【摘要】 目的建立黄药子配伍当归快速测定（HPLC/PDA/MS）色谱指纹图谱。方法应用Kromasil C18 柱，0.1 %乙酸水与纯色谱甲醇进行梯度洗脱，流速为0.8ml/min ，检测波长200～400 nm ，柱温为30℃。结果得到分离度、重现性均较好的黄药子配伍当归HPLC/PDA指纹图谱，标示了10个共有峰。应用HPLC/MS 技术对其6个主要色谱峰进行了初步归属。结论黄药子配伍当归指纹图谱的建立，为其吸收/代谢前后的活性/毒性变化情况提供了依据。
【关键词】 黄药子配伍当归； 指纹图谱； 快速测定
Abstract：ObjectiveTo establish the chromatographic fingerprints of Dioscorea bulbifera L.and Angelica sinensis Diels by HPLC/PDA. MethodsSeparation was carried out on a Kromasil C18 column. Gradient elute was performed by the mobile phase consisting of 0.1 % acetic acid and colour spectrum methanol with the flow rate of 0.8ml/min. The column temperature was set at 30℃ and detecting wavelength at 200～400 nm.ResultsPerfect fingerprints were obtained which can be used for the Dioscorea bulbifera L. and Angelica sinensis Diels, ten common peaks were confirmed in fingerprints.Six compounds were elucidated by HPLC/MS. ConclusionThe method can be applied for internal absorption and internal metabolism of Dioscorea bulbifera L. and Angelica sinensis Diels.
Key words：Dioscorea bulbifera L.and Angelica sinensis Diels; Fingerprints; HPLC/PDA/MS
黄药子为薯蓣科植物黄独Dioscorea bulbifera L.的块茎，是可引起药源性肝损害的常用中草药之一，近年来有关黄药子的临床毒性屡见报道，本实验室在黄药子配伍当归可起到减毒作用实验研究的基础上［1］，进一步研究其指纹图谱，为其活性/毒性成分在吸收/代谢前后的变化的探索打下基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器Waters 2695 LC/PDA/MS系统含在线真空脱气机、高压二元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、二级管阵列检测器(PDA)、电喷雾离子化(ESI)接口，MICROMASS Quattro色谱工作站。
1.2 试剂甲醇：色谱纯，德国Merck 公司；乙酸：分析纯；纯净水。
1.3 药品黄药子购于黑龙江省药材公司，产地河北，经黑龙江省药检所鉴定，为薯蓣科植物黄独Dioscorea bulbifera L.的块茎。当归购于黑龙江省药材公司，产地安徽，经黑龙江省药检所鉴定为伞形科(Umbelliferae)当归Angelica sinensis Diels的根。
2 方法
