主题:光化学

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化学所在DNA光化学反应动力学机理研究方面取得系列进展


:(左)结合在G-四链体中的配体卟啉分子的三重态衰减动力学曲线;(右)阳离子自由基G+•在G-四链体结构中不同于单个碱基的独特的脱质子反应途径。

光化学反应导致DNA损伤,引发疾病和衰老。DNA光化学反应是分子生物学与物理化学交叉的基础前沿研究课题。在基金委、科技部、中科院支持下,中国科学院化学研究所光化学重点实验室的科研人员致力于发展时间分辨激光光谱方法,在分子和量子态层次上深入研究DNA光化学反应的复杂过程和机理,取得系列进展。

在DNA生色团碱基分子的光化学反应、导致交联损伤的CPD反应(嘧啶碱基双键的[2+2]环加成)以及SP反应(CH3基团与相邻T碱基C=C双键的加成反应)研究方面,揭示一类激发三重态的暗态反应机理和势能面交叉导致的非绝热反应途径(J. Phys. Chem. A. 2011, 115,5335-5345,J. Phys. Chem. B. 2012, 116,11117-11123,J. Phys. Chem. A. 2014, 118, 9105-9112)。在活性氧ROS引发的DNA氧化性损伤反应研究方面,阐明了6-硫代鸟嘌呤(6-TG)及4-硫代尿嘧啶(4-TU)分子吸收UVA紫外光、光敏产生单态氧(1O2)、1O2氧化导致致癌产物的基元反应途径和关键的过氧化物反应中间体,揭示了生物分子水环境下水分子协助调控反应的重要作用(J. Am. Chem. Soc. 2013, 135,4509-4515;J. Phys. Chem. B, 2014, 118,5864-5872)。

最近,科研人员将研究深入至更为复杂的DNA的二级结构G-四链体的反应体系。探测到G四链体微环境下配体分子不同于体相的激发三重态衰变过程(图左),由此发展了一种新的研究G四链体-配体相互作用的动力学实验方法,可清晰区分末端堆积、插入等pi-pi堆积作用方式并获得定量信息(J. Phys. Chem. Lett. 2014, 5, 2259-2266);同时,对单电子氧化产生DNA的阳离子自由基G+•的脱质子反应,观测到G-四链体中不同于单个碱基dG以及双链DNA的独特的脱质子反应途径(脱氨基质子N2-H而不是亚氨基质子N1-H),揭示了DNA结构的局部氢键微环境对质子转移反应机理的影响(图右),阐述了G-四链体在DNA自由基化学中的动力学微观机理(J. Am. Chem. Soc. 2015, 137,259-266)。这些工作同时为化学反应溶剂化(pi共轭、氢键等效应)的研究提供了新的认识。

日期:2015年3月24日 - 来自[技术要闻]栏目
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中美研发光化学粘合技术有望代替外科缝合针线

    近日从上海交通大学医学院附属上海市第三人民医院了解到,一项“光化学粘合”技术有望代替外科医生的缝合针线,中美两国科研人员正对此技术进行临床验证。
  据了解,美国哈佛大学附属麻省总医院威尔曼光医学中心研究人员发明了“光化学粘合(PTB)”技术。所谓“光化学粘合”,就是在激光照射下,光敏剂的分子结构会发生改变,释放出电子,这些电子跨越到相邻的胶原分子周边,促使胶原蛋白的分子链通过共价化学键彼此联结粘连在一起,这样创口两侧皮肤的胶原纤维就交织在一起。胶原纤维存在于所有的皮肤、器官、神经里,人体的很多地方都能借助这种方法进行“光化学粘合”。
  研发团队成员之一、上海三院副院长姚敏介绍,目前选择的光敏剂是一种叫“玫瑰红”的粉红色液体,能被波长为532纳米的激光激活。动物实验时,先在兔子手术切口两侧的皮下缝合几针,使组织贴合到一起,以方便电子跨越,随后在表皮创口两侧各滴上几滴“玫瑰红”,再将内置激光器的金属架置于创口上方。通过棱镜的反射,能够射出一条与创口相似的线形绿光。只需3分20秒,切口处的皮肤就紧密粘合在一起,几乎看不出切口的痕迹。
  据了解,PTB技术能最大限度地减少炎症反应。姚敏表示,这项技术仍有弱点,比如只能在光线可以穿透的深度起效,所以无法代替皮下组织的缝合,对于暗的或不透明的人体组织比如骨头等,也起不了作用。(健康报)

