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γ-谷氨酰转肽酶(GGT)基因克隆及在原核生物中表达*

【摘要】  由于从茶叶中提取高纯度的茶氨酸成本高昂,化学合成茶氨酸工艺较复杂,组织培养合成茶氨酸产量低,因此有必要寻找一个有效途径。γ-谷氨酰转肽酶的基因广泛存在各种生物中,它具有催化L-谷氨酰胺和乙胺合成茶氨酸能力,为大量合成高纯度的茶氨酸合成提供新的思路。利用PCR技术,以原核生物大肠杆菌DH5a的全基因组为模板克隆出γ-谷氨酰转肽酶目的基因片段GGT,并将其转载到pET-28a上,最终转入到原核表达型宿主菌BL21中,诱导表达出γ-谷氨酰转肽酶(GGT),为利用生物转化方法生产茶氨酸奠定基础。

【关键词】  γ-谷氨酰转肽酶;茶氨酸;蛋白表达;基因克隆

       he gene cloning and expression of γ-gamma glutamyl transpeptidase in procaryoteSHI Lin-mei, ZHAN Zha-jun, WANG Dong-ming.Lishui Profession and Technology College, Zhejiang 323000,China【Abstract】  Higher pure theanine abstracted from tea is so costly, the chemic synthesis of theanine is a complicated craftwork and the lower output of theanine by plant tissue culture. So it is necessary to search an effective method. The gene of γ-gamma glutamyl transpeptidase is aboard appearing in all kinds of organism. It can catalyse L-glutamine and ethylamine to theanine, and this can offer a new consider of getting larges of more pure theanine. The GGT from E. Coli DH5a was amplified by PCR. The GGT gene was inserted in pET to yield the recombinant expression vector pET28a-ggt, over-expressed recombinant of GGT in E. Coli BL21 was achieved with pET28a-ggt at last, meantime induced γ-gamma glutamyl transpeptidase.

  【Key words】  γ-gamma glutamyl transpeptidase; theanine; protein expression; gene cloning

  茶氨酸(Theaine)是茶叶中含有的一种特殊的氨基酸,它是茶叶中鲜爽味物质[1~5],其结构式如图1所示。目前除在油茶、蘑菇、茶梅、红山茶等植物中检测出微量,其他植物中尚未发现。已有很多报道其具有降血压、抗疲劳、松弛神经紧张、放松等保健功能以及增强抗肿瘤药物的疗效的医用价值,对于它的研究已逐渐成为当前茶叶研究的热点之一[6,7]。同时由于从茶叶中提取高纯度的茶氨酸的成本还是相当昂贵,故通过其他方法来制备已越来越受重视。组织培养和化学合成法虽已成功制备出茶氨酸,但也存在着一定的局限性。如利用化学方法合成的茶氨酸虽然步骤简单,得率也高,但产生都是DL型消旋体,L型茶氨酸只有通过拆分才能获得[8~10]。
   
  γ-谷氨酰转肽酶(GGT)是谷胱甘肽代谢途径中的一个关键酶,广泛分布在活体组织中,而谷胱甘肽是属于含有巯基的、小分子肽类物质,具有两种重要的抗氧化作用和整合解毒作用,对于其在人体内的存在是相当重要的。谷氨酰胺和乙胺在γ-谷氨酰转肽酶(GGT)的催化作用下发生谷氨酰基反应得到茶氨酸[4]。

  pET系统是有史以来在 E.coli 中克隆表达重组蛋白的功能最强大的系统,其中的质粒能在克隆的宿主中大量复制。目的基因被克隆到pET质粒载体上,受噬菌体T7强转录及翻译(可选择)信号控制,表达型宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导其表达[11,12]。T7 RNA聚合酶机制十分有效并具有选择性,充分诱导时,几乎所有的细胞资源都用于表达蛋白;诱导表达后近几个小时,目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。尽管该系统极为强大,却仍能很容易地通过降低诱导物的浓度来削弱蛋白表达,降低表达水平可能对提高某些目的蛋白的可溶性部分产量有利。而该系统的另一个重要优点是在非诱导情况下,可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录[13~15]。可以利用该系统以上的特性,在原核生物中大量表达目的蛋白。

