主题：模型

中医药理论体系的核心内容，证候研究也是中医药现代化的关键环节。目前在对证候研究的三大方法(文献研究、临床研究与实验研究)中，证候动物模型的研制是一个不可或缺的部分，是开展中医证候实验研究的一个必要条件，也是阐明中药方剂疗效机制、创新中医理论的一个重要工具。
    对中医证候动物模型的研究始于20世纪60年代，经过40多年发展，从邝安垄等尝试采用。肾上腺皮质激素建立肾阳虚证小鼠模型，到如今已有百余种动物模型，由单一方法造模到目前的多因素、多方法，由虚证到目前涉及八纲、脏腑气血辨证，用于各类疾病证本质的研究。笔者拟就近年来在心系疾病巾的常用中医证候模型综述如下。
    心系病证动物证候模型研究概况
    心主血脉、主神明，故心系疾病包括了心、血脉及部分精神神志方面的病变，证候模型中涉及较多的有冠心病、高血压病、高血压性心脏病、高脂血症、动脉粥样硬化、心力衰竭等，其大致属于中医心悸怔忡、胸痹心痛、喘证、水肿、眩晕等证范畴。
  实验动物选择
  心血管疾病的实验动物主要有大鼠、兔、犬、猪等。其中以大鼠最为常用，因其食性与人相近，成本低廉，饲养方便，体形适中，生命力强，采样方便，且能较好地耐受手术，其血管阻力和血压对药物的反应均很敏感，与人或大动物相似；制作心小时可排除侧支循环的影响。兔与犬形体较大，兔的左室内动脉分布与人类似．且其胸腔构造较为特殊：纵隔膜使得心包膜及左右胸腔互不相通，做开胸和心脏实验时，只要不破坏纵隔膜，便不需人工呼吸，适合开胸心脏手术造模；其对高脂饮食非常敏感，常用于高脂血症模型，但其为草食性动物，脂代谢与人差异较大，不易形成动脉粥样硬化病变。犬形体适中，神经、血液循环系统发达，但心脏与冠脉分布变异多，侧支吻合丰富，室问隔动脉发达，与人相差较大。近年来小型猪因其食性、循环系统比其他常用实验动物与人更为接近，而日益受到重视，如我国研制的近交系贵州小型猪适用于胸痹心痛心血瘀阻证的模型制作。小鼠有繁育周期短，成本低廉的优势，因形体较小，取血不便，以往使用较少。但小鼠因纯系品种较多，适于做转基因动物进行研究，近年来一些基因敲除和转基因小鼠的应用正逐渐增多，如基因敲除ApoE一／一动脉粥样硬化小鼠。自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)也逐步开始应用于中医证候模型研究。
    造模方式
    中医心系证候模型从造模方式上主要有3类：西医疾病病理模型、中医病因模型及病证结合模型。
    1．西医疾病病理模型此类模型利用现代医学技术手段，在特定的机械、物理、化学或生物致病因素作用下，复制西医疾病模型后，不施加人为干预因素，观察疾病病理和中医证候的动态演变过程，确定不同病程阶段的中医证型。
    高脂血症、心脏病：刘卫红等以高脂饲料喂饲法复制大鼠高脂血症模型，分别于第2、4、8周取血行核磁共振波谱仪主成分分析。结果模型大鼠前期以脂代谢紊乱为特点，随时间推移，血液流变异常逐渐加重，血液瘀滞明显，说明高脂血症向动脉粥样硬化发展过程中，早期多属痰浊证，中后期为“由痰致瘀”、“痰瘀互结”之证。仇琪等也发现，以左冠脉结扎法制作的心肌缺血大鼠在术后7—60d内同时具备血瘀证和气虚证相关指征。倪量等以腹主动脉狭窄法复制心肌肥厚大鼠模型，发现该模型大鼠心脏早期呈典型向心性肥厚的病理改变，8周后为混合型左室肥厚；在中医证候方面具有心气虚证及血瘀证的特点，血瘀证贯穿于整个病变过程，而气虚证随病变发展而逐渐出现并加重。
    高血压病：屈会化等观察早期(14—18周)SHR大N4周后，发现其血压有随周龄增长而逐渐上升之势，心率偏快，易激惹程度增加，精神紧张，小便色偏黄，大便粒小质干，舌红等类似人类高血压肝火上炎证。卢文丽等研究结果与之类似，认为属肝阳上亢证，但与同龄wisfar大鼠相比体质量偏轻，考虑有阴虚证存在之可能；以活血化瘀方反证有效并结合临床，认为还伴有血瘀证。屈会化等㈣则认为两肾一夹肾性高血压SD大鼠在术后4—8周基本符合阴虚阳亢表现。莫飞智等以双肾双夹法加术后第43天双侧颈总动脉缺血再灌注，复制肾血管性高血压痴呆大鼠模型，发现大鼠先后表现为肝阳上亢(易怒烦躁、相互斗咬)、肝肾不足、气血两虚(眼睑浮肿，反应迟钝，行动缓慢，共济失调)、肾髓不足(智能下降，呆板漫游)等证候。
    2．中医病因模型是以传统的中医理论为指导，运用中医特有的六淫、七情、饮食、劳倦等一种或数种致病因素建立证候模型。根据中医“惊则气乱，劳则气耗”和心主神明的理论，多使用水环境站台睡眠剥夺、强迫负重游泳、强迫跑步、饮食控制法进行心虚证造模；根据过食肥甘厚味易生痰浊，痰阻经络，气滞血瘀，多以高脂饮食造痰浊证、痰瘀互结证模型；根据寒凝则血瘀，多以寒冷冰冻法进行血瘀证造模等。
