主题:微血管

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通络药物通过保护微血管可系统防治心脑血管病

2012年9月16日,芪苈强心胶囊治疗慢性心衰循证医学研究结果揭盲,结果显示:芪苈强心可显著降低慢性心衰患者血清NT-proBNP水平。成果登上国际权威医学杂志《美国心脏病学会杂志》 2016年...即将发布

日期:2017年9月4日 - 来自[待分类信息]栏目
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第十三届国际络病学大会重大成果发布

2017年2月25日,第十三届国际络病学大会在广州召开。中国科学院陈凯先院士,中国工程院钟南山院士、张伯礼院士、杨胜利院士、姚新生院士、王琳芳院士、唐希灿院士、于金明院士、吴以岭院士等两院院士,中国工...即将发布

日期:2017年2月25日 - 来自[待分类信息]栏目

第九届国际络病学大会:重视微血管损伤意义重大

由中国工程院医药卫生学部、中华中医药学会、世界中医药学会联合会等六大学会共同主办的第九届国际络病学大会日前在上海召开,卫生部领导和十数位两院院士,以及来自美、英、日等国家的学者3000余人参会。与会专家强调,要高度重视微血管损伤在心脑血管病防治中的重要地位,并提出了防治方案。

专家指出,微血管损伤是心脑血管病高发的主要原因。微血管损伤以后,人体内增高的脂质和凝集的血小板就会沉积于损伤处,逐渐形成粥样硬化斑块,堵塞血管。此外,心脑血管发病的最大危险是,粥样硬化斑块一旦破裂,形成的血栓迅速堵塞心脑血管,引发急性心肌梗死、脑梗塞等重大心脑血管事件。会上,中山大学附属第一医院陶军教授做了题为《ATS——心脑血管病防治的金三角方案》的学术报告。陶军指出,应用辛伐他汀、阿司匹林和通心络胶囊这一“金三角方案”,可起到降脂抗凝、保护血管内皮、防止微血管损伤、稳定易损斑块的作用,可以有效防治冠心病心绞痛、心肌梗死、脑梗塞等心脑血管疾病;研究发现,三药联用的疗效明显优于单用阿司匹林、辛伐他汀,以及阿司匹林、辛伐他汀两药合用。陶军教授特别指出,在心脑血管疾病的防治过程中重视微血管损伤意义重大,为临床用药提供了重要指导。

国际络病学大会自2005年举办以来,至今已召开8届,每届会议都把推动中医络病学发展、指导心脑血管病的治疗作为重点。几年来,中医络病学已取得一批研究成果,其中以通心络、参松养心、芪苈强心胶囊治疗心脑血管病为研究内容的20余篇研究论文,被美国《科学引文索引》(SCI)收录发表,产生了重大国际影响。

国际上,美国贝勒医学院完成的通心络保护血管内皮研究、哈佛大学医学院开展的通心络对动脉粥样硬化转基因动物作用研究以及美国得克萨斯州心脏病研究中心进行的通心络对动脉粥样硬化调控基因PPARr表达研究等,均取得了突破,络病学研究成为探索心脑微血管病变的指导。

在国内,吴以岭院士带领研究团队,两次承担国家973计划项目,围绕“脉络—血管系统病”以及“孙络—微血管”病变的相关性等深入研究,揭示了急性心肌梗死无再流、急性脑梗死、糖尿病肾病异病同治的共性发病机理,阐明了易损斑块、急性心肌梗死、心律失常、心力衰竭这一心血管事件链级联反应的微血管内在机制,发现了防治微血管病变可以阻抑心血管事件链的新途径。

日期:2013年3月13日 - 来自[学术活动]栏目
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三大创新有效阻断心血管事件链