2.1 供试品溶液的制备黄药子配伍当归（1∶2）饮片头煎10倍量水，浸泡2 h后，煎煮1 h，二煎8倍量水，煎煮1 h，合并煎液，浓缩，超速离心机8 000 r·min-1离心3 h，继续浓缩至每毫升含生药材0.5 g，冷冻干燥制成颗粒。给药时用蒸馏水溶解稀释至所需浓度，0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。
2.2 参照物溶液的制备取阿魏酸对照品适量，用70%甲醇溶解,制成浓度为100 μg/ml 的溶液, 取黄独乙素对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度为312 μg /ml 的溶液，取（+）表儿茶素对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度为100 μg/ml 的溶液, 取金丝桃苷对照品适量，用甲醇溶解，制成浓度为200 μg/ ml的溶液。
2.3 色谱条件及测定方法色谱柱：Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm ，5 μm)；流动相0.1 %乙酸水(A) 与甲醇溶液(B)；梯度洗脱：0～50 min(0～17% A)，50～90 min(17% A～40 % A) ,90～115 min(40%～80% A) ；115～135 min(80%～100% A)；135～145 min(100% A)；流速：0.8 ml/min ；检测波长：280 nm；PDA同时纪录200～400 nm紫外光谱，柱温：30℃；柱后分流0.2 ml/min 进质谱仪，同时记录总离子流(TIC) 图。离子极性:：ESI（+）ESI（-）；扫描范围:100～800；干燥气流速：10 L/min ；干燥气温度：350℃；雾化室压：40 pis ；毛细管电压：4000V；传输电压：70eV ；进样量10 μl 。
2.4 方法学考察
2.4.1 空白实验吸取50 %甲醇10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果表明空白溶剂无干扰。
2.4.2 参照物实验吸取参照物溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，其主峰的保留时间用于确定黄药子配伍当归中各对照品的峰位。
2.4.3 稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，1，2，4，12 ，24 h进样检测。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD 均小于3% ，表明样品至少在24 h 内稳定。
2.4.4 进样精密度实验取同一供试品溶液，连续进样6次。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD均小于3%，表明精密度良好。
2.4.5 重复性实验取同一批药材，按“2.1”项下方法分别制备供试品溶液6份,进样检测。各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积比值的RSD均小于3% ,表明方法的重复性好。
3 结果
黄药子配伍当归高效液相色谱可以分离出20个左右的峰，经比较所有测定的色谱图,从中选择了稳定性和重现性均较好的10个共有峰构成了指纹图谱的特征峰群(见图1)。为进一步研究指纹图谱中各谱峰归属，利用HPLC/MS 技术，对黄药子配伍当归供试品进行了质谱正负离子检测（见图2）。
4 讨论