日期:2012年7月28日 - 来自[普通外科]栏目

重组人促红细胞生成素对人视网膜色素上皮细胞光化学损伤保护性作用的研究

2008年06月11日 《中华眼科杂志》-2008年44卷1期 -50-55页 医学空间(MEDcyber.com)6月11日消息,该项研究目的是研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)在人视网膜色素上皮(RPE)细胞光化学损伤中的保护作用及其作用机制,为年龄相关性黄斑变性等眼部病变的药物治疗和预防提供理论依据。方法为实验研究。取成人ARPE-19细胞株传代培养的2~5代细胞建立光损伤模型,光照12h后再培养24h终止培养,采用噻唑蓝比色法和AnnexinV-FITC/PI流式双染法检测不同浓度的rhEPO干预治疗前后RPE细胞活性的变化及细胞凋亡的变化,采用酶联免疫吸附实验和免疫组织化学法定量检测不同含量rhEPO干预治疗前后RPE细胞caspase-3表达的变化,并添加AG490(Jak2激酶抑制剂)探讨重组人EPO对人RPE细胞光化学损伤的保护性作用和途径及其保护性机制。结果rhEPO可明显增强RPE细胞的活性,以40U/mLEPO组结果最明显;明显减少光化学损伤诱导的人RPE细胞的凋亡,以40U/mLrhEPO组结果最明显。在加入AG490组,rhEPO对细胞活性的增强作用和抑制凋亡作用均被阻止。由此得出结论rhEPO对人RPE细胞的光化学损伤有保护治疗作用,主要通过EPO的受体后保护作用机制起作用,即通过与受体结合,激活Jak2激酶的途径实现的。
日期:2008年6月11日 - 来自[眼科]栏目
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柱后光化学衍生荧光检测高效液相色谱法测定食品中的维生素B1