  本实验旨在从大肠杆菌E.Coli DH5a基因组中克隆出目的基因GGT,并装载到原核表达载体PpT28a上,使其在原核生物存在及诱导其表达蛋白,为利用生物转化方法生产茶氨酸奠定基础。

  1  材料与方法

  1.1  菌株与试剂  E.Coli DH5a、E.Coli BL21由本室保存,质粒小提试剂盒,DNA割胶回收试剂盒,工具酶,琼脂糖,丙烯酰胺,甲叉双丙烯酰胺,2kb和15kb DNA Marker(TaKaRa),广范围蛋白质分子量标准(Promega公司)。

  1.2  目的基因GGT的获取  取100ml E.coliDH5a培养物,离心(5000rpm,10min)得到菌体沉淀。按照 0.5g菌体/4.75ml TE Buffer 的比例重悬菌体,加入10%SDS一定体积至终浓度为2%。37℃水浴30min后,加入5M的NaCl一定体积至终浓度为0.7M。然后,置于水浴锅中65℃水浴10min。水浴结束后加入6ml混合试剂(氯仿:异戊醇=24:1,V/V),轻晃试管混匀10min后离心(7000rpm,40min)。离心毕,吸上清液于另一试管,再加入等体积的异丙醇,室温放置10min。最后离心(13000rpm,15min)得到DNA沉淀。

  DNA沉淀再溶于2ml TE Buffer,另加22μl Rnase A(10mg/ml),37℃水浴30min,加入等体积的苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)。轻轻摇晃混匀几分钟后离心(7000rpm,2min),吸取上清液。再用等体积的混合试剂(氯仿:异戊醇=24:1,V/V)抽提两遍,取上清液。

  上清液加入1/10 体积的3M的NaAC,并加入2倍体积的异丙醇后离心(13000rpm,30min)后小心吸去残液,再用1ml 75%的酒精(-20℃预冷)洗一遍,离心(13000rpm,30min)后用适量的TE Buffer溶解。最后取TE Buffer溶解液进行1%Agrose 电泳检测。

  利用E.coliDH5a的基因组进行PCR,以获得目的基因GGT。PCR完成后,在1%Agrose 电泳检测。

  1.3  pET28a-GGT表达载体的构建  经PCR扩增出来的目的基因(GGT)产物和原核载体pET28a各自进行Nco Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,酶切后回收各自的酶切片段,在16℃水浴下进行连接过夜。已连接好的产物转化E.coli DH5a感受态细胞中,将转化后的细胞涂布在LB固体培养基平板上,同时设置阴性对照(E.coli DH5a),37℃过夜。分别挑取3~4个转化子至已带有Kan抗性的LB液体培养基中,摇至过夜。

  将已摇至过夜的菌进行PCR,同时设立阳性对照。在1% Agrose 进行凝胶电泳。

  最后菌落PCR获得的阳性克隆进行双酶切鉴定,酶切产物在1% Agrose进行凝胶电泳。

  1.4  诱导表达  pET28a-GGT质粒转化至表达菌BL21(DE3)中,涂布在含有Kan抗性的平板上,待菌落长出后挑取单转化子培养,准备进行诱导表达。

  重组菌在37℃ 220rpm下摇菌至一定浓度(OD=0.6左右)后,加入一定体积的1M IPTG,使终浓度为1mM。重组菌在37℃、220rmp下诱导为2~3h后进行SDS-PAGE电泳。

  采用4%分离胶及13%浓缩胶的不连续垂直平板电泳,考马斯亮蓝G-250染色。

  2  结果与分析

  2.1  GGT的PCR扩增  根据已发表的E.coli DH5a中γ-谷氨酰转肽酶基因(GGT)序列和pET28a载体MCS位点,设计两条引物。

  上游引物P1:5’-GCGCCATGGCTATAAAACCGACGTTTTTAC-3’

