试验。

  单克隆抗体胶体金试验。免疫胶体金法是将羊抗人HCG抗血清(多抗)、羊鼠IGG分别固定特制的纤维素试带上并呈两条线上下排列,羊抗鼠IGG线在试带知上方为阴性对照,羊抗人HCG多抗在下方为测定。试带条中含均匀分布的胶体金标记鼠抗人β-HCG单克隆抗体和无关的金标记鼠IGG。检测时将试带浸入被检尿液中(液面低于固定的两条抗体线)后迅速取出。尿液沿试带上行,尿中的β-HCG在上行过程中与胶体金标记单克隆抗体结合,待行至羊抗人HCG抗体线时,形成金标记的β-HCG单元抗尿HCG羊抗人HCG复合物而在试带上呈兹红色区带,为HCG阳性反应,试带上无关的金标记鼠IGG随尿液继续上行至羊抗鼠IGG处时与之形成紫红色的金标记的抗原体复合物是为阴性对照。判断结果时,含HCG的尿液试带可显示上、下两条紫红色线条,而阴性标本则只显出上边一条紫红色线。

  方法学评价。纵观HCG检查方法,有生物激动、化学法、免疫法等。免疫法的检测手段,不断更新、向特异简便、快速、普及方向发展,现已有胶乳或血凝抑制试剂、放射免疫、酶免疫、胶体金纸片法等。HCG检查对病理妊娠子宫外孕及胎盘滋养层疾病的诊断、鉴别、治疗及追踪观察等均有意义。

日期:2005年4月7日 - 来自[免疫因素]栏目
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