    孙福立等使用水环境站台睡眠剥夺法，剥夺大鼠快速动眼相睡眠，观察心率与血压，复制心虚(气)证大鼠模型，发现随睡眠剥夺的时间不同，而呈现不同证型。睡眠剥夺早期类似心阴虚证；至96h类似心气虚或气阴两虚偏气虚证。于成瑶等复制上述模型大鼠睡眠剥夺l92h，证实该模型大鼠存在心气虚证等多种证的表现，并认为其情志变化主要是心主神明失司，但不排除其他诸脏腑与情志的关系。于成瑶还对自然衰老大鼠(1明龄)进行观察，发现亦存在心气虚证的类似表现。王佳等以冰水浸泡模拟外寒侵袭，皮下注射大剂量肾上腺素模拟暴怒时的应激状态，复制大鼠急性血瘀证模型，在此基础上冠脉结扎法造成急性心梗，结果与单纯心梗模型相比，“血瘀证”下急性心梗大鼠的血沉、体外血栓干、湿重及血栓弹力图变化上均更严重，说明“血瘀证”下急性心梗模型在影响血小板黏附聚集、红细胞变形沉降、全血黏度增高方面更明显。也说明在中医药效学研究中，仅采用西医疾病模型而不考虑中医证候是有缺陷的。
    3．病证结合模型是将西医的病与中医的证相结合，动物模型既具有西医病的特点，有较好的可靠性及稳定性；又有中医证候的特征，体现中医理论的指导作用，符合现代临床辨证的实际，目前已成为中医证候模型研究的热点。其主要形式为在西医病造模基础上，或施加中医病因造模，或以中药反证，或按中医理论辨证，或按现代中西医结合理论的进展检测某些实验室指标(如血瘀证)。
    张明雪等以高脂饮食、一4℃至一2℃冰柜冷藏6周、每天2h．第35天垂体后叶素多点皮下注射的方法建立冠心病一hi'HA证大鼠模型，结果大鼠出现阳虚表现，实验室检查示心肌缺血及心衰的组织形态学变化，提示病位在心。李欣志等以高脂饲料喂养lO周，加第3周介入法球囊损伤左冠状动脉前降支法制备小型猪冠心病模型，结果动物体质量指数、血脂水平等均明显升高；体表心电图示心肌缺血；冠脉造影、弹力纤维EVG染色示冠脉管腔狭窄、内膜增生，认为成功建立病证结合痰瘀互结证冠心病模型。朱丽红等用高脂饮食7周加冠状动脉结扎法(第35天)复制冠心病痰瘀互结证模型，并以祛痰化瘀方剂血府逐瘀汤合瓜蒌薤白白酒汤反证有效。类似的还有吴相春等以3％高蛋氨酸饮食6周，同时采用束缚盒束缚建立络气郁滞型内皮功能障碍大鼠模型等。
    高血压：张娴等用3月龄sHR大鼠灌服附子煎剂6周后，发现出现易激惹程度增高等肝阳上亢证的表现，通过双向电泳技术分析肝脏蛋白质组变化后发现其与单纯sHR大鼠的蛋白斑点总体分析相似，仅少数在质与量上有明显变化，推测两组差异蛋白可能与高血压肝阳上亢证候的形成相关。
    心力衰竭：贺泽龙等以腹主动脉狭窄法制作压力负荷型大鼠心衰模型，并用参麦液和参附液治疗进行药物反证，认为该模型大鼠在证候学上属于气阴两虚证。王振涛等发现心梗手术30d后模型大鼠出现心气虚表现，在此基础上，于术后第9周起给予左旋硝基精氨酸4周，结果大鼠还出现体温降低、夜尿增多等阳虚证表现，且两种模型均有血管阻塞及实验室检杏等血瘀证表现，从而建立了心肌梗死心气虚血瘀证和心阳虚血瘀证病证大鼠模型。类似的有吕萍等以灌服大剂量寒凉药7d，再结扎左冠状动脉前降支及逐渐缩窄升主动脉口径的方法，制作充血性心力衰竭少阴病(心肾)阳虚水停证兔模型，用加味真武汤反证有效、刘德芳等以高温潮湿环境模拟外湿，强迫游泳加灌服冰水耗气伤脾制造内湿，制作心梗后心衰湿阻中焦大鼠模型，用平胃散反证有效等。
    此外，陈利国等提出以高血压血瘀证患者血清作用于人脐静脉内皮细胞株以建立病证结合血瘀证血管内皮细胞损伤模型，其可行性尚待观察。
    问题及展望
    中医证候动物模型，尤其是病证结合模型近年来发展迅速，但目前研究也存在着一些问题。
    1．证候造模方法须进一步完善研究中存在着同一方法不同证候的情况，如同为高脂饮食，可造成高脂血症痰湿证、瘀血证、痰瘀互结等不同病证。许多疾病为慢性进展过程，有的模型造模方法时问很短，方法过于简单；而有的模型又涉及证候过多(3种以上)。目前来看加强规范化及复合多因素的造模方式比较合适。
    2．部分模型中医特色不强，未能与中医理论密切联系某些证候模型一味追求较新的现代医学指标，或是只有实验室指标，有的甚至连一般情况都没有，如何能体现中医的辨证论治特点；联系中医证候诊断标准的更少。当然这也与相关诊断标准还不完善有关，因此建立中医临床及动物证候判断标准体系十分必要。此外，还可参考中兽医在动物辨证方面的经验与知识。
    3．以方测证应选用代表性强的方剂中药  以方测证是中医证候动物模型研究的重要手段，但目前存在着应用不同方剂验证都有效的情况。因此须选用合适的代表性强的方剂。
    4．重视体质，加强对自发性中医证候模型的研制体质在疾病发病过程中是非常重要的因素，但目前中医证候模型在此方面重视不够。转基因动物与自发性疾病的中医证候模型这也是目前值得关注的方向。
    相信不久的将来，中医证候模型将在中医药现代化研究中发挥更大作用。