  下游引物P2:5’-TATACTCGAGGTACCCCGCCGTTAAATC-3’

  引物P1、P2的5’端分别引入了Nco Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点,以上引物由上海生工生物工程技术服务公司合成。

  提取的大肠杆菌E.coli DH5a总DNA为模板,利用上述合成的相应的引物P1、P2,用Taq聚合酶PCR扩增出大肠杆菌E.coli DH5a GGT自身信号肽编码基因及其结构基因。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳验证,结果表明与预计的大小一致,在1700bp左右出现一条亮带,PCR产物的琼脂糖电泳结果见图2。

  2.2  pET28a-GGT构建  GGT基因和pET28a经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切获得具有粘性末端,然后在Taq酶作用下进行连接,连接后的产物如图1所示。连接后的产物转化至感受态E.coli DH5a,在LB平板(终浓度50mg/ml的Kan)上挑取单转化子。

  图1  pET28a-GGT(略)

  图2  PCR扩增(略)
 
  0:DNA Marker(bp);1:GGT
   
  因大肠杆菌E.coli DH5a的基因组中也存在着GGT基因,故直接进行菌落PCR不可行提取但转化子的质粒,进行PCR,其PCR的结果见图3。从图中可以看出在1700bp左右出现条带,初步表明连接产物很可能是pET28a-GGT。
   
  经菌落PCR鉴定均为阳性克隆,选取2个进行双酶切鉴定,酶切时间为2~3h,并以PCR得到的GGT基因为阳性对照,其凝胶电泳图见图4。从图中可以看出与阳性对照一样,都在1700bp左右有条带出现,可以肯定pET28a-GGT构建成功。

  2.3  重组γ-谷氨酰转肽酶的诱导表达  取出1ml 经IPTG诱导的菌液,离心后加入100μl ddH2O重悬,将重悬的菌进行SDS-PAGE电泳。结果如图5。从图中可以看出,在约62KD出有蛋白出现,而且IPTG诱导后GGT蛋白的表达量比未诱导的有大幅度增加,且其他非目的蛋白表达有所减少。

  图3  菌落PCR(略)

  0:DNA Marker;1、2:转化子

  图4  pET28a-GGT酶切鉴定(略)

  0:DNA Marker(bp);1:阳性对照;2、3:阳性克隆

  图5  BL-21(pET28a-GGT)诱导表达(略)

  0:标准蛋白;1: 未诱导;2: 诱导

  3  讨论

  γ-谷氨酰转移酶(GGT)是生物体内谷胱甘肽代谢的相关酶之一,也是催化转移L -γ谷氨酰基的特异性酶。它在生物体中分布相当广泛,从细菌到高等哺乳动物体中都有该酶的存在。在临床该酶是一些疾病检测和诊治的标志物,如各种肝脏疾病[8~10]、胃病[11]和肾病[12,13]等,且在各种生物体催化合成中有相当重要的应用。利用基因工程生产γ- 谷氨酰转移酶(GGT)的研究并不多,因其在原核生物有利于大量表达自身蛋白且性质又稳定,同时大肠杆菌由于遗传背景比较清楚,故多利用原核生物大肠杆菌来生产。在大肠杆菌中,γ- 谷氨酰转肽酶(GGT)主要存在于周质空间内,其是由两个亚基构成,一个为相对分子质量约为22kDa的小亚基,另一个为相对分子质量约为39.2kDa的大亚基。

  本研究通过从大肠杆菌E.coli DH5a的基因组中获得γ-谷氨酰转移酶(GGT)基因,克隆到原核表达载体pET28a上,将重组后的pET28a-GGT转化至表达型E.coli BL21中,经IPTG的诱导后目的蛋白GGT大量表达,而非目的蛋白的表达量有所减少。相信通过不断优化条件,定能得到更高的目的蛋白表达量,为以后的进一步研究其活性及规模化应用于茶氨酸的实际生产中提供了可能。

【参考文献】
  1 Suzuki H,Hashinoto W, Kumagai H.Glutathione metaboliam in Escherichia coli.Journal of Molecular catalysis B:Enzymatic,1999,6:175-184.

