房陵（房县）中药材品种丰富，过年这段时间，部分药材走缓，现药商手中持有部分大货，看年后的行情，这时候有俩车大货要发往成都，虎杖，红藤··相信年后行情会走好，望广大药商来房陵洽谈合做，其这里产的虎杖含量及药用价值及高，年销量将近500吨。
【摘要】目的建立用高效液相色谱法测定复方虎杖片大黄素含量的方法。方法用phenomenexprodigyODS3（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，流动相：甲醇-0．1%磷酸溶液（85∶15），流速：1．0ml/min，检测波长：254nm，进样量为5μl。结果对照品线性范围为12．02～72．14μg/ml，平均回收率为100．69%，RSD=1．42%（n=6）。结论该方法简便可行，重复性好，能有效控制复方虎杖片的质量。
【关键词】复方虎杖片；大黄素；高效液相色谱法
复方虎杖片原标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第三册，只有鉴别、检查项目，专属性差；没有建立含量测定方法，属国家药品标准提高行动计划品种。该品种由虎杖提取物、功劳木提取物、枇杷叶提取物组成，具有清热、祛痰、止咳、平喘，用于慢性支气管炎。因虎杖提取物在成药之中所占比重较大，主要活性成分有大黄素、大黄素甲醚、大黄酚、芪三酚、芪三酚苷等。由于产地不同，采挖季节不同，主要成分的含量也有很大的差别，同时芪三酚、芪三酚苷未有符合含量测定要求的对照品，因此，为控制其质量，本实验采用高效液相色谱法测定其大黄素的含量，以其作为指标性成分，从而达到控制产品质量的目的。
1 仪器、试剂与样品
仪器：TU-1901紫外可见分光光度计，sartoriusCP225D电子分析天平，岛津LC-2010A全自动高效液相色谱仪，Lcsolution工作站，KQ-400KDB数控超声波清洗器。
对照品：大黄素对照品（批号：110756-200110中国药品生物制品检定所，供含量测定用，纯度为100．00%，符合定量测定要求）。
试剂与样品：甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他制剂均为分析纯。复方虎杖片及缺虎杖的阴性对照样品（广西河丰药业有限公司提供）。
2 方法与结果
2．1色谱条件色谱柱phenomenexprodigyODS3（250mm×4．6mm，5μm），流动相：甲醇-0．1%磷酸溶液（85∶15）[1,2]，流速：1．0ml/min，检测波长：254nm，柱温：30℃。理论塔板数（n）按大黄素峰计算，应不低于9000，进样量为5μl。
2．2对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷减压干燥24h大黄素对照品适量，加甲醇制成每1ml含0．5mg的备用溶液，作为对照品贮备液。另精密量取贮备液适量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，作为对照品溶液，即得。
2．3供试品溶液的制备取本品，除去包衣，研细，混匀，取0．1g，精密称定，加0．5mol/L硫酸溶液20ml，加氯仿30ml，80℃水浴回流2．5h，分取氯仿层，酸液用氯仿提取3次，每次10ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2．4阴性样品溶液的制备取阴性样品，按2．3项方法制备阴性样品溶液。
在上述色谱条件下,分别进样对照品、供试品、阴性样品各5μl，大黄素保留时间约为9min，阴性样品对测定无干扰。
2．5线性关系考察精密称取大黄素对照品10．02mg，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1．2、2．4、3．6、4．8、6．0、7．2ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取上述溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，测定，记录峰面积，以峰面积（Y）对浓度（X）作图，得标准曲线，计算回归方程：Y=1．8248×104X-1．8952×102，r=0．9999，结果表明：大黄素在12．02～72．14μg/ml线性范围内，浓度与大黄素峰面积呈良好的线性关系。