 

本报讯（记者张雯雯）近日，中科院昆明动物研究所的科研人员应用新型实验动物——树鼩进行了乳腺肿瘤和吗啡成瘾的研究实验。该研究成果发表在《动物学研究》上。

 

据介绍，外形酷似松鼠的树鼩与灵长类为姐妹关系。与常用的实验啮齿类动物小白鼠相比，其在模拟人类疾病模型方面具有亲缘优势，在某些方面可替代猕猴等高成本非人灵长类动物，成为有效的人类疾病动物模型。

 

在饲养和繁殖过程中，树鼩频繁自发乳腺肿瘤。昆明动物研究所动物模型与人类疾病机理重点实验室的科研人员通过对一例树鼩自发性乳腺肿瘤研究发现，通过染色从病理上判断该树鼩乳腺肿瘤为导管内乳头状瘤，其组织形态和病理与人导管内乳头状肿瘤非常接近，并进一步地分析了它的免疫组化结果，初步了解树鼩自发性乳腺癌的基本特征。

 

该研究不仅为树鼩乳腺肿瘤提供了基础资料，也为下一步建立树鼩乳腺肿瘤模型和肿瘤发病机制提供有价值的线索。

 

同时，昆明动物研究所认知障碍病理组的科研人员进行了中缅树鼩吗啡成瘾的相关实验，建立了树鼩慢性吗啡依赖模型。

 

实验发现，对吗啡依赖的大白鼠、小白鼠经纳洛酮催瘾后通常会出现戒断症状，与之相反，树鼩能够产生吗啡耐受和依赖。通过纳络酮催瘾，可观察到其戒断症状，并促使树鼩形成条件化位置厌恶反应。

 

该实验建立的模型可用于研究吗啡依赖的神经生物学机制和筛选减轻吗啡戒断症状的药物。

 

《中国科学报》 (2012-02-23 A1 要闻)