摘 要 研究柱后光化学衍生荧光检测高效液相色谱分离测定食品中维生素B1的方法。采用C18柱,以含有2%乙腈的pH 4.0磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L)作流动相反相分离,猪肝等食品中的维生素B1可与其它杂质达到完全分离。色谱流出液在柱后与0.75% Na2SO3-4% NaOH的混合试剂溶液在线汇合后流经一聚四氟乙烯(PTFE)细管制成的光化学反应器时,维生素B1转化为强荧光产物,由荧光检测器测定。在最佳条件下,进样20 μL检测限为3.8 μg/L,工作曲线的线性范围为0.033~10 mg/L,相对标准偏差(RSD)为 1.8%,标准加入回收率为97%~102%。所建立的方法用于鲜猪肝和奶粉中维生素B1的测定,取得了满意的结果。 Abstract A high performance liquid chromatographic method with post-column photochemical derivation and fluorescence detection was developed for the analysis of thiamine in foods. A C18 column was used for separation, and elution was performed with a pH 4.0 phosphate buffer (0.1 mol/L) containing 2% acetonitrile. When the eluate was on-line converged with a mixed 0.75% Na2SO3-4% NaOH solution, thiamine in the eluate was transferred to an intensive fluorescence compound by post-column photochemical derivation that occurred in a knotted polytetrafluoroethylene reactor, and detected by a spectrofluorimetor. Under optimized conditions, a detection limit of 3.8 μg/L thiamine was achieved with the injection volume of 20 μL, and a linear calibration curve was obtained in the range of 0.033~10 mg/L thiamine. RSD was in the level of 1.8%, and the recoveries of spiked analyte were in the range of 97%~102%. The developed method was applied to determine the thiamine contents in pork liver and milk powder, and satisfactory results were obtained. 1 引  言   测定食品中维生素B1(VB1)的经典方法是经离子交换柱分离共存的干扰物质后,在强碱性条件下,用K3Fe(CN)6将其氧化为硫色素,再经异丁醇萃取、荧光光谱法测定〔1〕。该法操作繁琐、费时, 且须使用有毒、有害试剂。近来,采用荧光检测的高效液相色谱(HPLC)测定食品中VB1的方法由于操作简便快速、灵敏度高、干扰小而越来越受到人们的重视。但不论采用柱前〔2,3〕还是柱后〔4,5〕化学衍生,均离不开有毒试剂K3Fe(CN)6。   光化学荧光法〔6〕是以光子作为衍生试剂的新颖的荧光分析法。Guo等〔7〕首先报道了VB1的光化学荧光现象,建立了不用任何氧化剂的原位光化学荧光光谱法。我们〔8〕进一步研究了VB1的在线光化学荧光反应,并应用于流动注射在线光化学荧光光谱法测定多种药物制剂及血清中的VB1。   本文在文献〔8〕的基础上,研究建立HPLC分离-柱后光化学衍生-荧光检测法测定食品中微量VB1的方法。 2 实验部分 2.1 仪器   液相色谱分离系统由Beckman-114高压泵、Alltima-C18色谱柱(粒径5 μm, 4.6 mm×25 cm)和Beckman 四通进样阀组成;岛津RF-540荧光光谱仪配置9 μL石英流通池作为荧光检测器;柱后光化学反应器按文献〔9〕的方法自制,所用的光源为6 W低压紫外汞灯(最大辐射波长253.7 nm),编结反应器由内径0.5 mm 长75cm的PTFE管编成。Rabbit蠕动泵(法国Rainin公司)。 2.2 试剂   维生素B1标准储备液(1.00×103 mg/L的0.01 mol/L HCl溶液), 配置于棕色瓶中,冰箱保存。NaOH-Na2SO3混合试剂溶液,1.5 g Na2SO3溶于200 mL 4 % NaOH溶液,当天配制。色谱流动相, 20 mL乙腈+980 mL pH 4.0的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液。 2.3 试样制备   奶粉:准确称取10 g奶粉于250 mL锥形瓶中,加入70 mL 0.1 mol/L的HCl溶液,摇匀后,置于高压锅(1MPa)中水解30 min。冷却后,取出,滴加6 mol/L NaOH至pH 5~6, 转入100 mL容量瓶后,用水定容。过滤,弃去初滤液,收集续滤液备用。   猪肝:新鲜猪肝洗净后,捣碎。准确称取13 g捣碎的猪肝于250 mL锥形瓶中。以下与奶粉的处理方法相同。 2.4 操作步骤   置荧光光谱仪的激发和荧光波长分别于370 nm和440 nm,激发和荧光狭缝为5 nm。打开光化学反应器的紫外灯,启动高压泵和蠕动泵分别泵入流动相和NaOH-Na2SO3混合溶液。待基线平直后,用微量注射器取经0.3 μm 滤膜过滤后的20 μL制备液进样。记录色谱峰。每个试样平行测两次,以平均峰面积外标法定量。 3 结果和讨论 3.1 方法设计   柱后衍生HPLC分离测定食品中VB1时,多采用反相离子对色谱的分离模式〔5〕。以这种方式分离,流动相中甲醇等溶剂的含量较高,会对柱后光化学衍生产生负面影响〔8〕;而且反相离子对色谱需使用价格昂贵的对离子试剂己烷磺酸钠。考虑到VB1虽为离子化合物,但分子中仍有较大的疏水性母体,因此,本文试用 C18柱以一般的反相模式进行分离。 图1 实验装置示意图 Fig.1 Schematic diagram of the experimental set-up C.C18分离柱(separation column), 4.6 mm×25 cm; D.荧光检测器(fluorescence detector), λex, 370 nm, λem, 440 nm; E.流动相(mobile phase, 0.1 mol/L pH 4.0 phosphate buffer containing 2% acetonitrile,), 1.0 mL/min; K.编结反应器(knotted reactor made of 0.5 mm×75 cm PTFE tubing); L.6W低压汞灯(6 w low pressure mercury lamp);P1.高压泵(high pressure pump); P2.蠕动泵(peristaltic pump); R.混合试剂溶液(0.75% Na2SO3-4 %NaOH mixed solution), 0.5 mL/min; S. 试样溶液(sample solution), 进样体积(injection volume),20 μL; V. 进样阀(injection valve); W.废液(waste)。   