4.1 HPLC/PDA/MS分析HPLC/PDA对照品实验表明，5号峰是（+）儿茶素，与对照品保留时间和光谱图最大吸收波长一致，根据TIC图提取质谱图（图3）中表现为m/z 289［M-H］- ； 6号峰是阿魏酸，与对照品保留时间和光谱图最大吸收波长一致，根据TIC图提取质谱图（图3）表现为m/z 193［M-H］-，m/z 178［M-CH3］-，m/z 165 ［M-CO］-，m/z 149［M-CHO］-等峰；8号峰是金丝桃苷，与对照品保留时间和时间光谱图最大吸收波长一致，根据TIC图提取质谱图（图3）表现为m/z 463［M-H］-；10号峰是黄独乙素，与对照品保留和时间光谱图最大吸收波长一致，根据TIC图提取质谱图（图3）中10号峰表现 m/z 344［M-H］-；根据TIC 图，提取质谱图(图3)及相关文献［2～4］,对其它主要色谱峰进行初步归属，1号峰推测为腺嘌呤.表现为m/z 134 ［M-H］-，m/z 115［M-H］-，m/z 108，m/z 66 等峰；2号峰推测为尿嘧啶，表现为m/z 112［M-H］-；3号峰推测为腺苷，表现为m/z 268［M+H］+，m/z 237，m/z 178，m/z 164，m/z 136［M–吡喃糖］；4号峰推测为L-色氨酸，表现为m/z 205 ［M+H］+ ，m/z 188［M-OH］+ 峰,并伴有m/z 161［M+28］+峰；7号峰推测为3，5-二甲氧基山萘酚，表现为m/z 317［M+H］+；9号峰推测为山核桃素，表现为m/z 329 ［M-H］-，m/z 314 ［M-CH3］-，m/z 125 。
图3 黄药子配伍当归10个峰质谱图
4.2 小结本文首次采用HPLC/PDA/MS对黄药子配伍当归的指纹图谱进行了研究，得到分离度、重现性均较好的药材指纹图谱,并利用HPLC/MS技术对10个主要色谱峰进行了初步归属，为今后与黄药子的指纹图谱进行拟合比较，确定活性成分、毒性成分变化规律，确定减毒作用物质基础打下扎实基础，也为研究其吸收/代谢前后的活性/毒性变化情况提供了依据。
【参考文献】
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1、实验材料
1.1药物与试剂 黄药子(购于黑龙江省药材公司，产地河北)经黑龙江省药检所鉴定为薯蓣科植物黄独(Dioscorea bulbifera L.)的块茎；丙氨酸氨基转移酶试剂盒(ALT，批号070161)；天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒(AST，批号070081，上海荣盛生物技术有限公司)；丙二醛(MDA)测定试剂盒(批号080301)；过氧化氢酶(CAT，批号080301)；超氧化物歧化酶(SOD，批号080501，由南京建成生物工程研究所提供)；其它试剂均为分析纯。
1.2动物雄性SD大鼠，体重(200±20)g，由黑龙江中医药大学药物安全评价中心(GLP)提供，动物质量合格证书号：医动字第01-10—2号。
1.3实验仪器 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；扭力天平(上海第二天平仪器厂)；756紫可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)。
2、实验方法和结果
2.1黄药子给药部位的制备
取黄药子饮片5kg，用适量75％乙醇回流提取，回收至无醇味，得浓浸膏1324g。取其中600g，用蒸馏水(w)溶解，依次用氯仿(C)、乙酸乙酯(E)、正丁醇(B)进行萃取。得到萃取物分别为c：10g，E：72g，B：55g， w：463g。干燥后分别取-定质量的萃取物(拟用临床剂量100倍)与O.5％羧甲基纤维素钠(CMC)配成混悬液，对照组为0.5％CMC的蒸馏水。鼠日给药量 g·kg～=人日服量30g／70×分离部位萃取率×100。
2.2不同分离部位给药组对肝脏生化指标的影响
取6 SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，给予各分离部位的CMC混悬液，每日培2次，连续给药7d。对照组ig等体积0.5％CMC的蒸馏水。观察大鼠外观、活动性、饮食量、大小便及体重等情况，肝门静脉取血，9000g离心取血清检测ALT、AST、MDA、CAT和SOD。
2.2.1 对大鼠外观行为的影响