　　把一个人的遗传基因数据、身体指标、周围环境状况输入模型中，根据该模型以及配套软件的测算，就可以迅速预测这个人将来的健康状况，这并不是科幻电影里的情节，而是来自当前国际前沿的一项研究和实验。
　　开创这项研究的人就是北京林业大学计算生物学中心主任、美国宾夕法尼亚州立大学统计遗传学中心主任邬荣领，他发明的这个模型叫做功能定位模型。
　　20多年来，邬荣领一直在进行林木的遗传育种研究。相同的树木为何有时长得快，有时长得慢？它们什么时候长得最快？不同地方的同种树木，为何它们的个体不一样？邬荣领一直在思考这些问题。
　　“在1999年左右，我就希望能够建立一个有效的数学模型，用来分析和预测一些林木的生长趋势。”  邬荣领说随后他就开始深入琢磨这个数学模型的建立。2000年在应聘为美国佛罗里达大学统计系助理教授之后，他对自己的模型设计就有了一些眉目。2002年，他将关于这个模型的论文首次发表在国际权威杂志《遗传学》上。2006年，《自然综述：遗传》上又表了他关于功能定位的观点性论文。
　　功能定位所揭发出来的规律，在林木上具有相当大的经济价值。比如为了让林木主干长得更高，在提前预测到的快速生长期内，就可以给林木多加营养物质。这些年，利用邬荣领的模型，在杨树、松树等树种的实验上已经取得了较好的效果。
　　但是这些年随着研究的深入，邬荣领的功能定位模型已经超出了林木的范畴。其在农作物（包括水稻、玉米、大豆）、动物（包括老鼠、狗）以及人类生长发育基因调控领域得到较好的应用。
　　以上的这些生物体及我们人体的遗传数据以及相关指标，都可以运用这一模型以及软件进行分析，从而得出它们可能的发展方向、寿命以及变异情况。这对生物疾病预防、物种选育、珍稀生物繁育、人体健康预测等都有着重要意义。
　　更有趣的是，现在功能定位在生物医学上正产生重要影响。目前邬荣领带领他的团队已经运用这个模型在一些老鼠身上做了试验，在试验中，通过该模型可以准确预测出哪些老鼠可能携带肥胖基因，在什么时间它发胖最快。将来他们在收集更多的有关人的肥胖基因资料后，就可以更早地预测到人在什么时候会发胖，这样就可以及时治疗肥胖症。当然，他们现在也能用功能定位来预测肿瘤生长、致病过程的基因作用方式，还可以用来确定有效的药物、最佳剂量及最佳服用时间，这为今后医生给患者实施个体化医学提供了重要的分析手段。”  邬荣领说。
　　在未来，功能定位模型还将会为病人个性化用药提供数据，从而减少副作用。由于我们每个人的基因、DNA标记均不相同，在不同时间内病症的表现也就不同，邬荣领的模型是把人的遗传基因数据，比如从人的头发或者肌肤切片获得细胞、DNA等数据，身体的各项指标，比如血压、脉搏、心跳等，周围环境状况，比如温度、湿度、纬度等输入软件中测算，从而预测对象在什么年龄段可能生什么病，或者病情会加重。这将为我们的身体健康起到良好的预警作用。在患病时，医生也就知道一个病人用什么药物、用多大药量才能最有效。
　　另外，对人体的有些生长发育，如肿瘤块的生长，就可以实施反向抑制，在其快速生长期间，可以想办法加大抑制手段。邬荣领表示这些借助于生物体自身的基因来人为调控生长，是一种高效的手段。
　　“我们的功能定位模型可以揭示很多隐藏在基因里的秘密。”邬荣领说有了这些数据之后，就可以确定一个生物体的基因位置和调控方式，从而也就能够了解到它未来的一些发展趋势。
　　邬荣领:  1964年出生于江苏如皋，博士，北京林业大学计算生物学中心主任，长江学者，美国宾夕法尼亚州立大学统计遗传学中心主任。

近日，国际著名肿瘤学杂志Cancer  Research发表了同济大学生命科学院刘小乐研究组关于核受体研究的最新成果“A  Comprehensive  View  of  Nuclear  Receptor  Cancer  Cistromes”。该研究成果建立了一个新的模型预测转录因子直接调控的基因。
核受体是一类由配体激活的转录因子，在正常生理和如癌症的疾病中都扮演重要角色。通过整合和分析现有的核受体ChIP-chip/seq数据，该工作揭示了有关核受体调控机理的一些有意义现象：核受体识别的非典型模体，于其共同作用的先导因子特点，其结合位点的强度／保守性和功能性的关系，及其在转录调控中的作用。该工作通过整合同一细胞株和条件下同一转录因子的全部ChIP-chip/seq数据和与之匹配的全部差异表达数据，建立了一个新的模型预测转录因子直接调控的基因。该工作提出了不同类型高通量数据整合研究转录调控机制的新思路。
本研究工作是在刘小乐教授的指导下，主要由同济大学生命科学院博士研究生唐茜子完成。刘小乐教授是哈佛大学公共卫生学院生物统计系的副教授，同济大学生命科学与技术学院兼职教授，博士生导师。该研究工作得到了科技部的经费支持。

近日一篇发表在美国国家科学院院刊（Proceedings  of  the  National  Academy  of  Sciences）的文章称，研究者通过基因工程技术研制出了可产生特异性抗肿瘤人类T淋巴细胞的小鼠模型，该模型或可成为人类肿瘤研究的重要方法。
有研究证明经基因修饰的T细胞受体（TCR）可识别并攻击特定的肿瘤细胞，但其过程较为复杂且无法产生稳定并具有自我更新能力的T细胞。因此本文的研究者制造出了可在其体内产生特异性抗黑素瘤的人类T淋巴细胞的小鼠模型，该T细胞由经过基因修饰的人类造血干细胞发展而来。
此前有人制造了可产生HIV特异性T细胞模型，但由于该模型无法完全重建人类细胞而导致其结果无法在体内进行检测。研究者于是对该模型进行了改进，他们通过将一个有功能的人类胸腺和经黑素瘤特异性TCR转导的人类造血祖细胞结合在一起修复了该缺陷。
随后研究者以黑素瘤为检测对象进行检测，结果发现大多数小鼠体内的肿瘤都得到了清除，或者体积缩小。而且，这些转导的人类细胞在移植4个月后仍可以检测到，表明该干细胞的重建一旦启动便可长期存在。
该研究表明，将人类造血祖细胞使用基因工程的方法进行修饰，或许可以成为人类对抗慢性疾病如肿瘤的新武器。