        近日从国家科技部传来消息,由河北以岭医药研究院领衔申报的“基于微血管病变性疾病的营卫\"由络以通、交会生化\"研究”项目获国家重点基础研究发展计划(973计划)立项,这是以岭医药研究院第二次牵头承担国家973计划项目,理论、治疗、模式三大创新将有效阻断心血管事件链,对研究心、脑、肾微血管病变重大疾病的共性发病规律及有效干预具有重要的意义。
  心脑血管病、糖尿病肾病已成为严重危害人类健康的重大疾病,心血管事件链的概念由美国著名心脏病学专家Braunwald教授首次提出,即心血管疾病是由致病因素导致动脉粥样硬化、易损斑块破裂进而出现心肌梗死、致命性心律失常、充血性心力衰竭至最终死亡组成的全过程。易损斑块破裂是导致急性心肌梗死的主要因素,急性心肌梗死心肌无再流发生率高达30%~37%,其核心机制为微血管损伤,而急性心肌梗死无再流显著增加恶性心律失常、心力衰竭的发病率,使住院病死率增加5~10倍。因此加强中医理论指导下的上述重大疾病基础与临床研究,是提高心脑血管病、糖尿病肾病、心律失常、心力衰竭难治性疾病防治水平的重大课题。
  “基于微血管病变性疾病的营卫\"由络以通、交会生化\"研究”由以岭医药研究院联合河北医科大学、中国人民解放军总医院、中国医学科学院阜外心血管病医院、北京中医药大学、首都医科大学、山东大学、武汉大学人民医院及复旦大学附属中山医院等九家单位共同承担,中国工程院院士吴以岭教授担任项目首席科学家。项目主体研究人员中涵盖了中医、西医、中西医结合、生化、分子生物学、微循环研究领域专家,拥有生化、电生理、分子生物学、蛋白质组学、细胞学、现代药学、生物医学信息处理等多个技术服务平台,为项目顺利开展提供有力保障。
  本课题是在以岭医药研究院2005~2010年承担的第一次973项目“脉络学说构建及其指导血管病变防治基础研究”成果基础上,进一步围绕营卫“由络以通、交会生化”异常所致渗灌气血、濡养代谢、津血互换障碍与多维时空动态演变的“孙络—微血管”物质—能量—信息网络紊乱相关性,结合微血管病变影响心、脑、肾主要脏器所导致的重大疾病,吸取现代微循环研究可视化动态成像、彩色微球、核素扫描、声学造影等先进技术手段,阐明以微血管内皮细胞为核心和启动因素、神经体液调节与血液细胞参与的、脏腑组织细胞功能结构损伤的、多维时空动态演变的“孙络-微血管”物质交换、能量代谢及信息调控网络紊乱的复杂病理变化规律。探讨脉络病变宏观临床证候类型的“孙络-微血管”病变微观病理改变,揭示孙络绌急、瘀阻、滋生、疏失的微观病理特征,揭示急性心肌梗死无再流、急性脑梗死、糖尿病肾病异病同治的共性机制,阐明易损斑块、急性心肌梗死、心律失常、心力衰竭心血管事件链的内在机制。寻求异病同治微血管病变性重大疾病及阻断心血管事件链的通络干预策略和药物,探讨通络方药的物质基础与作用机制,创新发展脉络学说的营卫“由络以通、交会生化”理论,提高微血管病变性重大疾病的临床防治水平。
  本课题将进行三大创新:理论创新创新发展脉络学说的营卫“由络以通、交会生化”理论;治疗创新开辟微血管病变性重大疾病的异病同治及阻断心血管事件链的通络治疗新途径;模式创新创建“源于经典、基于临床、创新理论、研发新药、提高疗效”的中医药发展新模式。
日期:2011年9月19日 - 来自[心脑血管相关]栏目

宫颈癌组织calpain 6表达及其与微血管密度关系

【摘要】    目的 研究钙激活中性蛋白酶6(calpain 6)在宫颈癌组织中的表达及其与微血管密度(MVD)的相关性。方法 应用免疫组化PV9000通用二步法,检测calpain 6在10例正常宫颈组织、30例宫颈上皮内瘤变(CIN)及65例宫颈癌组织中的表达并计数MVD。结果 calpain 6在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中的阳性表达率逐渐升高(H=30.05,P<0.01);宫颈癌组织中,临床FIGO分期晚、分化程度差、有淋巴结转移者calpain 6表达明显高于临床分期早、分化程度好和无淋巴结转移者(χ2=4.068~9.524,P<0.05),其表达与病人年龄、组织学类型无关;calpain 6表达与MVD呈显著正相关(r=0.946,P<0.01)。结论 calpain 6可能通过增加肿瘤新生血管形成促进宫颈癌的生长、浸润和转移。

【关键词】  宫颈肿瘤;卡配因;微血管密度;免疫组织化学

  EXPRESSION OF CALPAIN 6 IN TISSUE OF CANCER OF THE CERVIX AND ITS RELATIONSHIP WITH MICROVESSEL DENSITY 

  ZHAO XINRUI, DAI SHUZHEN, YAO QIN, et al

  (Department of Obstetrics and Gynecology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China);

  [ABSTRACT] Objective To investigate the expression of calpain 6 in cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and cancer of the cervix (CC) and analyze its association with microvessel density (MVD).  Methods Calpain 6 expression was observed byusing immunohistochemistry PV9000 technique and MVD counted in 10 cases of normal cervical epithelium (NCE), 30 of CIN, and 65 of CC.  Results The positive rates of calpain 6 expression in NCE, CIN and CC gradually increased (H=30.05,P<0.01). The expression was significantly higher in patients with cancer at late FIGO stage, with poor differentiation and lymph node metastasis than that in patients at early stage, with good differentiation and without lymph node metastasis (χ2=4.068-9.524,P<0.05). The expression of calpain 6 had no significant association with patient’s age and histology type, but was positively correlated with MVD (r=0.946,P<0.01).   Conclusion The results suggested that calpain 6 enhances tumor growth, infiltration and metastasis via an increase of tumor neovascularity.
   
  [KEY WORDS] cervix neoplasms; calpain; microvessel density; immunohistochemistry
   
  宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,易转移及复发。肿瘤分子生物学研究表明,肿瘤的发生、发展和转移是一个多阶段、多因素、受多种基因及因子调控的复杂过程,其中任何一种基因或因子的异常表达均可导致恶性肿瘤的发生或转移。钙激活中性蛋白酶6(calpain 6)属于半胱氨酸蛋白水解酶超家族成员之一,近年来的研究显示,在多种肿瘤组织中均可检测到calpain 6基因高表达,其对肿瘤发生可能有潜在的促进作用,但具体机制并不明确[1]。本研究通过检测calpain 6在宫颈癌组织中的表达情况,探讨其与宫颈癌生物学行为之间的关系及其与微血管密度(MVD)的相关性,以了解calpain 6在宫颈癌发生、发展及预后中的作用。