  2 邹柏样,林浩,许廷森.蓖麻蚕的γ- 谷氨酰基转肽酶的研究.昆虫学报,1986,29(1):16-23.

  3 Sabri Demircan, Mustafa Yazici, Kenan Durna,et al.The Importance of Gamma-Glutamyltransferase Activity in Patients with Coronary Artery Disease. Clinical Cardiology.2007,32(4):220-225.

  4 Makinen PL, Makinen KK. Camma-Gluamyltransferase from the outer cell envelope of Treponema deticola ATCC 3505. Infection Immunity,1997,65(2):685-691.

  5 王娜,张洁,沈徽,等.γ- 谷氨酰基转肽酶基因工程菌的构建及其发酵条件的初步研究.中国生物工程杂志,2006,26(11):48-53.

  6 kobaysshi M,Mochisuki M,Terashima T,et al. Hypotensive effect and activation of dopaminergic neurons by theanine in rats. International Symposium of Tea Culture and Health Science.Tokyo University, 1996:164-169.

  7 Novagen.PET System Manual.11th Edition.

  8 刘玉环,李玉香,沈华海.AFP、GGT-Ⅱ和MMP-9联合检测对原发性肝癌的诊断价值.吉林大学学报(医学版),2008,34(5):875-878.

  9 晏红.血清TBA及GGT在肝病患者检测中的评价.实用医技杂志,2008,15(19):2486~2487.

  10 张昭成.大鼠化学诱发肝癌过程中GGT和AFP的表达.青岛医学院学报,1992,28(1):15-19.

  11 姚登福,徐克成,黄介飞,等.胃癌组织GGT及其同工酶的生化研究.中国肿瘤临床,1993,20(12):912-914.

  12 刘君,付海明.尿液GGT、ALP、LDH检测对小儿肾盂肾炎的临床意义.社区医学杂志,2007,5(23):12.

  13 田忠黄,杨冬莲.尿液GGT测定用于化疗患者的肾功能监测.中国中西医结合肾病杂志,2002,3(5):285-286.

日期:2011年6月29日 - 来自[2009年第9卷第8期]栏目
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甲胎蛋白及γ-谷氨酰转肽酶联合测定对诊断原发性肝癌的临床价值(附50例临床观察)

【关键词】  肝癌


    原发性肝癌的血清学检测方式多种,但特异性较高、应用较广泛的仍为甲胎蛋白。1977年全国肝癌防治协作会上曾拟定“如无肝癌的其他证据,甲胎蛋白阳性或定量≥500μg/L,持续1个月以上并能排除妊娠、活动性肝病、生殖腺胚胎肿瘤,即可诊断为原发性肝癌”。由于基层无CT,也无条件测定甲胎蛋白异质体、γ-谷氨酰转肽酶同工酶Ⅱ、异常凝血酶原、血清转铁蛋白等,绝大多数病人来自农村,当甲胎蛋白≥20μg/L或假阳性时,无法动态随访甲胎蛋白时,势必造成一些小肝癌病人失去手术治疗机会。笔者回顾并积累了50例原发性肝癌病人的临床资料,得出了如B超发现占位病变,联合检测甲胎蛋白、γ-谷氨酰转肽酶,大大提高了早期肝癌的诊断。即肝癌=肝占位﹢甲胎蛋白﹢γ-谷氨酰转肽酶。