在给药过程中，与对照组比较，C层给药组大鼠明显皮毛枯槁、少动喜卧、摄食量减少、尿液排泄增多；E层给药组大鼠摄食量略有降低、尿液排泄增多。持续至第7d，氯仿层大鼠普遍出现脱毛、闭目蜷卧、尿色深黄、对外界刺激反应迟缓等现象；B层组给药组大鼠皮毛枯槁、少动喜卧；B层组、w层组未发现明显改变。
2.2.2对大鼠血清MDA、CAT、SOD、ALT、AST的影响结果见表l、2。
表l 不同给药组对大鼠血清CAT、SOD、MDA的影响(x±s)
组别 n CAT SOD／(u·L-1) MDA／(U·L-1_)
对照组 10 6.44±2.25 253.05±34.84 2.26±O.99
C 10 0.92±0.6l** 121.12±22.54** 17.04±3.92**
E lO 2.12±O.75* 147.77±34.72* 10.05±2.72*
B 10 4.91±O.89 158.28±16.39 3.9l±2.33
W lO 4.32±1.05 234.42±34.31 2.91±1.12
注：与对照组相比，c组血清抗氧化酶活力普遍降低,MDA含量升高，差异极显著(** P<0.01)，E层组差异显著，*P<0.05；B层、w层未发现明显改变。
表2 黄药子不同给药组对大鼠ALT、AST卡门氏单位)的影响(x±s)
(
组别 n ALT／GPT AST／GOT
对照组 lO 36.19±3.16 170.29±30.16
C 10 131.14±7.44** 243.39±25.24**
E 10 99.14±5.21* 210.34±21.26*
B 10 43.52±8.87 169.47±41.24
W lO 42.91±2.97 173.67±10.79
注：与对照组相比，c、E组大鼠血清ALT、AST均明显高于对照组，且差异显著(*P<0.05，**P<O.01)；B组、w组无统计学意义。
3、 结论
黄药子在临床应用中的确切疗效，使得人们对其应用前景充满信心，但由于毒性成分及致毒机制尚不明确，限制了黄药子在临床的广泛使用。所以，确定黄药子毒性成分及开展中药配伍减毒增效机制研究，是开发低毒高效的临床药物必由之路。
转氨酶是催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的-类酶。普遍存在心肌、脑、肝、肾等组织中。其中，谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)最为重要。GOT以心脏中活力最大，其次为肝脏；GPT则以肝脏中活力最大，当肝脏细胞损伤时，GPT释放到血液内，于是血液内酶活力明显增加。在临床上主要测定血液丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。ALT与AST是判断肝损害进展的较好指标。结果表明，C组、E组均引起大鼠肝脏损伤，主要表现肝细胞破坏，血清ALT与AST含量均显著升高，而B组及W组的改变均不明显。在各给药组中，C组损伤最重。
自由基是生物代谢过程中连续不断产生的损害自身的毒性产物，广泛参与机体的生理与病理过程。可引起蛋白质和氨基酸的结构改变而使其丧失活性；使脂类过氧化，进而引起生物膜的广泛损伤，从而影响机体正常代谢和诱发多种疾病。机体通过控制自由基的酶清除自由基，在-定程度上控制自由基的酶活力即可反映出机体自由基含量及其损伤程度。除转氨酶外。c、E组CAT、SOD含量降低，脂质过氧化反应代谢产物MDA含量升高，可能是氧自由基及其引发的脂质过氧化反应造成细胞生物膜的氧化损伤进而造成肝损伤。氧自由基清除剂SOD与脂质过氧化反应代谢产物MDA是目前公认的能较好反映体内氧自由基水平及脂质过氧化程度的间接指标。
毒性成分-氧化应激增高-肝细胞破坏-肝代谢能力下降-毒性成分增高，可以看出在由外源性毒物所促发的这-循环中，氧化应激是肝损害病理生理机制中的核心环节。
本课题组已通过前期研究确认，氯仿层是黄药子毒性成分的主要富集部位，且致毒机理与自由基氧化损伤有关。本文从血清酶学角度进-步论述了黄药子致毒机理，佐证前期研究结果。