  1  资料与方法

  1.1  一般资料
   
  2005年1月—2007年12月,收集我院妇科手术宫颈癌组织标本65例,病人年龄28~66岁,平均(49.37±8.73)岁。其中鳞癌48例,腺癌17例;根据国际妇产科联盟(FIGO)2000年修订临床分期标准,Ⅰ期36例,Ⅱ期24例,Ⅲ期5例;高分化13例,中分化28例,低分化24例;有淋巴结转移者16例。宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织标本30例(均取自宫颈锥切或子宫全切标本),根据《妇产科学》第6版诊断标准,CINⅠ6例, CINⅡ9例, CINⅢ15例。另取子宫肌瘤或其他妇科良性疾病病人的正常宫颈组织标本10例作为对照。所有病例获取标本前均未接受过放疗及化疗,均经病理检查证实诊断。

  1.2  calpain 6表达及MVD检测方法
   
  采用免疫组化PV9000通用二步法,试剂盒由北京中山金桥生物技术有限公司提供。具体步骤按试剂盒说明操作。用已知的阳性切片作为阳性对照,以PBS代替一抗作为阴性对照。

  1.3  结果判断
   
  calpain 6蛋白以细胞质和(或)核内出现棕黄色颗粒为阳性表达,阳性细胞数≤5%为0分, 6%~25%为1分, 26%~50%为2分, >50%为3分;细胞染色黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。采用半定量积分法判定结果,综合评分由阳性细胞数评分和细胞染色评分相乘判断:0分为阴性(-), 1~2分为弱阳性(+),3~4分为阳性(), 5~6分为强阳性()。MVD计数参照WEIDNER方法,每个被染成棕黄色孤立的内皮细胞,条索状、裂隙状、管状细胞团,只要与邻近组织分开,即可视为一个微血管。肿瘤内硬化区内的微血管不计数。

  1.4  统计学方法
   
  采用SPSS 16.0及PPMS 1.5[2]统计学软件进行数据处理,数据间比较采用秩和检验、χ2检验、t检验和方差分析,相关性用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有显著性。

  2  结果

  2.1  各种组织中calpain 6表达和MVD的比较
   
  正常宫颈、CIN、宫颈癌组织calpian 6的表达阳性率逐渐升高,三者间比较差异有统计学意义(H=30.05,P<0.01)。正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中的MVD亦逐渐升高,三者间比较差异有显著意义(F=25.77,P<0.01)。见表1。表1  各种组织中calpain 6表达和MVD的比较(略)

  2.2  宫颈癌组织中calpain 6表达、MVD与临床病理参数的关系 
   
  宫颈癌组织中,临床FIGO分期晚、低分化、有淋巴结转移者calpain 6表达明显高于临床分期早、中高分化和无淋巴结转移者(χ2=4.068~9.524,P<0.05),但其表达与病人年龄、组织学类型无关(χ2=0.668、0.216,P>0.05)。宫颈腺癌MVD较鳞癌高(t=2.855,P<0.05),低分化宫颈癌MVD高于中分化和高分化(t=5.506、5.464,P<0.05),淋巴结转移组MVD显著高于未转移组(t=6.155,P<0.05),分期晚者MVD显著高于分期早者(t=3.674,P<0.05),但MVD与病人的年龄无关(P>0.05)。见表2。表2  calpain 6表达、MVD与宫颈癌临床病理参数的关系(略)

  2.3  宫颈癌组织calpian 6表达与MVD的相关性
   
  calpain 6表达阴性者和阳性者的MVD分别为12.08±1.16、25.09±5.99,二者比较,差异有显著性(t=7.44,P<0.01)。相关分析显示,calpain 6在宫颈癌组织表达与MVD呈正相关(r=0.946,P<0.01)。

  3  讨论
 
  宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤,其发病率及病死率在我国呈上升趋势,其发生、发展是一个多基因、多阶段的演进过程。DEAR等[3]1997年在小鼠的基因组中发现了calpain 6,calpain 6属于半胱氨酸蛋白水解酶超家族成员之一,位于人X染色体q23,是该家族中惟一一个在性染色体上编码的基因,包含11个内含子,一个大开放阅读框,编码641个氨基酸,氨基酸序列与其他家族成员有相似性,但是calpain 6是一种不典型的半胱氨酸蛋白水解酶,它所编码的氨基酸序列中只有3个保守活性位点(Cys81,His252和Asn284)中的一个(Asn284),半胱氨酸活性位点被81位的赖氨酸代替,组氨酸被252位的酪氨酸代替。其表达具有组织特异性,胚胎时期在各组织中广泛分布,出生后表达水平下调,成人仅表达于胎盘组织[3]。近年来研究结果显示,calpain 6参与细胞骨架的重构、微血管的稳定、细胞凋亡的抑制,可能有促进肿瘤发生的作用。
   
  本文研究显示,calpain 6在正常宫颈、CIN 和宫颈癌组织中的表达阳性率依次升高,差异有统计学意义,提示calpain 6在宫颈癌的演进发展中起着重要的作用。本研究结果还显示,随着FIGO分期的增高,calpain 6表达率升高;低分化组calpain 6表达明显高于中、高分化组;有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者。说明肿瘤临床分期越晚,组织分化程度越差,向远处转移的概率越高,calpain 6表达越高。另外,本实验MVD计数结果显示,正常宫颈、CIN和宫颈癌组织的MVD逐渐升高,说明在宫颈癌发生过程中微血管生成起重要作用,且calpain 6在宫颈癌组织中的表达与MVD呈高度正相关,说明calpain 6可能通过增加肿瘤新生血管形成促进肿瘤生长、浸润和转移。
   
  calpain 6是calpain家族中惟一一个羧基端缺乏钙调蛋白样结构域的亚型,其结构表明它可能没有蛋白水解作用或者通过其他的位点发挥水解作用[46]。SKUBITZ 等[5]和LEE等[6]曾先后在子宫肉瘤和平滑肌瘤组织中检测到calpain 6高表达,但至今没有研究能阐明其致瘤机制。随后,MELLGREN等[7]分别建立高表达calpain 6和抑制其表达的人宫颈癌细胞Hela细胞系和脐静脉内皮细胞系,结果表明,calpain 6促进肿瘤发生。这与本研究的结果相符合。
   