    1  临床资料

    本文50例原发性肝癌患者均系1996~2007年我科收治病例,其中男41例,女9例;年龄最大77岁,最小36岁,平均57岁;病程最长4个月,最短19天,平均2.9个月。体格检查有35例肝大、质硬,有15例肝脏未扪及,有乙肝病史28例,占58%,入院后查HBsAg 均为阳性,B超均发现占位性病变,查甲胎蛋白阳性35例占68%(放射免疫法),其中甲胎蛋白定量≥500μg/L 20例,占40%,15例介于20~200μg/L占30%,甲胎蛋白阴性15例占30%,联合检测γ-谷氨酰转肽酶升高48例,2例正常,最高值达1039u(我院正常值40u),最低81u,平均升高336.36u,约为正常8.8倍,两者联合检测阳性达95%,这50例患者均经CT证实,其中10例转上级医院手术证实,5例行肝活体检查证实为原发性肝癌。

    2  讨论

    甲胎蛋白目前广泛用于肝癌的早期普查、诊断、判断治疗效果,预防复发,除肝癌外,其他如孕妇、生殖腺胚胎肿瘤,极少数胃、结肠癌均可升高,慢性肝炎、肝硬化也可一过性升高,但其升高值不如肝癌明显,其对原发性肝癌有较高的敏感性(国内报告达70%~90%)[1]。我院约68%和极高的特异性97.3%,由于甲胎蛋白有假阳性及小肝癌的假阴性,我院50例中15例甲胎蛋白阴性,约占30%,且根据1977年标准≥500μg/L持续1个月或≥20μg/L持续8周,须排除其他疾病方可诊断肝癌,势必造成约30%甲胎蛋白值介于20~200μg/L的肝癌漏诊,且同肝硬化、病毒性肝炎等良性肝病甲胎蛋白低浓度升高难以鉴别,选择γ-谷氨酰转肽酶联合检测,提高了对甲胎蛋白阴性小肝癌的检出率,有人研究对甲胎蛋白阴性及小肝癌诊断率分别为84%和78.6%,我院50例中甲胎蛋白阴性15例,测定γ-谷氨酰转肽酶增高13例,占82%,2例正常。γ-谷氨酰转肽酶广泛分布于肝、胰、肾等器官,血中γ-谷氨酰转肽酶主要来源于肝,正常人及孕妇均为阴性。原发性肝癌时由于癌细胞逆分化,类似胚胎期,γ-谷氨酰转肽酶的生成增加,同时癌肿也刺激其周围的正常肝细胞。使其γ-谷氨酰转肽酶合成亢进,国内外文献认为,γ-谷氨酰转肽酶对肝癌的阳性率约25%~55%,其对肝癌的敏感性为90%,特异性为97.1%,在甲胎蛋白阴性肝癌的阳性率为72.7%[2]。北京日坛医院测定原发性肝癌的γ-谷氨酰转肽酶增高约10倍,我院50例平均增高8.8倍,其敏感性超过甲胎蛋白,因此,国外学者认为γ-谷氨酰转肽酶是诊断肝癌较好的酶试验,甲胎蛋白与γ-谷氨酰转肽酶联合检测阳性达95%,两者联合应用,有互补作用。

【参考文献】
  1 陈灏珠.实用内科学,第12版. 北京:人民卫生出版社,2005,2015.

2 王宝恩,张定凤.现代肝病学. 北京: 科学出版社,2003,862.


作者单位:408200 重庆,丰都县树人中心卫生院

日期:2008年6月30日 - 来自[2008年第8卷第1期]栏目

血清γ-谷氨酰转移酶的检测与分析

【关键词】  血清;谷氨酰转移酶;检测;分析


    人体的各种代谢得以进行,主要依靠酶功能的行使。血清中有众多数量的酶,在血液中的浓度、分泌及功能活动、生理变异和疾病有关,它们大多数在肝内合成,在血清中的浓度甚至超过器官细胞内浓度。人体各器官中γ-谷氨酰转移酶(GGT)含量以肾脏最多,其次是前列腺、肝、盲肠和脑。在肾脏、胰腺和肝脏中,此酶含量之比约为100∶8∶4。肾脏中GGT含量虽高,但肾脏疾病时,血液中该酶活性增高却不明显,测定尿中该酶活性有助于诊断肾小管疾患。因此GGT主要用于诊断肝胆疾病时特异性较高,根据其变化规律,对肝胆系疾病的鉴别诊断有较大临床价值,现将相关事项及分析结果报告如下。