黄药子氯仿及乙酸乙酯萃取物多为呋喃去甲基二萜类弱极性化合物，其脂溶性强，易透过细胞膜进入细胞内而引线粒体呼吸链产生过多自由基而引起细胞损害，产生毒性。
何首乌为常用中药，药典收载，红药子、黄药子及薯莨为少常用中药。
笔者发现在药材购销和中药店堂调剂中，误将来源不同的四种中药混淆使用。为此，笔者根据多年的工作实践经验，提出如下区别。
1 何首乌
别名首乌、赤乌、红内消等。系廖科植物的干燥块根。春秋两季采挖，洗净，多切成厚片晾干。商品多横切成1～4cm块片，切面浅黄棕色或浅红棕色，显粉性，皮部有4～11个类圆形异型维管束环列，形成云锦状花纹，中央木部较大，有的呈木心。气微，味微苦而甘涩。药材以片大、质坚实、有粉性、片面显云锦状花纹者为佳。炮制品系切片或切成小块，用黑豆汁浸透蒸至棕褐色时，取出干燥。制何首乌，其形状如何首乌片或小块，厚约1cm。表面黑褐色或棕褐色，微粗糙，凹凸不平，质地坚硬，断面角质样，棕褐色或黑色。气微，味微甘而苦涩。其性味苦、甘、涩，温。入肝、肾、心经。何首乌具有解毒、消痈、润肠通便功能，用于治疗瘰疬疮痈，风疹瘙痒，肠燥便秘；高血脂症。制何首乌具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨的功能，用于治疗血虚萎黄，眩晕耳鸣，须发早白，腰膝酸软，肢体麻木，崩漏带下，久疟体虚；高血脂症。
2 红药子
别名红药、赤药、血三七、朱砂七、朱砂莲等。系廖科植物毛脉廖的块根。夏末至冬初均可采挖，去掉茎叶及泥土，横切成不规则的块片干燥，大小不一，直径3～9cm，厚约1cm。外皮棕褐色，有突起的支根痕；切面表面呈黄褐色，粗糙，纤维束多数，散列，纵横交错。质地坚硬，折断面显粉性。气微，味微苦涩。嚼之唾液染成黄色，粉末遇碱液立显紫红色。药材以身干、片大、外皮棕褐色、断面黄褐色，显粉性者佳。其性味味苦微涩，性凉。其生用具有抗菌消炎，顺气活血，凉血止血，镇静解痉，止痛，止泻，促进溃疡愈合；盐制者补肾；醋制者止血；碱制者健胃。
3 黄药子
别名黄独、黄药、红药子、土首乌等。系薯蓣科植物黄独的块茎。秋季采挖块茎，除去须根，洗净切片晒干。块茎的横切片呈类圆形或圆形，直径3～10cm，厚约0.3～1.5cm。外皮较薄，棕黑色，有皱纹，具多数短小的细根及黄白色或棕黄色微突起的须根痕。切面淡黄色至黄棕色，平滑或呈颗粒状凹凸不平。质硬而脆，易折断，断面颗粒状，黄白色。气微，味苦。药材以身干、片大整齐、外皮棕黑色、断面黄白色者为佳。其性味苦、平，有毒。入肝、肺经。具有清热解毒，凉血消瘿的功能，用于治疗咽喉肿痛、痈肿疮毒、蛇虫咬伤、甲状腺肿、吐血、咯血。因其有毒，对肝脏有一定伤害，故用药时注意。
4 薯莨
别名血三七、朱砂七、朱砂莲、红孩儿、红药子等。系薯莨科植物薯蓣的块茎。多于夏秋两季采挖，洗净，切片，晒干。块茎横切成片状，直径约7cm，厚约0.2～0.6cm。外表黑褐色，不规则皱缩，具微突起的点状须根痕。切面表面红棕色，质坚硬，有规则的网状花纹，折断面红棕色，粉性，在放大镜下观察有折光率强的白色结晶物。药材以身干、片大、表面显有规则的网状花纹，红棕色者为佳。其性味甘酸，平。具有止血、活血、理气、止痛的功能，用于治疗月经不调，产后腹痛、崩漏、内伤吐血、风湿关节痛、痢疾、疮疖、蛇咬伤、外伤出血。
5 小结
混淆用药的原因，在植物分类上来于同源或近缘，名称又相近；在形状和色泽上比较相似；同名异物，异物同名等之故而造成混淆用药。但从四药各自的性状特征、性味、归经、功能主治上看，仍有差别，所以建议在购销和中药店堂调剂中要严格区分，应以其真名入药，确保临床用药的安全有效。四药的区别要点：何首乌片面显云锦状花纹；红药子片面黄褐色，纤维束多数，散列，纵横交错，嚼之唾液染成黄色；黄药子片面淡黄色至黄棕色，平滑或呈颗粒状，凹凸不平；薯莨片面红棕色，有规则的网状花纹，放大镜下观之可见折光性强的白色结晶。
作者单位： 1 121000 辽宁锦州，锦州药业集团
2 121000 辽宁锦州，锦州益康新特药有限公司
3 121000 辽宁锦州，锦州辽西国药连锁有限公司