2．6精密度试验取同一供试品溶液，重复进样6次，记录峰面积，结果RSD为0．14%。
2．7重复性试验取同一批样品6份，按上述方法测定大黄素的含量，结果RSD为1．26%。
2．8稳定性考察取“2．7”项下供试品溶液，在0，4，8，12，16，20，24h分别进样5μl，记录峰面积，结果峰面积的RSD为0．19%，表明供试品溶液在24h内均稳定。
2．9加样回收率试验精密称取同一批次（061201批）样品，（大黄素含量为8．6578mg/片，平均每片重为0．2624g）约0．05g。共取6份样，分别精密加入大黄素对照品储备液1．5ml，按上述方法测定，计算加样回收率。结果平均回收率为100．69%，RSD=1．42%（n=6），符合定量分析的要求。
3 样品测定
按上述含量测定方法，测定10批样品中大黄素的含量。
4 讨论
4．1本品主要成份游离蒽醌衍生物，不溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿、苯等。当用氯仿等有机溶剂从水溶液中萃取游离蒽醌衍生物时必须加酸酸化使之处于游离状态。从参考资料上得知，大多都以苯-硫酸或氯仿-硫酸为溶媒提取。本实验将氯仿、苯的提取结果进行比较，结果氯仿对大黄素的选择性较好，在HPLC色谱图上杂质峰较少，易于分离。而且苯毒性太大。因此，采用以氯仿-硫酸为溶媒进行提取。
4．2用浸泡、超声、加热回流三种方法对大黄素的提取进行了考察，实验表明，在相同的条件下，浸泡方法所测得含量最低；采用超声方法提取时，溶液乳化现象较严重，有浑浊现象，而且所测得含量较低；采用加热回流提取方法，效果最好。
参考文献
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［2］中华人民共和国药典委员会编.中国药典.化学工业出版社，2005：145．
虎杖来源于蓼科植物虎杖的根茎及根。多生于山谷、溪旁或岸边。分布我国中部及南部。产于江苏、浙江、江西、福建、山东、河南、陕西、湖北、云南、四川、贵州等地。
功能主治：祛风，利湿，破瘀，通经。治风湿筋骨疼痛，湿热黄疸，淋浊带下，妇女经闭，产后恶露不下，癥瘕积聚，痔漏下血。跌扑损伤，烫伤，恶疮癣疾。
虎杖主要以野生资源为主，近年来，虎杖的价格一直保持在两元左右，随着工值的提高，采挖虎杖的人逐年减少，使得虎杖的产量缺口加大，造成今年的价格略有提高，预计近几年还有攀升的趋势，主要原因如下:
1. 土地大量征用、乱采乱伐，不注意资源保护，造成野生资源逐年减少。
2. 劳动力工值的提高，国家对种粮的优惠政策使得农民提高了种粮的积极性，使得采虎杖的人逐年减少。
3. 虎杖的作用与用途不断拓宽，使需求逐渐加大，造成虎杖的缺口加大。
4. 各大药厂不断提取虎杖甙的有效成分，造成虎杖的用量不断加大。
5. 随着科学技术的提高，人们不断发现了虎杖的新用途 ，并不断在实践中应用，疗效确切，中医也加大了虎杖的使用，使得医院与药房的虎杖用量增加。
以上几点属个人观点，仅供参考，欢迎提出不同意见，共同探讨虎杖的后市。
【摘要】 目的 探讨虎杖苷（PD）对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染小鼠心肌微血管密度(MVD)的影响及对心肌的保护作用。方法 120只Balb／c雄性小鼠随机分为4组：正常对照组、CVB3感染组、CVB3感染加PD治疗组和PD对照组，分别在实验的第3、7、10、14、21、30天处死动物，留取血清和心肌标本，PFU法测定心肌组织内感染性病毒颗粒，免疫组化检测心肌CD34表达，显微镜下计数心肌组织MVD。结果 与正常对照组比较，感染组小鼠MVD计数增加(P＜0.05)；与感染组比较，PD治疗组小鼠心肌组织内病毒滴度明显低于感染组（P＜0.05）； MVD计数显著增高，死亡率显著降低(P＜0.05)。结论 PD可以明显减轻病毒性心肌炎时心肌病理损害,其保护作用可能与抗CVB3病毒和使心肌MVD增高有关。