VB1的光化学反应需在强碱性条件下进行,而还原剂亚硫酸钠对该反应有明显的增敏作用〔7,8〕。因此,本文使含有亚硫酸钠的氢氧化钠溶液与色谱流出液在柱后汇合后,再流经光化学反应器。为减少柱后谱带的扩张和过份的稀释作用,流动相和Na2SO3-NaOH混合试剂溶液的流量比设计为1∶0.5 ,且将光化学反应器制成编结状〔9〕。按此思路所设计的实验装置见图1。 3.2 流动相的优化   以鲜猪肝提取液为试样,对流动相的组成进行了优化。发现用磷酸盐缓冲体系峰形较醋酸盐好;以磷酸盐缓冲液-乙腈作为溶剂体系所得的VB1峰高较用同浓度的磷酸盐-甲醇体系高4~6倍。  图2 鲜猪肝制备液的色谱图  Fig.2 A typical chroma- togram for the sample of pork liver  保留时间5.23 min的峰为维生素B1(the peak with retention time of 5.23 is for thiamine)。   这是因为甲醇对VB1的光化学反应有抑制作用〔8〕。在磷酸盐缓冲液中乙腈浓度大于10%时,VB1很快流出而不能与杂质分离;当乙腈浓度在2%左右,磷酸盐缓冲液的pH值在4.0时,VB1可与猪肝中的杂质完全分离;pH 4.0磷酸盐缓冲液的浓度在0.05~0.2 mol/L之间变化,以浓度为0.1 mol/L时,柱效、分离度和灵敏度均可兼顾,而且峰形良好,见图2。 3.3 柱后光化学衍生条件的优化 3.3.1 化学条件 分别试验了NaOH和Na2SO3的浓度对柱后光化学反应的影响, 结果如图3a和图3b所示。可见, NaOH浓度在4% 、Na2SO3浓度在0.5%~1.0%间,荧光检测的灵敏度最高。故选择0.75% Na2SO3-4% NaOH的混合溶液作为柱后衍生的试剂。 图3 混合试剂中NaOH和Na2SO3的浓度对柱后光化学衍生荧光强度的影响 Fig.3 The influences of NaOH and Na2SO3 concentrations in the mixed reagent solution on the fluorescence intensity of post-column photochemical derivation a. NaOH浓度的影响,Na2SO3浓度为0.75%(0.75% Na2SO3 with variable NaOH concentrations); b.Na2SO3浓度的影响,NaOH浓度为4%(4% NaOH with variable Na2SO3 concentrations)。 3.3.2 物理条件 在固定流速的条件下,VB1在柱后光化学反应中接受光照的时间受光化学反应器的管长所控制。研究了编结反应器管长对VB1峰高的影响,发现管长在50~100 cm间测定VB1的灵敏度最高。本实验选用长75 cm的PTFE管(内径0.5 mm)编制成编结反应器〔9〕后,自由地盘绕在6 W紫外灯管上作为光化学反应器。与柱后化学衍生法相比较〔4,5〕,光化学衍生反应由于速度快〔7,8〕,所需的反应器管长较短,可减小柱后的谱带扩张,有利于分离效率和灵敏度的提高。 3.4 线性范围、检测限、精密度和回收率   在图1所示的最佳条件下, VB1的线性范围为0.033~10 mg/L,线性回归方程为A=1.78+26.9C(A为峰面积,C为VB1浓度, mg/L),相关系数r=0.9994;检测限(S/N=3)为3.8 μg/L;1.2 mg/L 的VB1 试液11次测定的RSD为1.8% 。每10 g奶粉中加入0.1 mg VB1后测得的回收率为102%±7%(n=3),每13 g鲜猪肝中加入0.05 mg VB1后测得的回收率为96%±7%(n=3)。分析速度约为8次/h。本法的检测限与柱前化学衍生法〔2〕相似,但由于无须HPLC测定前的氧化、萃取等手工操作步骤〔2,3〕,其精密度、回收率、分析速度等优于后者。 表1 猪肝和奶粉中维生素B1的测定 Table 1 Determination of results thiamine in pork liver and milk powder 试 样 Sample 测得含量,Found(μg/g) 本法(n=3) This method 柱前衍生HPLC法〔3〕(n=2) Precolumn derivation- HPLC method# 鲜猪肝 Fresh pork liver 2.06±0.05 2.20 2.26 奶粉 Milk powder 8.63±0.17 8.71 8.50  *以平均值±标准偏差表示(expressed by mean±S.D.),# 以平行测定的个别值表示(expressed by individual results)。 3.5 应用   应用所建立的方法测定了鲜猪肝和奶粉试样中的VB1,并与柱前衍生反相HPLC法对照,结果一致,见表1。 4 结  论   柱后在线光化学反应可以方便地将维生素B1衍生为荧光化合物。与化学衍生法相比较,本法不使用含有毒成份K3Fe(CN)6的不稳定试剂溶液,而且灵敏度高、精密度好、操作简便、自动化程度高。采用反相色谱法分离,流动相中有机溶剂的用量大大减少,既降低了分析成本,也减少了环境污染。所建立的方法可用于奶制品、肉类等食品中维生素B1的测定。 致 谢 感谢我系徐秀珠教授对本文的建议和帮助。 本文系浙江省分析测试基金资助课题 任一平(浙江省轻工研究所食品检测站,杭州 310009) 陈恒武(浙江大学化学系,杭州 310028) 陈青俊(浙江省轻工研究所食品检测站,杭州 310009) 包敛彬(浙江大学化学系,杭州 310028) (浙江省轻工研究所食品检测站,杭州 310009) 黄百芬(浙江省轻工研究所食品检测站,杭州 310009) 何巧红(浙江大学化学系,杭州 310028) References 1,Williams S(Editor). Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 14th ed., Association of Official Chemists, Inc., Virginia, 1984:836 2,Ang C Y W, Moseley F A. J. Agr. Food Chem., 1980, 28: 483~486 3,Chinese Standard(中华人民共和国国家标准). GB/T5413.11-1997, Milk Powder and Formula Foods for Infant and Young Children, Determination of Vitamin B1 Contents, Method 2-HPLC Method(婴幼儿配方食品和乳维生素B1的测定,方法2-高效液相色谱法). 1997 4,Bognar A.F. J. Anal. Chem.,1992, 343:155~156 5,Hideaki O, Toshiro B, Yoshihiko S.J. Chromatogr., 1984, 284: 573~575 6,Guo X J(郭祥群),Xu J G(许金钩),Chen G Z(陈国珍).Chinese J. Anal. Chem.(分析化学),1991,19:244~252 7,Guo X J, Xu J G, Wu Y Z, Zhao Y B, Huang X Z, Chen G Z.Anal. Chim. Acta, 1993, 276:151~160 8,Chen H W, Zhu J P, Cao X X, Fang Q J.Analyst, 1998, 123:1017~1021 9,Zhu J P(朱京平),Chen H W (陈恒武),Fang Q J (方琼君).Chinese J. Anal. Chem. (分析化学),1997,25:573~575
日期:2007年5月18日 - 来自[色谱论文]栏目