（编辑：宋 冰）
近年来不少学者在甲亢的治疗也多采用单味黄药子，或由黄药子为主组成的复方，疗效尚可。但黄药子为有毒之品，动物实验表明：黄药子对小鼠的肝肾组织都有一定损害，损害的程度与给药的剂量和时间密切相关。对肝组织损害在短期内即可表现出来，对肾组织的损害较长时间才能表现出来，其表现特征为食欲减退、厌油腻、恶心、呕吐和肝功能不正常，与临床病人所表现的症状是一致的。为了避免黄药子对肝肾损害，大多数人主张本药每日用量应控制在原生药12克以内为安全量。
【摘要】 黄药子药用历史悠久，可单方、复方应用于肿瘤的治疗。黄药子含有甾体皂甙、二萜内酯及1-（3-丙氨基）-2-甲基哌啶活性成分等。它在体内和体外均有一定的抗肿瘤作用，抗瘤活性随剂量增大而增大。然而其抗肿瘤机制尚不明确，抑制甲硫氨酸氨肽酶Ⅱ活性可能是黄药子抗肿瘤的一个机制。总之，黄药子的抗肿瘤作用有待进一步研究。
黄药子（Tuber Dioscoreae）又名黄独（Dioscorea bulbifera L）、香芋、红药子等，为薯蓣科薯蓣属植物黄独的块茎。主要分布于长江以南各地。黄药子之名始载于宋代《开宝本草》，其性寒苦，入肝、肺经。古代认为有清热解毒，凉血止血，消肿散瘿的功效。《千金月令》中已经记载用黄药子酒可以治疗甲状腺癌的治疗方法。中医临床用黄药子单、复方制剂进行抗肿瘤的治疗，疗效明显。现代药物研究表明本品含有多种抗癌化学成分，其抗肿瘤效果明显，同时对多种皮肤真菌有抑制作用。
1 黄药子抗癌的古今运用
黄药子药用历史悠久。宋代对黄药子的药性和功效已经有明确的认识。《开宝本草》记载:“黄药子苦，平，无毒。主治恶肿疮瘘，喉痹，蛇犬咬毒”。表明当时的医家已经认识到黄药子具有抗肿瘤的功效。《斗门方》以黄药子一斤，浸洗净，酒一斗浸之，每日早晚常服一盏的方法治疗瘿气。明代《本草纲目》中明确记载了黄药子功效为“凉血降火，消瘿解毒”。黄药子酒治疗瘿气的历史悠久。古代将瘿气分成5类，包括石瘿、肉瘿、筋瘿、血瘿和气瘿，从现代医学的角度来看不仅包括了甲状腺种，还包括了甲状腺癌等肿瘤疾病。现代中医学扩大了黄药子的抗肿瘤的范围。临床常以黄药子煎剂、酊剂、流浸膏治疗地方性甲状腺肿及与甲状腺有关的囊肿、中毒症、功能亢进和肿瘤等。黄药子酊剂对食道癌、胃癌、直肠癌等消化道癌症有明显的近期疗效。对乳腺癌、宫颈癌、肺癌也有一定的效效。刘静 ［1］ 根据其入肺经，治疗恶肿疮瘘的功用，单味应用治疗肺癌，收效明显:患者治疗以黄药子为主，辅以西药对症治疗，未使用其它中药，CT检查癌肿由3cm×3cm×3cm缩小为2.64cm×1.67cm×2.00cm，肿大的淋巴结消失。张文杰 ［2］ 将张仲景的《旋覆代赭汤》和张锡纯的《参赭培气汤》化裁为《灵仙代赭汤》用于治疗食道癌108例取得缓解率4.63%，有效率43.51%，稳定率90.74%，恶化率仅占9.26%的效果。陈氏用消恶性淋巴瘤方（白花蛇舌草30～90g，山慈菇、棱术、炒白术各15～30g，僵蚕、夏枯草各30g，昆布、煅牡蛎、煅瓦楞子各30～60g，炮山甲、黄药子各9～15g，全蝎6～12g，甘草6g）每日1剂，治疗11例，存活1年以内29例，存活1～2年4例，存活2～5年1例，存活5～10年2例，存活10年以上2例 ［3］ 。以上的临床报道提示黄药子具有一定的抗肿瘤作用。为了黄药子的进一步开发利用，有关学者用现代科研技术对黄药子的化学成分及它们的抗肿瘤效应进行了研究。
2 黄药子化学成分
黄药子化学成分比较复杂，传统的植物化学研究发现黄药子中含蔗糖、还原糖、淀粉、皂甙、鞣质、黄独素B、C（DiosbulbinsB.C.）、薯蓣皂甙元（Diosgenin），二萜内酯等多种成分。产地不同，薯蓣皂甙元的含量不同。Marker ［4］ 曾报导黄药子含甾体皂甙，水解后可生成3种皂甙元，以薯蓣皂甙元（Diosgenin）为主要成分，含量0.45%，并有少量雅姆皂甙（Yamogenin约0.02%）及克里托皂甙（Kryptogenin约0.03%）。这与其它研究的成分略有不同。