    1  资料与方法

    1.1  仪器  用全自动生化分析仪魅力2000型进行分析测定,采用上海长征有限公司提供的试剂盒。

    1.2  一般资料  诊断为肝胆系统疾病患者260例,男158例,女102例。年龄在17~70岁,选择60例非肝胆系统疾病患者作对照。

    1.3  正常参考范围  男性11~50 u/L;女性7~30 u/L。

    2  结果

    见表1。

    表1  检验结果比较

    3  讨论

    在急性肝炎、慢性肝炎活动期、阻塞性黄疸、胆道感染、急性胰腺炎中GGT都可以升高,嗜酒或长期接受某些药物如苯巴比妥治疗者GGT活性也升高,但从表1看出,GGT在肝系统疾病中的变化规律:肝癌>胆石症>肝硬化>急性黄疸性肝炎>急性非黄疸性肝炎>慢性肝炎>对照组。肝癌和胰腺癌患者阳性率为95%,胆石症为93.47%,所以GGT虽为非特异性指标,但对肝胆系统疾病的诊断及其鉴别具有重要意义。


作者单位:747000 甘肃甘南,甘南藏族自治州人民医院检验科

日期:2008年6月30日 - 来自[2008年第6卷第3期]栏目
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检测血清谷草转氨酶(AST)和ν-谷氨酰转肽酶(ν-GT)有何临床意义?

  谷草转氨酶在心肌细胞中含量最高,但肝脏损害时其血清浓度也可升高,临床一般常作为心肌梗塞和心肌炎的辅助检查。谷草转氨酶的正常值为0~40μ/L,当谷丙转氨酶(ALT)明显升高,谷丙/谷草比值>1时,就提示有肝实质的损害。

  γ-谷氨(酰转肽酶(γ-GT)广泛分布于人体组织中,肾内最多,其次为胰和肝,胚胎期则以肝内最多,在肝内主要分布于肝细胞浆和肝内胆管上皮中,正常人血清中γ-GT主要来自肝脏。正常值为3~50μ/L(γ-谷氨酰对硝基本胺法)。此酶在急性肝炎、慢性活动性肝炎及肝硬变失代偿时仅轻中度升高。但当阻塞性黄疸时,此酶因排泄障碍而逆流入血,原发性肝癌时,此酶在肝内合成亢进,均可引起血中转肽酶显著升高,甚至达正常的10倍以上。酒精中毒者ν-GT亦明显升高,有助于诊断酒精性肝病。在急性肝炎时,ν-GT下降至正常较转氨酶为迟,如ν-GT持续升高,提示转为慢性肝病。慢性肝病尤其是肝硬化时,ν-GT持续低值提示预后不良。

日期:2006年4月16日 - 来自[肝炎肝硬化防治454问]栏目

纳洛酮及(或)醋谷氨治疗安眠药中毒的临床观察

  随者生活压力的增加,安眠药中毒在家庭中时常发生。纳洛酮用于安眠药中毒的治疗已得到公认,由于醋谷氨在中枢昏迷中的催醒作用,我们将它用于治疗安眠药中毒也取得了一定效果,现报告如下。

  1 资料与方法

    1.1 一般资料 自2002年1月~2003年1月共收治安眠药中毒患者179例,男43例,女136例,年龄14~55岁。患者入院前均有明确服用过量安眠药病史,有不同程度意识障碍、中枢性抑制及呼吸功能不全。诊断符合内科(第4版)安眠药中毒诊断标准,并除外脑血管意外及糖尿病昏迷等。随机分为3个治疗组,即纳洛酮治疗组(对照组)60例;醋谷氨治疗组66例;纳洛酮+醋谷氨治疗组(联合治疗组)53例。各组在性别、年龄、临床表现等方面比较差异均无显著性(P>0.05)。