【关键词】 虎杖苷 柯萨奇B3病毒 病毒性心肌炎 MVD
Effect of polydatin monomer on acute viral myocarditis
SONG Junhua1 WANG Shuyun2 MU Daoyu2 et al
1 Qingdao Health School，Qingdao 266071；2 School of Medicine ,Shandong University
【Abstract】 Objective To investigate the regulation effect of PD on the MVD of myocardia1 tissue and the effect of PD on viral myocarditis in vivo．Methods One hundred and twenty male Balb/c mice were randomly divided into four groups：normal control group，the Coxsackie virus B3(CVB3) infected group，the CVB3 infected and PD treated group，PD control group．They were killed on days 3，7，10，14，21and 30 respectively．Serum and cardiac muscle were preserved.Virus titer in heart by plaqeforming assay.The CD34 immunohistochemical studies and medical imagine analysis were performed．Results Markedly increased microvessel density were observed in the myocardial tissue of infected mice in comparison with contro1 group (P＜0.05)．Virus titer in group of CVB3 infected mice was significantly higher than that in group of infected mice with PD treatment.Markedly increased microvessel density were observed in PDtreated group in comparison with CVB3 infected group (P＜0.05),mortality was greatly reduced.Conclusion PD therapy improved the severity of myocardial lesions in viral myocarditis.The therapeutic effect of PD might be mediated through resisting CVB3 and markedly increased microvessel density．
【Key words】 polydatin，CVB3，viral myocarditis，microvessel density
病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)是临床常见的心脏疾患，发病率有逐年增高的趋势，但西医缺乏对本病的有效治疗药物。近几年来中药虎杖苷（PD）在防治冠心病方面取得了明显的效果。也有PD提取液具有抗CVB3病毒的作用的报道［1］，但无PD单体治疗VMC的相关报道。本实验旨在分析心肌病理改变与MVD之间的关系，探讨PD单体对VMC的影响。
1 材料与方法