墨西哥产地的黄独含有的薯蓣皂甙元，约莫皂甙元和克里托皂甙元3种甙元成分较高，而丽江、云南产地样品中的含量较低 ［5］ 。二萜内酯主要来自野生黄独。目前已分离出来8种去甲基呋喃二萜内酯，根据立体结构的不同分别命名为Diosbulbin A、B、C、D、E、F、G、H，又称为黄药子素甲、乙、丙、丁、戊、己、庚、辛 ［6］ 。还有其他成分，如Gao等 ［7］ 用乙酸乙酯提纯，并用HPLC分析得到山奈酚、3，5-二甲基醚、山核桃黄素、儿茶酚、杨梅素、槲皮素3-0-吡喃型半乳糖、杨梅素3-0-吡喃型半乳糖苷、杨梅素3-0-葡萄糖苷等黄酮类化合物和黄独素B等8种成分。
3 黄药子抗肿瘤效力及其机制的研究
黄药子在抗肿瘤方面临床运用广泛，特别是在中西医结合治疗消化道恶性肿瘤的治疗中目前对黄药子抗肿瘤的效力有体内和体外的研究。体外基础研究表明黄药子的确有明显的抑制肿瘤生长的作用。Gao等 ［7］ 发现黄药子75%的乙醇提取物能抑制佛波酯诱导的JB6小鼠表皮细胞癌变。他们提纯分离得到的多种成分在软琼脂克隆形成实验中有抑制肿瘤细胞形成作用，其中杨梅素的IC50最低，为10.06uM。
体内研究进一步证实黄药子有抗肿瘤作用，且存在一定的量效关系。Testuya Komori ［8］ 实验发现黄独素A、黄独素B及黄独素A 2 -O-葡萄糖甙对小鼠S180实体瘤有明显的抑制作用，黄独素A 2 -O-葡萄糖甙、黄独素B、黄独 素A的抑瘤率分别高达70.50%、57.89%及50.19%。而另外的实验 ［9］ 报道通过极性较大的乙醇渗漏，减压提取得到黄药子醇提物（HYZ），并检测了其50mg/kg和100mg/kg两个剂量组对小鼠H22（肝癌），S180（肉瘤），EAC（腹水癌）3种移植肿瘤的抑瘤作用，研究表明50mg/kg和100mg/kg对小鼠肝癌的抑制率分别为19.5%和36.3%，对小鼠肉瘤的抑制率为24.3%和31.6%，结果说明黄药子醇提物对S180（肉瘤）50mg/kg有一定的抑制作用，小鼠平均瘤重明显低于对照组。他们进一步观察小鼠存活天数，发现对照组平均存活17天，给药组平均存活31.6天，表明黄药子确有一定的抗癌作用。
黄药子抗肿瘤的机制尚不明确。目前已知其活性高低与成分极性大小有关。李建恒等 ［10］ 采用不同极性的有机溶剂进行化学提取，选择动物整体实验肿瘤模型和离体人的肿瘤细胞株为筛选对象对黄药子的种种提取物进行筛选，结果显示用极性较小的有机溶剂提取的黄药子成分的抗肿瘤的活性最高。抑制甲硫氨酸氨肽酶Ⅱ（MethionˉineaminopeptidaseⅡ，MetAP2）活性可能是黄药子抗肿瘤的一个机制。周家容等 ［11］ 在用黄药子乙醇浸提物柱层析分离的组分进行活性筛选时，发现黄药子成分1-（3-丙氨基）-2-甲基哌啶对MetAP2具有很强的活性。
4 结语
综上所述，目前已经明确黄药子中的主要有效成分有甾体皂甙、二萜内酯及1-（3-丙氨基）-2-甲基哌啶。这些为黄药子临床抗肿瘤应用提供了实验学基础。但是由于黄药子的长期使用会产生明确的毒副作用，可引起肝细胞脂肪变性，糖原增多，甚至灶性坏死，也可引起肾小管上皮细胞变性、坏死。可能原因是黄药子直接损伤了肝肾细胞，使萄萄糖-6-磷酸酶和琥珀酸脱氢酶活性受抑制所致 ［12］ 。然而其毒性成分还不明确，黄药子的毒性成分与有效成分之间的关系还有待进一步研究。为了明确黄药子有效成分的作用机制和毒副反应，我们可以应用细胞分子生物学等技术，针对新靶点进行抗癌药物。可以根据化合物与新靶点活性的构效关系找到先导化合物，并对活性化合物进行系列开发，可能会提高黄药子开发的成功率。
参考文献
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7 Gao HY，Masanori K.Antitumor-promoting constitiunts from Dioscorea bulbifera L.in JB6mouse epidermal cells.Biol.pharm.bull，2002，25（9）:1241-1243.