柱后光化学衍生荧光检测高效液相色谱法测定食品中的维生素B1

摘 要 研究柱后光化学衍生荧光检测高效液相色谱分离测定食品中维生素B1的方法。采用C18柱,以含有2%乙腈的pH 4.0磷酸盐缓冲液(0.1 mol/L)作流动相反相分离,猪肝等食品中的维生素B1可与其它杂质达到完全分离。色谱流出液在柱后与0.75% Na2SO3-4% NaOH的混合试剂溶液在线汇合后流经一聚四氟乙烯(PTFE)细管制成的光化学反应器时,维生素B1转化为强荧光产物,由荧光检测器测定。在最佳条件下,进样20 μL检测限为3.8 μg/L,工作曲线的线性范围为0.033~10 mg/L,相对标准偏差(RSD)为 1.8%,标准加入回收率为97%~102%。所建立的方法用于鲜猪肝和奶粉中维生素B1的测定,取得了满意的结果。 Abstract A high performance liquid chromatographic method with post-column photochemical derivation and fluorescence detection was developed for the analysis of thiamine in foods. A C18 column was used for separation, and elution was performed with a pH 4.0 phosphate buffer (0.1 mol/L) containing 2% acetonitrile. When the eluate was on-line converged with a mixed 0.75% Na2SO3-4% NaOH solution, thiamine in the eluate was transferred to an intensive fluorescence compound by post-column photochemical derivation that occurred in a knotted polytetrafluoroethylene reactor, and detected by a spectrofluorimetor. Under optimized conditions, a detection limit of 3.8 μg/L thiamine was achieved with the injection volume of 20 μL, and a linear calibration curve was obtained in the range of 0.033~10 mg/L thiamine. RSD was in the level of 1.8%, and the recoveries of spiked analyte were in the range of 97%~102%. The developed method was applied to determine the thiamine contents in pork liver and milk powder, and satisfactory results were obtained. 1 引  言   测定食品中维生素B1(VB1)的经典方法是经离子交换柱分离共存的干扰物质后,在强碱性条件下,用K3Fe(CN)6将其氧化为硫色素,再经异丁醇萃取、荧光光谱法测定〔1〕。该法操作繁琐、费时, 且须使用有毒、有害试剂。近来,采用荧光检测的高效液相色谱(HPLC)测定食品中VB1的方法由于操作简便快速、灵敏度高、干扰小而越来越受到人们的重视。但不论采用柱前〔2,3〕还是柱后〔4,5〕化学衍生,均离不开有毒试剂K3Fe(CN)6。   光化学荧光法〔6〕是以光子作为衍生试剂的新颖的荧光分析法。Guo等〔7〕首先报道了VB1的光化学荧光现象,建立了不用任何氧化剂的原位光化学荧光光谱法。我们〔8〕进一步研究了VB1的在线光化学荧光反应,并应用于流动注射在线光化学荧光光谱法测定多种药物制剂及血清中的VB1。   本文在文献〔8〕的基础上,研究建立HPLC分离-柱后光化学衍生-荧光检测法测定食品中微量VB1的方法。 2 实验部分 2.1 仪器   液相色谱分离系统由Beckman-114高压泵、Alltima-C18色谱柱(粒径5 μm, 4.6 mm×25 cm)和Beckman 四通进样阀组成;岛津RF-540荧光光谱仪配置9 μL石英流通池作为荧光检测器;柱后光化学反应器按文献〔9〕的方法自制,所用的光源为6 W低压紫外汞灯(最大辐射波长253.7 nm),编结反应器由内径0.5 mm 长75cm的PTFE管编成。Rabbit蠕动泵(法国Rainin公司)。 2.2 试剂   维生素B1标准储备液(1.00×103 mg/L的0.01 mol/L HCl溶液), 配置于棕色瓶中,冰箱保存。NaOH-Na2SO3混合试剂溶液,1.5 g Na2SO3溶于200 mL 4 % NaOH溶液,当天配制。色谱流动相, 20 mL乙腈+980 mL pH 4.0的0.1 mol/L磷酸盐缓冲液。 2.3 试样制备   奶粉:准确称取10 g奶粉于250 mL锥形瓶中,加入70 mL 0.1 mol/L的HCl溶液,摇匀后,置于高压锅(1MPa)中水解30 min。