  本研究还显示,calpain 6的表达与MVD呈正相关,MVD是反映肿瘤血管生成最直观最便捷的指标。血管生成是实体肿瘤生长和转移的必要条件之一。血管为肿瘤的增殖提供营养,亦为肿瘤的转移提供通道。肿瘤新生血管结构缺乏完整性,癌细胞易穿透,有利于癌细胞的转移。TONAMI等[1]研究表明,calpain 6参与微血管的稳定以及细胞骨架的重构,而内皮细胞的活性在调节血管生理功能及疾病方面起着重要的作用,包括肿瘤的生长和维持,所以,calpian 6可能是通过促进内皮细胞的迁移和侵袭来调节血管生成和管道形成的。
   
  综上所述,calpain 6可能通过增加肿瘤新生血管形成促进宫颈癌的生长、浸润和转移,检测其表达有助于了解肿瘤的侵袭性、判断肿瘤的发展程度及预测肿瘤的复发倾向。同时,calpain 6还可作为肿瘤治疗新的分子靶点,为肿瘤的生物学治疗提供新的思路和途径。

【参考文献】
    [1] TONAMI K, KURIHARA Y, ABURATANI H, et al. Calpain 6 is involved in microtubule stabilization and cytoskeletal organization, Mol[J]. Cell Biol, 2007,27:25482561.

  [2] 周晓彬,纪新强,徐莉. PPMS 1.5统计软件的功能及其应用[J]. 青岛大学医学院学报, 2009,45(1):9193.

  [3] DEAR N, MATENA K, VINGRON M, et al. A new subfamily of vertebrate calpains lacking a calmodulinlike domain: implications for calpain regulation and evolution[J]. Genomics, 1997,45:175184.

  [4] SKUBITZ K M, SKUBITZ A P. Differential gene expression in leiomyosarcoma[J]. Cancer, 2003,98:10291038.

  [5] SKUBITZ K M, SKUBITZ A P. Differential gene expression in uterine leiomyoma[J]. J Lab Clin Med, 2003,141:297308.

  [6] LEE S J, CHO Y L, LEE E J, et al. Increased expression of calpain 6 in uterine sarcomas and carcinosarcomas: an immunohistochemical analysis[J]. Int J Gynecol Cancer, 2007,17:248253.

  [7] MELLGREN R L, LANE R D. Myocardial calpain 2 is inhibited by monoclonal antibodies specific for the small, noncatalytic subunit[J]. Biochim Biophys Acta, 1988,954:154160.

日期:2011年6月30日 - 来自[2010年第25卷第4期]栏目
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乌司他丁对脓毒症大鼠肺微血管通透性及肺组织PEDF表达的影响

【摘要】  目的 观察乌司他丁注射液对脓毒症大鼠肺微血管通透性及肺组织色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响,探讨乌司他丁对脓毒症大鼠肺保护的作用机制。方法 30只健康的雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、阳性对照组(B组)、乌司他丁治疗组(C组),每组10例。除假手术组外,其他组均施行盲肠结扎穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型,治疗组同时给予乌司他丁腹腔注射(100ku/kg),术后4h随机处死大鼠5只取组织标本,剩余5只大鼠经颈外静脉注射伊文思蓝观察肺微血管通透性。分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测肺组织中PEDF的表达。结果 B组肺微血管通透性明显高于A、C组,C组肺微血管通透性高于A组;B组肺组织PEDF表达水平明显低于A、C组,C组肺组织PEDF表达水平低于A组(P<0.05)。结论 乌司他丁能明显抑制脓毒症大鼠肺微血管通透性增高,这种肺保护作用的机制可能与增加PEDF表达有关。

【关键词】  乌司他丁注射液;脓毒症;肺微血管通透性;PEDF

Effect of Ulinastatin injection on the permeability of pulmonary microvascular and expression of Pigment epithelium-derived factor in lung tissue of sepsis in rats

  Cai Shi-xia, Deng Lie-hua,Tong-lin,et al.Intensive Care Unit, Affiliated Hospital of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524001, China

  【Abstract】 Objective To observe the permeability of pulmonary microvascular and expression of Pigment epithelium-derived factor in septic rats treated with Ulinastatin injection, and to investigate the action mechanism of Ulinastatin in in pulmonary function protect.Methods A total of 30 healthy male SD rats were randomly divided into three groups, and each group has 10 rats,Group A received sham operation and the others underwent cecal ligation and puncture (CLP) operation.All the rats were accepted intraperitoneal injection of normal saline (group A,B) or Ulinastatin (100ku/kg). After four hours, Lung tissue express of PEDF in all rats were detected by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) and Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) methods respectively and the permeability of pulmonary vascular were observed by injecting Evans Blue into jugular vein of rats. Results The permeability of pulmonary microvascular in group B were significantly higher than group A and C,which in group C were higher than group A.The expression levels of PEDF in group B were significantly lower than group A and C,which in group C were lower than group A.Conclusions Ulinastatin is a reliable protection agent for septic induce acute lung injury, and its mechanism of action may be involved in the increase of PEDF expression.