　　编者按：2011年9月30日 ，国家药监局发布了《对化学性肝损伤有辅助保护功能的评价方法（修订稿）》，公开征求意见，截止日期为2011年10月29日。

关于征求《对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法（修订稿）》意见的涵

各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局（药品监督管理局），有关单位：

　　为贯彻落实《食品安全法》及其实施条例对保健食品实行严格监管的要求，严格保健食品准入管理，切实提高准入门槛，我司组织修订了对化学性肝损伤有辅助保护功能的评价方法。现公开征求意见，请将修改意见于2011年10月29日前反馈我司。

　　联 系 人：戎卫华
　　联系电话：010-88330866
　　传　　真：010-88374394
　　电子邮件：yuchao＠sda.gov.cn

　　附　　件：
　　对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法（修订稿）及修改说明

　　　　　　　　　　　　　　　　　　国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　二○一一年九月三十日

附件

 

对化学性肝损伤有辅助保护功能评价方法（修订稿）

保健食品评价试验项目、试验原则及结果判定

Items, Principles and Result Assessment

 

 

1试验项目

动物实验分为方案一（刀豆蛋白A急性肝损伤模型）、方案二（急性酒精性肝损伤模型）和方案三（亚急性酒精性肝损伤模型）三种

1.1 方案一（刀豆蛋白A急性肝损伤模型）

1.1.1体重

1.1.2血清中谷丙转氨酶（ALT）

1.1.3血清中谷草转氨酶（AST）

1.1.4血清中乳酸脱氢酶（LDH）

1.1.5 肝组织病理学检查

1.2 方案二（急性酒精性肝损伤模型）

1.2.1体重

1.2.2血清甘油三酯（TG）

1.2.3血清极低密度脂蛋白（VLDL）

1.2.4肝组织病理学检查

1.3 方案三（亚急性酒精性肝损伤模型）

1.3.1体重

1.3.2血清中胆固醇（CHOL）

1.3.3血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL)

1.3.4血清中胆红素（TBIL）

1.3.5肝组织病理学检查

 

2 试验原则

2.1所列指标均为必做项目。

2.2根据受试样品作用原理的不同，方案一、方案二和方案三任选其一进行动物实验。

 

3 结果判定

方案一（刀豆蛋白A急性肝损伤模型）在模型成立的前提下，ALT、AST和LDH中任两项血液生化指标阳性和病理结果阳性，可判定受试样品对化学性肝损伤有辅助保护功能。

方案二（急性酒精性肝损伤模型）：血清中TG、VLDL指标阳性和病理组织学检查结果阳性，可判定该受试样品具有对急性酒精性肝损伤有辅助保护功能功能。

方案三（亚急性酒精性肝损伤模型）：① 血清中CHOL、LDL和TBIL三项检测指标结果阳性，可判定该受试样品具有对亚急性酒精性肝损伤有辅助保护功能作用；② 血清中CHOL、LDL和TBIL三项指标中任两项结果阳性，且肝脏病理组织学检查结果阳性，可判定该受试样品具有对亚急性酒精性肝损伤有辅助保护功能功能。

在急性或亚急性酒精性肝损伤结果判定中，任何一项方案为阳性时，可认为该受试物具有降低酒精性肝损伤危害功能。

 对化学性肝损伤有辅助保护功能检验方法

Method for the Assessment of Assisting the Protection Against Chemical Injury of Liver Function

 

1 方案一（刀豆蛋白A急性肝损伤模型）

1.1 原理

刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)是一种在人体内对肝细胞有特异性毒性作用的植物凝集素，它能在体外激活T细胞的丝裂原，进入循环后首先活化T淋巴细胞，继而激活肿瘤坏死因子（TNF）和白介素2等细胞因子，引发炎症反应，可诱导淋巴细胞、巨噬细胞的细胞毒作用，通过肝细胞凋亡等多种途径损伤肝细胞。

1.2实验动物

成年大鼠或小鼠，单一性别，大鼠（180-220克），每组8-12只；小鼠（18－22克），每组10-15只。

1.3 实验方法

1.3.1 剂量和分组

至少设三个剂量组，同时设阴性对照组和模型对照组，必要时设溶剂对照组。以人体推荐量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠)一个剂量（等效应剂量），另设二个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量（以公斤计算）的30倍。