冷却后,取出,滴加6 mol/L NaOH至pH 5~6, 转入100 mL容量瓶后,用水定容。过滤,弃去初滤液,收集续滤液备用。   猪肝:新鲜猪肝洗净后,捣碎。准确称取13 g捣碎的猪肝于250 mL锥形瓶中。以下与奶粉的处理方法相同。 2.4 操作步骤   置荧光光谱仪的激发和荧光波长分别于370 nm和440 nm,激发和荧光狭缝为5 nm。打开光化学反应器的紫外灯,启动高压泵和蠕动泵分别泵入流动相和NaOH-Na2SO3混合溶液。待基线平直后,用微量注射器取经0.3 μm 滤膜过滤后的20 μL制备液进样。记录色谱峰。每个试样平行测两次,以平均峰面积外标法定量。 3 结果和讨论 3.1 方法设计   柱后衍生HPLC分离测定食品中VB1时,多采用反相离子对色谱的分离模式〔5〕。以这种方式分离,流动相中甲醇等溶剂的含量较高,会对柱后光化学衍生产生负面影响〔8〕;而且反相离子对色谱需使用价格昂贵的对离子试剂己烷磺酸钠。考虑到VB1虽为离子化合物,但分子中仍有较大的疏水性母体,因此,本文试用 C18柱以一般的反相模式进行分离。 图1 实验装置示意图 Fig.1 Schematic diagram of the experimental set-up C.C18分离柱(separation column), 4.6 mm×25 cm; D.荧光检测器(fluorescence detector), λex, 370 nm, λem, 440 nm; E.流动相(mobile phase, 0.1 mol/L pH 4.0 phosphate buffer containing 2% acetonitrile,), 1.0 mL/min; K.编结反应器(knotted reactor made of 0.5 mm×75 cm PTFE tubing); L.6W低压汞灯(6 w low pressure mercury lamp);P1.高压泵(high pressure pump); P2.蠕动泵(peristaltic pump); R.混合试剂溶液(0.75% Na2SO3-4 %NaOH mixed solution), 0.5 mL/min; S. 试样溶液(sample solution), 进样体积(injection volume),20 μL; V. 进样阀(injection valve); W.废液(waste)。   VB1的光化学反应需在强碱性条件下进行,而还原剂亚硫酸钠对该反应有明显的增敏作用〔7,8〕。因此,本文使含有亚硫酸钠的氢氧化钠溶液与色谱流出液在柱后汇合后,再流经光化学反应器。为减少柱后谱带的扩张和过份的稀释作用,流动相和Na2SO3-NaOH混合试剂溶液的流量比设计为1∶0.5 ,且将光化学反应器制成编结状〔9〕。按此思路所设计的实验装置见图1。 3.2 流动相的优化   以鲜猪肝提取液为试样,对流动相的组成进行了优化。发现用磷酸盐缓冲体系峰形较醋酸盐好;以磷酸盐缓冲液-乙腈作为溶剂体系所得的VB1峰高较用同浓度的磷酸盐-甲醇体系高4~6倍。  图2 鲜猪肝制备液的色谱图  Fig.2 A typical chroma- togram for the sample of pork liver  保留时间5.23 min的峰为维生素B1(the peak with retention time of 5.23 is for thiamine)。   这是因为甲醇对VB1的光化学反应有抑制作用〔8〕。在磷酸盐缓冲液中乙腈浓度大于10%时,VB1很快流出而不能与杂质分离;当乙腈浓度在2%左右,磷酸盐缓冲液的pH值在4.0时,VB1可与猪肝中的杂质完全分离;pH 4.0磷酸盐缓冲液的浓度在0.05~0.2 mol/L之间变化,以浓度为0.1 mol/L时,柱效、分离度和灵敏度均可兼顾,而且峰形良好,见图2。 3.3 柱后光化学衍生条件的优化 3.3.1 化学条件 分别试验了NaOH和Na2SO3的浓度对柱后光化学反应的影响, 结果如图3a和图3b所示。可见, NaOH浓度在4% 、Na2SO3浓度在0.5%~1.0%间,荧光检测的灵敏度最高。故选择0.75% Na2SO3-4% NaOH的混合溶液作为柱后衍生的试剂。 图3 混合试剂中NaOH和Na2SO3的浓度对柱后光化学衍生荧光强度的影响 Fig.3 The influences of NaOH and Na2SO3 concentrations in the mixed reagent solution on the fluorescence intensity of post-column photochemical derivation a. NaOH浓度的影响,Na2SO3浓度为0.75%(0.75% Na2SO3 with variable NaOH concentrations); b.Na2SO3浓度的影响,NaOH浓度为4%(4% NaOH with variable Na2SO3 concentrations)。 3.3.2 物理条件 在固定流速的条件下,VB1在柱后光化学反应中接受光照的时间受光化学反应器的管长所控制。研究了编结反应器管长对VB1峰高的影响,发现管长在50~100 cm间测定VB1的灵敏度最高。