  【Key words】 Ulinastatin injection;Sepsis;Pulmonary microvascular;PEDF

  脓毒症(sepsis) 是合并感染的全身性炎症反应综合征( systemic inflammation response syndrome, SIRS),进一步发展可导致多器官功能障碍综合征(MODS),其中呼吸功能障碍发生率较高, 出现时间早,其主要的病理生理改变为肺毛细血管通透性增加。而色素上皮衍生因子(PEDF)可使血管通透性降低,虽然临床研究证实乌司他丁有明确的肺保护作用,但其作用机制仍有待研究,本研究采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型观察乌司他丁对脓毒症大鼠肺微血管通透性和PEDF影响,探讨乌司他丁对脓毒症大鼠肺微血管通透性影响及其作用机制。

  1 材料与方法

  1.1 动物实验分组 SPF级SD雄性大鼠30只,体质量250~300g(由广东医学院动物中心提供),按随机数字表法分为三组:假手术组(A组),无菌状态下开腹寻找到盲肠后再将其还纳腹腔,然后逐层关腹,术后立即腹腔注射生理盐水(NS)2ml;CLP组(B组),CLP后立即腹腔注射NS 2ml;乌司他丁(UTI)治疗组(C组), CLP后立即腹腔注射UTI 20ku/kg,加NS至2ml。术后4h随机选取5只颈外静脉注射伊文思蓝液,剩余5只大鼠活杀取肺组织标本。为避免伊文思蓝影响肺组织PEDF表达测定,随机各取5只大鼠实验。

  1.2 CLP模型制备方法[2] 动物在乙醚吸入麻醉下无菌开腹手术,在距盲肠末端1cm处用7号丝线结扎盲肠,用22G针头在被结扎盲肠上对穿3次,注意避免粪便污染,并用生理盐水2ml湿润肠管,按生理位置还纳肠管。术毕逐层关腹,并于腹壁皮下注射林格氏液50ml/kg抗休克处理。术后自由进食水。

  1.3 观察指标及标本处理 观察大鼠术后活动、进食、竖毛、腹泻、眼球凹陷、呼吸以及活杀后腹腔肠管扩张、充血、腹水、病灶包裹、肝肿大、肺表面充血等情况。活杀取标本时大鼠在乙醚吸入麻醉下,开腹留取右叶肺缘组织100mg,用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗后立即置液氮冻存,置-80℃冰箱待逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织PEDF mRNA表达。取右下肺组织200mg,快速PBS漂洗两次后,置碾钵中用液氮制备肺组织匀浆, 采用酶联免疫吸附ELISA法检测肺组织PEDF蛋白表达。

  1.4 检测肺组织PEDF mRNA表达 采用RT- PCR技术检测。取肺组织100mg置碾钵中用液氮制备肺组织匀浆,采用Trizol(Sigma公司)一步法提取肺组织总RNA。采用两步法RT-PCR试剂盒(Invitrogen公司)进行RT-PCR, 以GAPDH作为内参照,以10μl扩增产物经质量分数115%琼脂糖凝胶电泳后,用LabWork 410 UVP成像系统照相并分析结果。以目的基因与内参照在凝胶上的灰度值比值为基因表达的相对含量。大鼠PEDF序列(扩增片段为374bp):上游5'-CCCCATGATGTCAGACCCTA -3',下游5'-GGGGACTCAAACAAGGACTG-3', PCR反应条件: 94℃2min预变性, 94℃60s变性, 56℃30s退火, 72℃50s延伸,共计30个循环, 72℃ 7min延伸。RT-PCR操作严格按照说明书进行。

  1.5 检测肺组织PEDF蛋白表达 采用ELISA法检测。严格按照大鼠血管内皮生长因子ELISA试剂盒(武汉中美科技有限公司)说明书操作,酶标仪(BIO-RAD680)波长450nm下读取吸光度,根据标准曲线得出PEDF浓度。

  1.6 肺微血管通透性的测定 (1)伊文思蓝含量测定法。按20mg/kg经左侧颈外静脉注射2%伊文思蓝液(北京恒业中远化工有限公司),30min后将动物麻醉开胸取部分左肺,剪去周围组织,吸干表面水分及血液,称量湿质量,将肺组织剪成约10mm3 小块浸泡于甲酰胺溶液中(0.2g/kg) ,置60℃恒温水浴中抽提24h,待组织中色素全部浸出,取出组织,离心,取上清液,在与标准曲线相同的条件下,用紫外分光光度计(岛津2000)在620nm波长处进行比色测定光密度值,在标准曲线上查出EB含量,以每克肺组织干重含EB质量表示。(2)湿/干质量比测定:称肺组织湿质量后,置烤箱80℃,72h,称干质量,计算湿/干质量比值。