1.3.2受试样品的给予

经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料或饮水亦可，并记录每只动物的饲料摄入量或饮水量。原则上连续给予30天，必要时可延长至45天。

1.3.3实验步骤

1.3.3.1造模方法

每日经口灌胃给予受试样品，阴性对照组和模型对照组给予纯净水。将动物每周称重两次，以调整受试样品剂量。模型组及各样品组于实验结束时一次尾静脉给予剂量为15～20mg/kg的刀豆蛋白A，小鼠10ml/kg BW，禁食8h后经腹腔注射60mg/kg BW的戊巴比妥钠溶液麻醉，腹主动脉采血，并取肝组织，进行各项指标的检测及病理组织学检查。

1.3.3.2检测指标

体重、血清中谷丙转氨酶（ALT）、血清中谷草转氨酶（AST）、血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肝脏病理组织学变化。

1.4 血清ALT、AST和LDH的测定

1.4.1检测方法

血清中ALT、 AST 推荐采用速率法，

LDH推荐采用乳酸为底物的速率法（LD-L法）。

血样离心（2500rpm）后取上清，血清中的ALT、AST和LDH的检测采用用全自动或半自动生化分析仪进行。

1.4.2 数据处理

数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验。方差齐，计算F值，F值＜F_0.05，各组均数间差异无显著性；F值＞F_0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

1.4.3 结果判定

模型对照组与阴性对照组比较，血清ALT、AST和LDH含量升高有统计学意义（P＜0.05），表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品组血清ALT、AST和LDH含量与模型对照组比较降低，差异有显著性（P＜0.05），可分别判定ALT、AST和LDH指标结果阳性。

1.5 肝脏病理组织学检查

1.5.1 实验材料

取小鼠肝脏左叶用10%福尔马林固定，从肝左叶中部做横切面取材，常规病理制片（石蜡包埋，HE染色）。

1.5.2镜检

从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用5倍物镜连续观察整张组织切片，可见肝脏多发的灶状、片状坏死。

1.5.3 评分标准

 

肝细胞坏死：

大致正常 偶见坏死细胞 坏死细胞小于整个视野的1/4 坏死细胞占整个视野的1/4～1/2 坏死细胞占整个视野的1/2～3/4	0分
	1分
	2分
	3分
	4分
坏死细胞弥漫整个视野	5分

1.5.4 数据处理

采用方差分析或秩和检验。但方差分析需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F_0.05，各组均数间差异无显著性；F值＞F_0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

1.5.5 病理结果判定

模型对照组与阴性对照组比较肝细胞坏死程度加重有统计学意义（P＜0.05），表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品任何一个剂量组与模型对照组比较，肝细胞坏死程度减轻，有统计学意义（P＜0.05），可判断为阳性结果。

1.6 结果判断

在模型成立的前提下，ALT、AST和LDH中任两项血液生化指标阳性和病理结果阳性，可判定受试样品对化学性肝损伤有辅助保护功能。

 

 

2.方案二：急性酒精性肝损伤模型

2.1 原理

机体大量摄入乙醇后，在乙醇脱氢酶的催化下大量脱氢氧化，使三羧酸循环和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢。乙醇通过增加甘油三酯合成，减少脂肪氧化，降低肝脏运出脂肪的功能，增加脂肪组织的脂肪动员,引起早期酒精性脂肪肝和高脂血症。

2.2 实验动物

成年大鼠或小鼠，单一性别，大鼠（180-220克），每组8-12只；小鼠（18－22克），每组10-15只。

2.3 实验方法

2.3.1 剂量和分组

至少设三个剂量组，同时设阴性对照组和模型对照组，必要时设溶剂对照组。以人体推荐量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠)为其中的一个剂量组，另设两个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量（以公斤计算）的30倍。用无水乙醇（分析纯）造成肝损伤模型，无水乙醇浓度为50％（以纯净水稀释），灌胃量12ml～14ml/kgBW（乙醇密度0.8g/ml，折合乙醇的剂量为4800～5600mg/kgBW）。

2.3.2 给予受试样品的途径和时间

经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料或饮水亦可，并记录每只动物的饲料摄入量或饮水量。原则上连续给予30天.