本实验选用长75 cm的PTFE管(内径0.5 mm)编制成编结反应器〔9〕后,自由地盘绕在6 W紫外灯管上作为光化学反应器。与柱后化学衍生法相比较〔4,5〕,光化学衍生反应由于速度快〔7,8〕,所需的反应器管长较短,可减小柱后的谱带扩张,有利于分离效率和灵敏度的提高。 3.4 线性范围、检测限、精密度和回收率   在图1所示的最佳条件下, VB1的线性范围为0.033~10 mg/L,线性回归方程为A=1.78+26.9C(A为峰面积,C为VB1浓度, mg/L),相关系数r=0.9994;检测限(S/N=3)为3.8 μg/L;1.2 mg/L 的VB1 试液11次测定的RSD为1.8% 。每10 g奶粉中加入0.1 mg VB1后测得的回收率为102%±7%(n=3),每13 g鲜猪肝中加入0.05 mg VB1后测得的回收率为96%±7%(n=3)。分析速度约为8次/h。本法的检测限与柱前化学衍生法〔2〕相似,但由于无须HPLC测定前的氧化、萃取等手工操作步骤〔2,3〕,其精密度、回收率、分析速度等优于后者。 表1 猪肝和奶粉中维生素B1的测定 Table 1 Determination of results thiamine in pork liver and milk powder 试 样 Sample 测得含量,Found(μg/g) 本法(n=3) This method 柱前衍生HPLC法〔3〕(n=2) Precolumn derivation- HPLC method# 鲜猪肝 Fresh pork liver 2.06±0.05 2.20 2.26 奶粉 Milk powder 8.63±0.17 8.71 8.50  *以平均值±标准偏差表示(expressed by mean±S.D.),# 以平行测定的个别值表示(expressed by individual results)。 3.5 应用   应用所建立的方法测定了鲜猪肝和奶粉试样中的VB1,并与柱前衍生反相HPLC法对照,结果一致,见表1。 4 结  论   柱后在线光化学反应可以方便地将维生素B1衍生为荧光化合物。与化学衍生法相比较,本法不使用含有毒成份K3Fe(CN)6的不稳定试剂溶液,而且灵敏度高、精密度好、操作简便、自动化程度高。采用反相色谱法分离,流动相中有机溶剂的用量大大减少,既降低了分析成本,也减少了环境污染。所建立的方法可用于奶制品、肉类等食品中维生素B1的测定。 致 谢 感谢我系徐秀珠教授对本文的建议和帮助。 本文系浙江省分析测试基金资助课题 任一平(浙江省轻工研究所食品检测站,杭州 310009) 陈恒武(浙江大学化学系,杭州 310028) 陈青俊(浙江省轻工研究所食品检测站,杭州 310009) 包敛彬(浙江大学化学系,杭州 310028) (浙江省轻工研究所食品检测站,杭州 310009) 黄百芬(浙江省轻工研究所食品检测站,杭州 310009) 何巧红(浙江大学化学系,杭州 310028) References 1,Williams S(Editor). Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 14th ed., Association of Official Chemists, Inc., Virginia, 1984:836 2,Ang C Y W, Moseley F A. J. Agr. Food Chem., 1980, 28: 483~486 3,Chinese Standard(中华人民共和国国家标准). GB/T5413.11-1997, Milk Powder and Formula Foods for Infant and Young Children, Determination of Vitamin B1 Contents, Method 2-HPLC Method(婴幼儿配方食品和乳维生素B1的测定,方法2-高效液相色谱法). 1997 4,Bognar A.F. J. Anal. Chem.,1992, 343:155~156 5,Hideaki O, Toshiro B, Yoshihiko S.J. Chromatogr., 1984, 284: 573~575 6,Guo X J(郭祥群),Xu J G(许金钩),Chen G Z(陈国珍).Chinese J. Anal. Chem.(分析化学),1991,19:244~252 7,Guo X J, Xu J G, Wu Y Z, Zhao Y B, Huang X Z, Chen G Z.Anal. Chim. Acta, 1993, 276:151~160 8,Chen H W, Zhu J P, Cao X X, Fang Q J.Analyst, 1998, 123:1017~1021 9,Zhu J P(朱京平),Chen H W (陈恒武),Fang Q J (方琼君).Chinese J. Anal. Chem. (分析化学),1997,25:573~575
日期:2007年5月18日 - 来自[色谱分析实例]栏目
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外用光化学疗法治疗儿童白癜风疗效及安全性评价