1.1 材料 CVB3病毒Nancy株购自山东省医学科学院，经Hela细胞培养扩增后，冻融3次，上清液分装，测得半数组织感染率（TCID50）为106/ml，小量分装后-80℃保存备用； Balb/c小鼠购自解放军第一军医大学实验动物中心，SPF级，雄性，2～4周龄，体重12～18 g，共120只；虎杖苷由第一军医大学病理生理教研室提供；Rabbit anti CD34购自美国Neuwork公司；免疫组化SP试剂盒购自北京中山试剂公司； PBS缓冲液由山东大学医学院病理生理教研室提供；多聚赖氨酸购自福州迈新生物技术开发公司；DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司；Mouse VEGF ELISA Kit，FMK 0014购自Jingmei Biotech Co., Ltd公司。
1.2 心肌炎模型的制备和分组 将小鼠随机分为4组：感染组30只和PD治疗组30只，每只腹腔接种0.1 ml TCID50为106/ml的CVB3病毒液；正常对照组30只和PD对照组30只，每只腹腔接种0.1 ml不含CVB3的Eagle's液。病毒接种日为0 d。PD治疗组从接种病毒稀释液3 d后、PD对照组从接种Eagle's液3 d后，每日尾静脉注射0.2 mmol/L的PD 0.1 ml，连续7 d；正常对照组和感染组均每日尾静脉注射0.1 ml生理盐水，连续7 d。
1.3 标本留取 分别在接种后的第3、7、10、14、21、30天，每组随机抽取5只小鼠经眼球采血后断颈处死并留取心脏。将血离心后分装血清于-80℃冻存，无菌条件下取心脏，称重。一半用于病毒滴度测定，一半置4%多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm连续切片，备做HE染色和免疫组化。
1.4 检测项目
1.4.1 光镜下观察：10％甲醛固定，石蜡包埋，组织切片，HE染色后作组织病理学检查。心脏坏死的范围和细胞浸润范围用对照双盲法评分。心肌病理评分标准：0级：无心肌损害；1级：1或2个小病灶；2级：数个小病灶；3级：多个小病灶或严重的大病灶；4级：多个大病灶，弥漫性浸润或坏死。
1.4.2 病毒滴定：采用国际通用的病毒滴定法——PFU（Plaqueforming unit）法，即空斑形成技术定量测定心肌组织内感染性病毒颗粒。①多孔板内单层细胞的制备：将已经长成单层的Hela细胞以0.25%胰酶消化，吹打分散，以105/ml的细胞浓度定量接种在16孔培养板内，5%CO2、37℃培养，24 h后长成单层备用。②心肌组织病毒分离和病毒毒力的滴定：将心肌组织称重后用微量匀浆器进行匀浆，加含有2%小牛血清的1640培养液吹打，以10 000 r/min转速离心，取上清液0.1 ml用PBS以1∶10、20、40、80、160、320、640、1 280进行系列稀释，取各稀释液0.1 ml分别加入已经长成单层的Hela细胞上，5%CO2、37℃培养，每日观察细胞形态变化，倒置显微镜下进行空斑计数。③免疫组化SP法检测心肌组织中CD34的表达：石蜡标本脱蜡，采用微波抗原修复，滴加正常动物血清，过夜，滴加一抗为CD34兔多克隆抗体(1∶100)，4℃过夜，滴加生物素化二抗，再滴加链霉亲和素一生物素化过氧化物酶复合物，DBA显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。用已知显色阳性的心肌切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。
根据Weidner评判标准计数MVD，凡呈现棕黄色单个内皮细胞或内皮细胞群者均作为一个血管计数，肌层较厚及管腔面积大于8个红细胞的血管不计数。先在低倍镜下寻找血管高密度区，再在高倍镜下计数微血管数目。在3个血管最多的区域400倍下进行计数，分别计数每区域5个视野，取均值。
1.5 统计学处理 各组照片应用Simple PCI图像分析系统分析。采用SPSS11.0 统计软件包进行统计学分析，计量资料以均数±标准差 (x±s)表示，组间比较用方差分析，P＜0.05差异有显著性。