8 Testuya K.Glycosides from Dioscorea Bulbifera.Toxicon，1997，35（10）:1531-1536.
9 陈晓莉，吴少华，赵建斌.黄药子醇提物对小鼠移植瘤的抑瘤作用.第四军医大学学报，1998，19（3）:354-355.
10 李建恒，张杏红.中药黄独抗肿瘤成分及生物活性研究.中国药业，1999，8（3）:40-41。
11 周家容，张火昆，黄剑明，等.黄药子中抑制MetAP2组分的分离 鉴定.仲恺农业技术学院学报，2002，15（2）:15-19.
12 苏莉，朱建华，程利宝，等.亚急性黄药子中毒的实验病理学研究.法医学杂志，2003，19（2）:81-83.
作者单位:1 510180广东省药品检验所
2 510080广州中山大学药学院临床药理研究所
（收稿日期:2004-03-12） （编辑维 兰）
黄药子
黄药子
Rhizoma Dioscoreae Bulbiferae
(英)Air Pootalo Yam Rhizome
别名 黄独子、金钱吊蛋、黄金山药。
来源 为薯蓣科植物黄独Dioscorea bulbifera L.的块茎。
植物形态 缠绕草质藤本。块茎卵圆至长圆形。茎左旋。叶互生，宽心状卵形，长7～22cm，宽7～18cm先端锐尖，全缘或微波状，叶腋有大小不等的紫棕色球形或卵圆形珠芽（零余子）。花单性异株，穗状花序下垂；雄花单生密集，花被片6，雄蕊6；雌花有退化雄蕊6，子房下位，3室。蒴果长圆形，反曲，翅距圆形，成熟时草黄色，表面密生紫色小斑点。种子扁卵形，着生于果实每室顶端，一面有翅。花期7～10月，果期8～11月。
生于河谷边、山谷阴沟或杂木林边缘。主产湖北、湖南、江苏。
采制 秋季采挖块茎，除去须根，洗净，切片晒干。
性状 块茎的横切片呈类圆形或圆形，直径3～10cm，厚0.3～1.5cm。外皮较薄，棕黑色，有皱折，具多数短小的细根及黄白色或棕黄色微突起的须根痕。切面淡黄色至黄棕色，平滑或呈颗粒状凹凸不平。质脆，折断面颗粒状。气微，味苦。
化学成分 含有黄独萜酯A（diosbulbine A）、皂甙、鞣质和淀粉。
性味 性平，味苦。
功能主治 清热解毒，凉血清瘿。用于咽喉肿痛、痈肿疮毒、蛇虫咬伤、甲状腺肿、吐血、咯血。
（《普济方》）
【配方】万州黄药子（须紧重者为上，如轻虚即是他州者，其力即慢）三斤。
【制法】上须用焙，取无灰酒一斗投药中，泥封固瓶口，以糠火烧一顿饭时，停住，令酒冷。旁边糠火不可多堆，烧酒气香出，瓶头有津，即止火，不待经宿。
【主治】治忽生瘿病一二年者。
【用法】令患者时时饮一盏，不令绝酒气，经三日后，常把镜自照，觉销即停饮，不尔，便人颈细也。已验如神，忌食毒物。
说明：原书无方名，据药味和制法命名。
（《医部全录》）
【配方】黄药子一升，酒一斗。
【制法】将药洗净，剉，入酒浸之。
【主治】项下瘿气。
【用法】每日早晚常服一盏。忌一切毒物及戒怒，仍以线逐日度之，乃知其效也。