  1.7 数据处理 采用SAS v8.1统计软件包对所得资料进行统计分析。计量资料采用SNK-q检验,P<0.05为差异有显著性。

  2 结果

  2.1 大鼠一般情况观察 B组大鼠术后2h活动度即明显下降,并逐渐表现出厌食、竖毛、眼球下陷、呼吸急促、对外界刺激反应淡漠等。腹腔肠系膜充血、肠管显著扩张、被结扎盲肠坏死、血性腹水、病灶处大网膜包裹不佳、肝肿大、肺充血明显。C组亦有厌食、竖毛、活动度减少等情况,但明显较B组轻微,且C组肠管仅轻度扩张,腹水减少,坏死盲肠被大网膜及周围肠管包裹明显。A组没有相关表现。

  2.2 大鼠肺组织PEDF mRNA表达 B组明显低于A、C组,C组低于A组(P<0.05),见表1。

  2.3 大鼠肺组织PEDF蛋白表达 B组明显低于A、C组,C组低于A组(P<0.05),见表1。

  2.4 肺组织EB含量 B组明显高于A、C组,C组高于A组(P<0.05),见表1。

  2.5 肺组织湿/干质量比 B组明显高于A、C组,C组高于A组(P<0.05),见表1。表1 各组大鼠实验测定值 注:*P<0.05compared with group A,#P<0.05 compared with group B

  3 讨论

  脓毒症主要表现为系统炎症和器官功能损害,而微血管通透性增高是器官功能受损的重要特征之一。血管通透性增高,一方面使大量液体渗入组织间隙,增加毛细血管与细胞间的距离,加重组织细胞的缺氧;另一方面还使炎症细胞过多聚集于局部组织,通过释放蛋白酶及氧自由基等,直接造成组织细胞的损伤[1]。国外学者的研究显示,组织的缺血缺氧可使组织血管内皮生长因子(VEGF)表达增强[2]。VEGF是一种特异地作用于血管内皮细胞的生长因子,是目前已知的最强烈的血管渗透剂,低氧和VEGF 能调节基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)的活性, PEDF是MMPs-2和MMPs-9的作用底物,这样,低氧和VEGF通过MMPs的蛋白溶解作用使PEDF 水平下调, VEGF/PEDF升高,病理变化随之发生[3]。PEDF 能够阻止缺氧导致的转录产物VEGF- C 及其受体VEGF- R3 的减少,VEGF- C、 VEGF- R3 转录水平的稳定阻止低氧环境中血管的渗漏[4,5]。乌司他丁注射液是从人尿中提取的一种具有广谱蛋白酶抑制作用的糖蛋白,研究证实它可以有效抑制脓毒症向多器官功能障碍综合征(MODS)转化,可有效降低脓毒症患者的死亡率[6],国内外目前并未见有关乌司他丁对脓毒症血管通透性影响的报道。本研究通过向脓毒症大鼠颈外静脉内注射伊文思蓝测定肺组织对这种染料的通透性,证实乌司他丁可以阻止大鼠微血管通透性增高的推测,进一步了解乌司他丁治疗脓毒症的作用机制。本研究发现外源性给予乌司他丁后,大鼠微血管通透性明显降低,同时亦检测到大鼠肺组织PEDF的表达较CLP组明显升高。我们推测乌司他丁可能通过增加大鼠肺组织PEDF的表达降低大鼠微血管通透性,从而起到肺保护作用。这与国外相关研究[7,8]表明在脓毒症患者血清中色素上皮衍生因子(PEDF)显著降低,PEDF可使血管通透性降低是一致的。当然对于脓毒症发生及发展过程肺组织表达的动态变化以及乌司他丁作用的时间依赖性,还有待于我们进一步深入研究。

【参考文献】
   1 Pedram A,Razandi M,Levin ER.Deciphering vascular endothelial cell growth factor/vascular permeability factor signaling to vascular permeability. Inhibition by atrial natriuretic peptide.J Biol Chem,2002,277(46):44385-44398.

  2 Becker PM, Alcasabas A, Yu AY, et al. Oxygen - independent upregulation of vascular endothelial growth factor and vascular barrier dysfunction during ventilated pulmonary ischemia in isolated ferret lungs. Am J Respir Cell Mol Biol, 2000,22(3):272-279.

  3 Notari L,Miller A,Martinez A, et al. Pigment ep ithelium derived factor is a substrate form matrix metallop roteinase type 2 and type 9: imp lications for down regulation in hypoxia.Invest Ophthalmol Visl Sci, 2005, 46: 2736-2747.

  4 Yamagishi S, Matsui T, Nakamura K,et al. Pigment- epithelium- derived factor (PEDF)inhibits angiotensin- II- induced vascular endothelial growth factor (VEGF)expression in MOLT- 3 T cells through anti- oxidative properties. Microvasc Res,2006,71(3):222- 226.

  5 Ren JG, Jie C, Talbot C. How PEDF prevents angiogenesis:a hypothesized pathway. Med Hypotheses,2005,64(1):74-78.

  6 尹勇, 高乃荣, 李兆丽.乌司他丁对急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用.世界华人消化杂志,2002,10(5):558-561.

  7 van der Flier Michiel,van Leeuwen Henk. Plasma vascular endothelial growth factor in sever sepsis shock. Shock,2005, 23(1):35-38.

  8 Liu H, Ren JG, Cooper WL.Identification of the antivasopermeability effect of pigment epithelium-derived factor and its active site. Proc Natl Acad Sci USA,2004,101:6605-6610.