2 结果
2.1 一般状况 正常对照组和PD对照组小鼠活动力强，毛色均匀光泽，进食正常，体重逐日增加。接种病毒小鼠在感染2～3 d后，均出现不同程度皮毛不光泽且呈束状，活动、摄食减少，腹泻；病毒接种4～5 d时，病毒对照组小鼠或烦躁不安，相互撕咬，或纳差精神萎靡，开始死亡；PD治疗组症状则相对较轻。14 d后逐渐恢复进食、活动，感染小鼠病情趋于恢复。PD治疗组的小鼠存活率显著高于感染组，见表1（P＜0.05）。表1 各组小鼠生存率
2.2 心脏大体变化 正常对照组和PD对照组小鼠心脏色泽鲜红，富有光泽。病毒对照组小鼠在接种病毒7 d后，心脏色黯红、肿大，心外膜下可见灶状或片状病变区，心脏外有大量白色膜状渗出物覆盖，白色渗出物擦不掉；PD治疗组比病毒对照组明显减轻,仅见有少量的坏死灶和炎性细胞浸润。
2.3 心肌病理改变 正常对照组和PD对照组小鼠心肌组织均无病理改变：心肌细胞呈短圆柱状，胞浆丰富而红染，胞核卵圆形，位于细胞中央；心肌纤维之间有薄层结缔组织，核呈梭形，高倍镜下隐约可见横纹；心外膜为核扁平的间皮细胞，紧贴心肌纤维。
病毒对照组小鼠心肌组织：在感染后3 d心肌就出现异常，心肌细胞出现肿胀、局灶性颗粒变性。第7天可见心肌细胞小灶性坏死，崩解，周围见单核细胞、淋巴细胞浸润。病变于感染后10～14 d时达高峰，心肌实质内散在面积较大的坏死灶，心尖处及室间隔最明显，坏死灶周围有较多炎细胞浸润，主要是淋巴细胞、单核细胞和少量的中性粒细胞，并可见累及心外膜的大块状心肌坏死及心外膜的钙化。21 d后小鼠心肌基本恢复正常，炎细胞消散，部分小鼠心肌纤维化，结缔组织增生，坏死灶形成瘢痕。
PD治疗组心肌炎症和坏死等病理改变明显轻于病毒对照组，7 d时仅见少数以淋巴细胞为主的炎细胞浸润，胞浆嗜伊红浓染，均质化，微细结构丧失。10 d时可见炎性细胞灶性浸润，有散在心肌细胞坏死。14 d后开始恢复正常。
各组小鼠心肌病理积分见表2。表2 CVB3感染小鼠的心肌病理积分
2.4 病毒分离 CVB3感染后3 d心肌已可分离出病毒，7 d时达高峰，10 d后即开始下降，21 d转为阴性。PD治疗组小鼠心肌组织内病毒滴度明显低于病毒对照组（P＜0.05），并且在感染14 d时心肌内已分离不出病毒，说明虎杖甙具有显著的抗CVB3病毒功效。各感染CVB3小鼠病毒检测结果见表3。表3 CVB3感染小鼠的心脏病毒滴
2.5 计数微血管密度 经CD34免疫组化染色，正常小鼠心肌微血管着色较淡，密度稀疏（图1），而感染组小鼠和PD治疗组小鼠心肌内微血管尤其是心肌毛细血管的管壁可见明显的着色较重的棕黄色环（分别见图2，图3）；计数病毒感染14d时各组每高倍视野微血管个数（表4），发现感染组微血管数目高于正常对照组小鼠（P＜0.05），PD治疗组微血管数目显著高于感染组（P＜0.05）。表4 小鼠心肌微血管密度
3 讨论
本实验中，与感染组小鼠相比，PD干预使VMC小鼠心肌炎细胞浸润及坏死显著减轻，存活率增加，提示接种CVB3后早期应用PD对实验性急性VMC有保护作用。PD治疗组小鼠心肌组织内病毒滴度明显低于感染组（P＜0.05），并且在感染14 d时心肌内已分离不出病毒，说明虎杖苷具有显著的抗CVB3病毒功效。
最新研究发现，PD的有效成分白藜芦醇对参与柯萨奇病毒复制的蛋白酪氨酸激酶PTK中Src亚类家族成员酶pp561ck和pp60csrc活性均有抑制作用，可抑制免疫激活所致的炎症反应和病毒复制［2］。体外抗病毒作用研究发现，虎杖对CVB3具有一定直接杀灭作用，并且可抑制CVB3的生物合成［１］。
病毒性心肌炎的发病机制主要有二：一是病毒的直接损害作用；二是免疫机制［3］。不管何种机制引起的损伤，都会导致心肌缺血缺氧，心肌缺血缺氧可能同时增加促血管生长因子和抗血管生长因子的产生，共同参与缺血心肌的血管新生过程，维持心肌血管的正常功能状态［4］。其中，最重要的正向调节血管生成因子为血管内皮生长因子(VEGF)［5］。VEGF能作用于全身血管内皮细胞，特异的促进内皮细胞的分裂、增殖和迁移，并在血管发生和血管新生中发挥重要调节作用［6～8］。心包液中抗血管生长因子为内皮抑素 ［4］ 。如果促进因素占主导优势，最终表现为促血管的生成。