2.3.3 实验步骤和造模方法

每日经口灌胃给予受试样品，阴性对照组和模型对照组给予纯净水。将动物每周称重两次，按体重调整受试样品量。模型对照组和各样品组于实验结束时一次灌胃给予50%的乙醇，小鼠灌胃量12ml/kg BW，阴性对照组给予纯净水，禁食16h。动物腹腔注射60mg/kg BW的戊巴比妥钠溶液麻醉后腹主动脉采血，并取肝组织，进行各项指标的检测及病理组织学检查。

2.3.4 检测指标

体重 、血清中甘油三酯（TG）、血清中极低密度脂蛋白(VLDL)、肝组织病理学检查(肝细胞脂肪变性)。

2.4 血清中甘油三酯（TG）测定

2.4.1测定方法

推荐采用酶法（GPO-PAP法）。采用用全自动或半自动生化仪测定血清中TG的含量。

2.4.2 数据处理

数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值＞F_0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2.4.3 结果判定

模型对照组与阴性对照组比较TG含量升高有统计学意义（P＜0.05），表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品组TG含量与模型对照组比较降低，差异有显著性（P＜0.05），判定该指标结果阳性。

2.5 血清中极低密度脂蛋白（VLDL）测定

2.5.1 测定方法

推荐采用ELISA法。采用极低密度脂蛋白ELISA试剂盒测定血清中的VLDL的含量。

2.5.2 数据处理

2.5.3 数据处理

数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值＞F_0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2.5.4 结果判定

模型对照组与阴性对照组比较，血清VLDL含量升高有统计学意义（P＜0.05），表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品组血清VLDL含量与模型对照组比较降低，差异有显著性（P＜0.05），判定该指标结果阳性。

2.6 肝脏病理组织学变化、诊断标准和结果判定

2.6.1 实验材料

从小鼠肝左叶中部做横切面取材，冰冻切片，苏丹Ⅲ染色。

2.6.2镜检

从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用5倍物镜连续观察整张组织切片。主要观察脂滴在肝脏的分布范围和面积。

2.6.3评分标准

肝细胞内脂滴无或稀少。 含脂滴的肝细胞不超过1/4 含脂滴的肝细胞不超过1/2 含脂滴的肝细胞不超过3/4 肝组织几乎被脂滴代替	0分
	1分
	2分
	3分
	4分

2.6.4 数据处理

采用方差分析或秩和检验。方差分析需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F_0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值＞F_0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

2.6.5 结果判定

模型对照组与阴性对照组比较脂肪变性程度加重有统计学意义（P＜0.05），表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品任何一个剂量组与模型对照组比较，脂肪变性程度减轻，有统计学意义（P＜0.05），可判断为阳性结果。

2.7 急性酒精性肝损伤的结果判断

在模型成立的前提下，血清中TG、VLDL两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性，可判定受试样品对急性酒精性肝损伤有辅助保护功能。

 

 

3 方案三：亚急性酒精性肝损伤模型

3.1 原理

机体反复多次过量摄入乙醇后，乙醇可通过诱导CYP4502E1，引起氧化应激、脂质过氧化、代谢/营养的紊乱以及线粒体结构和功能的改变等一系列反应，导致肝细胞的功能损伤，进而引起肝组织中甘油三酯含量聚积，胆固醇合成加强，并引起相应载脂蛋白含量的改变。

3.2 实验动物

成年大鼠或小鼠，单一性别，大鼠（180-220克），每组8-12只；小鼠（18－22克），每组10-15只。

3.3 实验方法

3.3.1 剂量和分组

至少设三个剂量组，同时设阴性对照组和模型对照组，必要时设溶剂对照组。以人体推荐量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠)为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，最高剂量不得超过人体推荐量（以公斤计算）的30倍。

3.3.2受试样品的给予

经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料或饮水亦可，并记录每只动物的饲料摄入量或饮水量。原则上连续给予30天，必要时可延长至45天。

3.3.3 实验步骤

3.3.3.1造模方法

每日经口灌胃给予受试样品，阴性对照组和模型对照组给予纯净水。将动物每周称重两次，以调整受试样品剂量。模型组和样品组于实验结束前14天每天经口灌胃给予30%的乙醇，小鼠灌胃量10ml/kg BW（乙醇密度0.8g/ml，折合乙醇的剂量为2400mg/kgBW）。样品灌胃后间隔4小时以上再给予乙醇。实验结束前禁食4h，经腹腔注射60mg/kg BW的戊巴比妥钠溶液麻醉后，腹主动脉采血，并取肝组织，进行各项指标的检测及病理组织学检查。

3.3.3.2 血清生化指标检测

体重、血清中胆固醇（CHOL）、血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、血清中胆红素（TBIL）、肝组织病理学检查。

3.4 CHOL、LDL和TBIL测定

3.4.1测定方法

血清胆固醇（CHOL）推荐采用酶法（COD-PAP法），血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL)推荐采用匀相测定法，血清胆红素（TBIL）推荐采用改良J-G法。血样离心（2500rpm）后取上清，上全自动或半自动生化仪测定血清中CHOL、LDL和TBIL的含量。

3.4.2 数据处理

数据采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验。方差齐，计算F值，F值< F0.05，各组均数间差异无显著性；F值>F0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

3.4.3 结果判定

模型对照组与阴性对照组比较，血清CHOL、LDL和TBIL含量升高有统计学意义（P<0.05），表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品组血清CHOL、LDL和TBIL含量与模型对照组比较降低，差异有显著性（P<0.05），判定该指标结果阳性。