  

日期:2011年6月29日 - 来自[2010年第10卷第2期]栏目

“微血管减压术”将成“脸痛”的标准治疗方法

记者从正在上海举行的首届东方神经外科高峰论坛上获悉,“微血管减压术”今后将成为三叉神经痛,俗称“脸痛”的标准治疗方法,与会专家认为,这预示着此前困扰神经科医生多年的难题得到解决。

 

据该论坛大会主席、上海交通大学医院附属新华医院神经外科主任李世亭教授介绍,由新华医院神经外科联合中日友好医院、北京天坛医院共同主办的“第一届东方神经外科高峰论坛”,旨在创造平台促进专家切磋交流,提升中国神经外科医疗水平,并最终促成适应中国国情的相关治疗规范出台。

 

会上,治疗三叉神经痛标准方法“微血管减压术”成为200余位来自中国、意大利、法国、日本等国的神经外科重量级人物的热议话题。 据知,俗称“脸痛”的三叉神经痛是一种发生在面部三叉神经分布区内反复发作的阵发性剧烈神经痛,是最常见的头面部疼痛病因之一。以往医院多通过机械、药物或放射等方法阻断此类病人三叉神经传递,从而抑制疼痛发作。有关专家指出,传统方法会同时抑制正常触觉传导,并存在复发风险。

 

专家告诉记者,大多数三叉神经痛是由异常血管压迫造成的,因此可借助显微外科技术,实施三叉神经微血管减压术来治疗该病症。据介绍,这种方法可适用于顽固性面部痉挛患者以及舌咽神经痛患者,在解除局部血管压迫的同时保留三叉神经感觉传导的完好,不会出现面部感觉丧失。

 

据介绍,在中国医院中设立神经外科已近60年,而近两年中国在微创外科等方面发展迅猛。专家指出,当前中国神经外科领域较国外相比仍然落后,相关领域有待探索空间很大。

 

李世亭表示,论坛组委会计划今后每年在不同城市举办该论坛。(陈静 张璐嘉)
 

日期:2010年6月18日 - 来自[神经科]栏目
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早期肾微血管病变糖尿病HbA1c与mALB水平相关分析

【摘要】    目的 研究糖尿病患者的空腹血糖、糖化血红蛋白和尿微量白蛋白含量与早期肾脏微血管病变的关系。 方法 对73例经临床确诊为有早期肾血管病变的糖尿病患者空腹葡萄糖、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白采用OLYMPUS AU640全自动生化分析仪进行测定及数据分析并与对照组比较。 结果 糖尿病患者的尿微量白蛋白、糖化血红蛋白明显高于对照组(P<0.01),且糖化血红蛋白含量与尿微量白蛋白含量成正比。 结论 糖尿病患者糖化血红蛋白、尿微量白蛋白水平与糖尿病早期肾脏微血管改变密切相关。

【关键词】  糖尿病(DM) 空腹血糖(FPG) 糖化血红蛋白(HbA1c) 尿微量白蛋白(mALB)

  Analysis of clinical significance of levels of HbA1c and mALB in early renal micrangium pathological change in diabetic patients.

  LUAN Jing, JIN Hai-jia, LIU Fei, et al.

  (First Hospital of Jilin Chemical Group Company General Hospital, Jilin 132021, Jilin, P. R. China)
   
  Abstract:Objective  To analyze the clinical significance of levels of FPG, HbA1c and mALB in early renal micrangium pathological change in diabetic patients.  Methods  The levels of FPG、HbA1c、mALB in patients with early renal micrangium pathological change were determined and compared with the healthy control group.  Results  The levels of HbA1c and mALB were significantly higher than that of the healthy control group and the relationship between HbA1c and Malb is positively correlated.  Conclusion  The change of levels of HbA1c、mALB is closely associated with early renal micrangium pathological change in diabetic patients.
   
  Key words:Diabetes mellitus; FPG; HbA1c; mALB

  糖尿病是一种常见的内分泌代谢综合征,肾脏微血管病变是其常见的并发症。糖化血红蛋白含量可反应测定前120d的血糖水平,具有较好的稳定作用,是糖尿病较好的监测指标之一,同时对糖尿病的并发症的监控起重要作用。尿微量白蛋白是指尿中白蛋白超出健康人参考范围,但不能用常规方法测定出这种微量变化,是检测血管损伤的重要指标,为了探讨糖尿病患者的糖化血红蛋白、尿微量白蛋白与糖尿病早期微血管病变之间的关系,本文对73例临床确诊为早期微血管病变的糖尿病患者和32例健康人的空腹血糖、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白的含量进行了分析研究,探讨糖尿病患者糖化血红蛋白、尿微量白蛋白与糖尿病肾脏早期微血管病变的关系。

  1  资料与方法

  1.1  临床资料  已经临床确诊的患有肾脏微血管病变的糖尿病患者73例:男39例,女34例,年龄31~67岁,平均年龄(53.38±8.25)岁,符合WHO有关诊断标准。健康对照组33例:男19例,女14例,年龄36~68岁,平均年龄(52.31±7.71)岁,经体检健康,无糖尿病家族史。统计学分析,两组年龄无显著性差异,性别组成相近。

  1.2  73例糖尿病患者微血管病变诊断标准:①均为临床确诊糖尿病肾病(DN)患者并排除DM酮症酸中毒、泌尿系感染、心衰、肾小球肾炎等,根据24h测定的白蛋白含量,高于30mg/24h定为DN。其中微量白蛋白尿患者30~300mg/24h 56例,大量白蛋白尿患者大于300mg/24h 17例。②结合糖尿病视网膜病变(DR)检查进一步确定微血管病变:经眼底镜检查发现视网膜均有不同程度的微血管瘤、出血、渗出等改变,由指定的眼科医师负责检查,按照1985年全国眼科学术会议确定的DR诊断标准分期。