对血管生成的定量分析有许多方法，其中MVD是一个广泛采用的衡量血管发生的定量指标。本实验用CD34抗体标记微血管发现受损心肌周围有大量微血管生成。感染组小鼠心肌组织内微血管数目与正常对照组比较明显增多；PD治疗组心肌微血管不仅较正常小鼠明显增多，与感染组小鼠微血管数目比较也有显著意义。缺血缺氧是病毒性心肌炎重要病理生理过程，低氧条件下内皮细胞的许多生物学特性发生改变，主要表现为增殖受抑制，分化能力下降，并伴有低氧介导的细胞能动性降低，细胞抗损伤的修复能力下降等。PD一方面通过抑制CVB3复制、杀灭CVB3病毒，保护心肌细胞，使心肌受损程度减轻，缺血坏死面积减小；另一方面使血管新生过程中促进因素占优势，大量新生成熟、稳定的微血管的形成可以增加血供，为心肌输送更多的营养，促进炎症消散吸收，增强心功能，提高心肌细胞抗损伤的修复能力，均有利于改善心肌缺血缺氧状态。
本研究提示，PD有显著的抗CVB3病毒功效，可以增加VMC小鼠心肌MVD，对CVB3感染小鼠有明显保护作用，为PD的进一步研究开发提供了科学依据。但具体通过何途径增高MVD，血管生成的负向调节如何受抑制，正向调节如何被促进，仍有待于进一步研究。
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作者单位：青岛卫生学校 青岛市 266071
摘要：目的：测定金虎保肝颗粒中大黄素的含量：方法：采用薄层扫描法进行测定。结果：3批样品中大黄素的含量范围为4.34～4.50mg/袋，平均回收率为98.7％，RSD=1.15％。结论：本法简便、准确、灵敏、重现性好，可用于该制剂的质量控制。
关键词：金虎保肝颗粒；虎杖；大黄素；含量测定；薄层扫描法
金虎保肝颗粒是正在研制的新药，具有清热保肝之功效：本品由虎杖、茵陈等l0味中药组成；虎杖是本方剂的君药，其所含大黄素及其苷类是清热保肝的主要有效成分 ，为制定本制剂的质控标准，参照有关文献。 ，建立了本品中大黄素的含量测定方法，现报道如下。
1 仪器与试剂
CS-9301型薄层扫描仪(日本岛津公司)，定量毛细管(美国Drummond公司)，薄层铺板仪(重庆新力试验电器厂)，硅胶G(青岛海洋化工厂)，石油醚、盐酸、冰醋酸、氯仿等所用试剂均为分析纯；大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号756—9204)。金虎保肝颗粒样品(批号20010305、20010317、20010326，均由本课题组研制)，虎杖及制剂所用药材均购于济南市建联药材供应站，经鉴定虎杖为蓼料植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb．et Zuce．)的干燥根茎和根，适当粉碎后备用。
2 方法与结果
2．1 水解时间的确定
称取本品粉末约1g，精密称定，共称取3份。加蒸馏水50ml，滴加盐酸5ml，混匀，加入氯仿50ml，分别水浴水解1，2，3h，按供试品溶液的制备方法，制备各不同水解时间的样品液，定容至l0ml，吸取相同体积的各样品液点样测定，结果发现水解1h样品中大黄素的测定值偏低，而水解2h和3h样品的测定值基本相同，表明样品水解2h即可水解完全，故水解时间确定为2h。
2．2 供试品溶液的制备
取本品适量，研细，取1g，共3份，精密称定，加蒸馏水50ml，滴加盐酸5ml，加入氯仿50ml，水浴回流水解2h，吸出氯仿液，再加入氯仿(50，30m1)同上回流2次，每次0.5h，吸出氯仿液，合并3次氯仿液，以50ml水洗涤，弃去水液，回收氯仿，残渣以无水乙醇定容至l0ml量瓶中，备用。
2．3 虎杖药材液的制备
取虎杖药材粉末0.5g，精密称定，按供试品液的制备方法制成虎杖药材溶液l0ml，备用。
2．4 大黄素对照液的制备
取大黄素对照品适量，用甲醇制成每1ml含大黄素0.2mg的溶液，作为对照品溶液。
2．5 缺虎杖空白液的制备
按处方比例，准确称取除虎杖外的其它药材，模拟样品的制备和供试品液的制备方法制成缺虎杖空白液l0ml。