2005年03月29日 中国皮肤性病学杂志.2004.018(009).-546-547 (南昌)为了评价外用光化学疗法治疗儿童白癜风的临床疗效和安全性,研究者以局部外用8-甲氧补骨脂素配合局部照射UVA为治疗组,以单纯外用8-甲氧补骨脂素为对照组,分别于治疗3个月、6个月时进行疗效及不良反应的评价。结果有尽有治疗组临床疗效明显优于对照组;治疗期间,两组患者均无严重不良反应发生。可见外用光化学疗法治疗儿童白癜风疗效确切,安全性好。
日期:2005年3月30日 - 来自[皮肤病与性病]栏目

“维生素D2光化学生产新工艺”通过鉴定


  中国科学院理化技术所承担的“维生素D2光化学生产新工艺”,日前通过中科院组织的成果鉴定。鉴定委员会在听取了成果研制报告并对维生素D2光化学中试基地进行实地考察后,认为维生素D2光化学生产新工艺具有创新性。   
  该工艺采用上行鼓泡式光化学反应器、特定的滤光物质和特定的反应溶剂,合成的维生素D2粗产物可直接进入结晶程序,并采用了更加环保的纯化溶剂,使光照反应、产物分离、溶剂回收等生产工序组成一个管道化连续生产体系,简化了工艺路线。利用该工艺从麦角固醇合成结晶维生素D2的总产率达到33%~38%,质量符合《中国药典》规定的标准。  
  据悉,理化技术研究所目前正就此新成果同多家制药企业洽谈技术转让事宜。
  
 
(新华社提供,未经许可,严禁转载)
日期:2004年11月12日 - 来自[新药]栏目
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