  1.3  仪器与方法  空腹血糖、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白测定均采用OLYMPUS AU640全自动生化分析仪检测。空腹血糖标本为采晨起空腹静脉血2ml,离心取血清检测,检测试剂采用上海申能测定试剂盒,方法为葡萄糖氧化酶法。糖化血红蛋白标本为采晨起空腹静脉血2ml,EDTA-2K抗凝,检测试剂采用利德曼测定试剂盒,方法为免疫凝集法。尿微量白蛋白标本为收集24h混合尿液,取适量检测。检测试剂采用芬兰Orion测定试剂盒,方法为免疫比浊法。

  2  结果

  2.1  73例糖尿病患者和33例健康人空腹血糖、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白检测  结果见表1。

  表1  糖尿病患者及正常人空腹血糖、糖化血红蛋白、尿微量白蛋白的含量结果(略)

  2.2  糖尿病组糖化血红蛋白两组不同浓度与相应的尿微量白蛋白水平比较  73例糖尿病患者中,糖化血红蛋白浓度<9.0(7.21±1.63)% 41例,mALB为(32.12±8.3)mg/L;>9.0(17.07±1.41)% 32例,mALB为(73.90±10.9)mg/L。两组差别具有统计学意义(P<0.01)。

  3  讨论
   
  糖尿病是一种常见的内分泌代谢障碍疾病,是由于体内胰岛素缺乏或胰岛靶细胞不能发挥正常生理功能而引起糖蛋白及脂肪代谢紊乱的一种综合性疾病[1]。正常人有三种血红蛋白:HbA、HbF、HbA2,而成人红细胞中主要含HbA。HbA又分为HbA1a、HbA1b、HbA1c,合称为糖化血红蛋白,而HbA1c是葡萄糖结合成血红蛋白,另两种是其他糖形成的血红蛋白。糖化血红蛋白由HbA在代谢过程中与葡萄糖结合形成,是不可逆的化学反应,在红细胞内生成的约120d内,此反应绐终进行,其生成速度与浓度成正比,因此糖化血红蛋白含量反应了测定前1~2个月中葡萄糖的水平,短暂的血糖增高或降低,不会使糖化血红蛋白发生明显变化,只有血糖浓度持续升高,才会使糖化血红蛋白含量升高[2]。血红蛋白的糖化可导致组织缺氧,使蛋白质结构功能代谢和半衰期发生改变,与糖尿病的并发症如糖尿病肾病、白内障动脉硬化等发病机理有关。因此糖化血红蛋白不仅是高血糖变化的指标,也可能参与了微血管的损害过程,成为微血管损害的重要因子[3]。
   
  尿微量白蛋白是糖尿病早期肾脏损害诊断和监测的灵敏指标。正常肾小球基底膜具有3~4nm的微孔,并带有一层负电荷,即具有孔径屏障和电荷屏障,使血浆中带负电荷的中等分子及大分子蛋白质不易通过。白蛋白是血浆中含量最高的蛋白质,半径约为3.6nm,不易通过肾小球基底膜的孔径屏障,白蛋白的pH为4.7,在pH7.4的血浆环境,带有大量负电荷,不易通过基底膜的电荷屏障,正常时白蛋白不易通过肾小球滤过,原尿中的白蛋白在肾小管几乎全部被重吸收。只有在病理情况下,使得肾小球基底膜滤过孔径增大、电荷屏障作用降低、肾小管重吸收能力下降使血浆中、尿液中白蛋白排出量就会增多,出现微量或临床白蛋白尿。
   
  本文糖尿病组糖化血红蛋白和尿微量白蛋白均高于正常对照组(P<0.01),见表1。同时糖尿病组随着糖化血红蛋白含量增高则相应的尿微量白蛋白含量也增高,见表2。这是由于糖化血红蛋白水平越高,则可导致组织缺氧严重,使蛋白质结构功能改变特别是微血管的改变,特别是发生在肾脏、视网膜、四肢末稍等微血管丰富的部位,引起组织细胞缺血缺氧,损伤血管内皮细胞使其合成分泌血浆内皮素增加,使肾血管剧烈收缩,升高肾血管阻力,降低肾血流量和肾小球硬化及肾小球微血管病变,通透性增高,肾小管重吸收能力下降,白蛋白漏出,形成蛋白尿,造成尿微量白蛋白的增高。因此说糖尿病患者除随时监测血糖外同时监测糖化血红蛋白、尿微量白蛋白,对于预防早期糖尿病微血管病变,特别是肾脏早期微血管病变有着十分重要意义。

【参考文献】
    [1] 齐含吾.糖尿病的综合防治要领[J]. 实用糖尿病杂志,1993,1(1):6.

  [2] 姚君厘,郁以红.HbA1c与糖尿病周围神经病变肌电生理检查关系探讨[J].实用糖尿病杂志,1994,2(3):28.

  [3] 李英,徐景,井楠.糖化血红蛋白、尿微量白蛋白测定2型糖尿病患者肾损害程度的探讨[J].天津医药,2002,30(5):280~281.


作者单位:吉化集团公司总医院一院,吉林 吉林 132021.

日期:2010年1月13日 - 来自[2007年第7卷第10期]栏目
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