2．5 薄层色谱条件的选择
层析板：0.3％CMC硅胶G板(20cm×20cm×0.4mm)，105℃活化30min置干燥器内备用。展开剂：石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯-冰醋酸(15：1.5：1，V／V)，依法点样展开，结果样品、虎杖、大黄及对照品在相应位置上，有黄色斑点，阴性对照液无干扰。
2．6 样品含量测定
2．6．1 测定波长的选择 对供试品及大黄素经层析后于370～600nm下进行扫描确定，画出吸收曲线图，测得最大吸收波长=445nm，参比波长=600nm。
2．6．2 测定条件采用双波长锯齿扫描，测定波长=5nm，参比波长=600nm，狭缝0.4mm×0.4mm，线性化参数S=3，外标两点法测定。
2．6 3 空白干扰试验分别取供试液2μl，大黄素对照品溶液3μl，缺虎杖空白溶液2μl，点于同一薄层板上，依法展开，取出，描绘吸收曲线，结果供试品和大黄素在445nm处均有最大吸收峰，而缺虎杖空白溶液在与对照品相应的位置上无吸收峰出现。
2．6．4 线性关系考察 精密吸取大黄素对照液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0μ1分别点于同一薄层板上，按选定的色谱条件展开后进行扫描测定，以点样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明大黄素在0.2～1.6μg范围内与峰面积呈良好线性关系，回归方程为：Y=2938.9X+563.8，r=0.9990。
2．6．5 精密度试验
2．6．5．1 同板精密度试验 准确吸取同一批拱试品液2μl，对照品溶液3μl，于同一薄层板上各点5个相同量的点，依法测定，结果RSD分别为1.0％和1.59％
2．6．5．2 异板精密度试验 准确吸取同一批供试品液2μl，对照品溶液3μl，分别点于5块薄层板上，依法测定，结果RSD分别为1.28％和2.16％ 。
2．6．6 斑点稳定性试验 将层析后的供试品及对照品每隔20min测定1次，连续测定6次。结果表明，大黄素在2h内斑点颜色较稳定，峰面积基本不变。
2．6．7 重复性试验 取同一批样品约1.0 g，精密称定，共称取6份，依法制备各供试品溶液，结果6次测得样品的平均含量为4.64mg/g。RSD：1.51％。
2．6．8 回收率试验 称取已知含量的金虎保肝颗粒粉末约0.5g，精密称定，共5份，各加人大黄素对照品2.260 mg，按“供试品液的制备”项下制备依法测定各试验液中大黄素的含量。
2．6．9 样品的测定 分别准确吸取3批供试品液各2μl和虎杖药材液1μ1，点于同一块薄层板上，依法测定各批金虎保肝颗粒中大黄素的含量。
3 讨论
试验中发现点样量、薄层板厚度、层析温度对样品中大黄素的分离都有较大影响。通过对上述3种条件的筛选发现，点样量大于1.6μg，层析板厚度小于0.4mm，温度高于30℃时都易产生不同程度的拖尾。
本试验采用氯仿提取液回收后直接点样测定，方法简便，灵敏度高，重现性好，是控制本品质量的较理想方法。
参考文献
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雷公云∶凡使，勿用天蓝并斑柚根，其二味根形、味相似，用之有误。
凡采得后，细锉，却，用上虎杖叶？一夜，出，晒干用。
黄精为药食两用植物，是常用大宗品种，目前市场价格是每公斤15—17元。今后随着用量的增加和资源的减少，价格还有上升的趋势。但有种植品的补充，涨幅空间不会太大。
连线草为唇形科植物活血丹的全草，又名金钱草 ，属冷背品种。去冬今春，由于市场没有库存，价格暴涨到了每公斤12—14元。今年产新后，价格急速回落，现价每公斤2.5一3.5元 ，尚无商家收购。由于用量太小，后市不为看好。
虎杖为蓼科植物虎杖的根茎，市价3.5—4元/公斤。虎杖是野生品种，资源储存量较大。但相对于其它大宗品种，虎杖的用量较小，市场价格一直无大的涨幅。其后市将在振荡中缓升，宜作长线品种。