    1.2 治疗方法 盐酸纳洛酮为北京四环医药科技股份有限公司生产,规格1ml∶0.4mg;醋谷氨为上海第一生化药业有限公司生产,规格2ml∶0.1g。(1)纳洛酮组:纳洛酮首剂0.4~0.8mg静推,随后即以0.8~1.2mg加入5%~10%葡萄糖液中静滴,根据病情可重复静推首剂量,日总量不超过4.0mg。(2)醋谷氨组:0.4~0.6g静滴,日总量不超过2.0g。(3)纳洛酮+醋谷氨组:首剂以纳洛酮0.4~0.8mg静推,随后醋谷氨0.4~0.6g静滴,必要时重复使用,纳洛酮日总量不超过4.0mg;醋谷氨日总量不超过2.0g。3组患者均给予吸氧、洗胃、纠正电解质及酸碱平衡失调等对症处理。

    1.3 疗效观察及评价标准 显著疗效为兴奋及共济失调症状明显减轻,昏睡及昏迷患者开始苏醒;症状减轻为上述症状减轻,完全清醒;症状消失为上述症状消失,稳步离院。

  1.4 统计学方法 由SPSS8.0软件进行统计学分析,计量数据由(ˉx±s)表示,用t检验,P<0.05为差异有显著性。

  2 结果

    2.1 疗效结果 各组患者经治疗症状均消失,治愈出院。

  2.2 各组取得疗效的时间 见表1。

    表1 3组显效时间和症状消失时间比较 (略)

  醋谷氨单独使用时显效时间长于对照组(P<0.05),联合治疗组在显效时间及临床治愈时间上均明显短于对照组,差异有非常显著性(P<0.01)。

    3 讨论

  安眠药中毒患者机体在应激状态下,脑内β内啡肽释放增加,作用于吗啡受体引起呼吸中枢抑制、高碳酸血症,以至昏迷。β内啡肽所致心血管效应可使心率减慢、血压降低、加重呼吸抑制的程度,严重者呈昏睡、昏迷状态及因呼吸中枢麻痹而死亡 [1]  。

    纳洛酮为内源性阿片受体拮抗剂,通过阻断阿片受体而防止或逆转安眠药中毒所致的意识障碍 [2]  。醋谷氨为谷酰胺的乙酰化合物,参与脑蛋白质和糖代谢,改善神经细胞代谢促进细胞氧化过程,维持神经应激能力,并能通过血脑屏障。具有提高大脑神经兴奋性的作用 [3]  。

    本组资料显示,单用醋谷氨较纳洛酮对安眠药中毒疗效差,但醋谷氨与纳洛酮联合用药疗效显著,优于单用纳洛酮治疗。考虑为:(1)纳洛酮为内源性阿片受体的特异性拮抗剂,通过阻断阿片受体而逆转中枢抑制作用。(2)醋谷氨参与脑蛋白质和糖代谢,改善神经细胞代谢促进细胞氧化过程,维持神经应激能力,提高了大脑神经兴奋性。(3)醋谷氨参与肝细胞代谢,加快了安眠药的代谢。两者协同作用加强,催醒效果提高。因此我们认为,醋谷氨联用纳洛酮可作为安眠药中毒的治疗药物。另外醋谷氨有产生低血压的可能,在使用中应引起注意。

  参考文献

    1 李大年.现代神经内科学.济南:山东科学技术出版社,2002,6,1111-1116.

    2 孟庆林.纳络酮的药理与临床应用研究.中国急救医学,1994,14(1):4.

    3 陈新谦.新编药物学.第15版.北京:人民卫生出版社,2003,164.      

  作者单位:830091乌鲁木齐新疆武警总队医院急诊科 

  (收稿日期:2004-08-30) (编辑青 叶)

日期:2005年9月22日 - 来自[2004年第2卷第11B期]栏目
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