3.5 肝脏病理组织学变化、诊断标准和结果判定

3.5.1 实验材料

取小鼠肝脏左叶用10%福尔马林固定，从肝左叶中部做横切面取材，常规制片，HE染色。

3.5.2 镜检

用5倍物镜连续观察整张组织切片，主要观察肝细胞变性（脂肪变性、水样变性、胞浆凝聚、气球样变）、肝细胞坏死和炎症改变等，并同时给予记录。2.5.3 评分标准

肝细胞气球样变：

无肝细胞气球样变 偶见肝细胞气球样变 气球样变的肝细胞占整个视野的1/3以内 气球样变的肝细胞占整个视野的1/3以上 肝细胞广泛的气球样变	0级    0分
	I级    1分
	II级   2分
	III级  3分
	IV级   4分

肝细胞脂肪变性：

无肝细胞脂肪变性 偶见肝细胞脂肪变性 灶状肝细胞脂肪变性，占肝细胞总数1/3以内 脂肪变性肝细胞占1/3以上 肝细胞弥漫脂变	0级    0分
	I级    1分
	II级   2分
	III级  3分
	IV级   4分

胞浆凝聚：

未见肝细胞胞浆凝聚 偶见肝细胞胞浆凝聚 胞浆凝聚的肝细胞占整个视野的1/3以内 胞浆凝聚的肝细胞占整个视野的1/3以上 肝细胞广泛的胞浆凝聚	0级    0分
	I级    1分
	II级   2分
	III级  3分
	IV级   4分

水样变性：

未见水样变性的肝细胞 偶见肝细胞水样变性 水样变性的肝细胞占整个视野的1/3以内 水样变性的肝细胞占整个视野的1/3以上 水样变性的肝细胞弥漫性存在占整个视野	0级    0分
	I级    1分
	II级   2分
	III级  3分
	IV级   4分

炎症改变：

未见炎症改变 偶见小炎症灶 少数小炎症灶 多数小炎症灶 炎症灶广泛存在	0级    0分
	I级    1分
	II级   2分
	III级  3分
	IV级   4分

肝细胞坏死：

无肝细胞坏死 单个肝细胞嗜酸性坏死或偶见小坏死灶 散在分布的小坏死灶 多数小坏死灶，无碎屑状坏死或桥接坏死 小坏死灶广泛存在伴碎屑状坏死或桥接坏死	0级    0分
	I级    1分
	II级   2分
	III级  3分
	IV级   4分

   

3.5.4肝脏病变计分方法

将每只动物肝细胞各种病理变化得分相加，肝细胞坏死评分2倍计入，以总分进行统计分析。每只动物肝脏病变得分=肝细胞变性得分（气球样变得分+脂肪变性得分+胞浆凝聚得分+水样变性得分）×1+ 肝细胞炎症改变得分×1 + 肝细胞坏死得分×2

3.5.5数据处理

采用方差分析或秩和检验。方差分析需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值＜F0.05，各组均数间差异无显著性；F值＞F0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

3.5.6病理结果判定

模型对照组与阴性对照组比较，肝细胞病变程度与模型对照组比较明显加重，病变总分值增加且有统计学意义（P＜0.05），可判断模型成立。在模型成立的前提下，受试样品任何一个剂量组与模型对照组之间，肝细胞病变程度明显减轻，病变总分值降低且有统计学意义（P＜0.05），可判断动物实验病理结果阳性。

3.6亚急性酒精性肝损伤结果判定

在模型成立的前提下，满足以下任一条件，可判定受试样品对亚急性酒精性肝损伤有辅助保护功能。

3.6.1 血清中CHOL、LDL和TBIL三项检测指标结果阳性。

3.6.2 血清中CHOL、LDL和TBIL三项指标中任两项结果阳性和病理组织学检查结果阳性。

对化学性感损伤有辅助保护功能评价方法修改说明

 

一、承担单位

广东省疾病预防控制中心。

 

二、主要工作过程：

国家食品药品监督管理局保健食品化妆品监管司（下称保化司）于2009年4月召开“保健食品功能评方法及有关程序修订”课题协作组工作会议，参会的有中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、广东省疾病预防控制中心、上海市疾病预防与控制中心、北京市疾病预防控制中心、四川大学华西公共卫生学院、中国中医研究院东直门医院和国家食品药品监督管理局保健食品审评中心的专家近15人，会上对“保健食品功能评价方法及有关程序修订”修订的原则和框架作了充分的讨论，又分别征求了相关专家对修订内容的意见。广东省疾病预防控制中心成立了“对化学性肝损伤有辅助保护功能”修订的起草工作小组，经查阅国内外相关资料，参考保化司召开的工作会议的精神，咨询有关专家和实验室同行的意见和建议，形成了工作方案。经过起草工作小组开展的大量条件探索和实验方法研究，形成了修订初稿，起草工作小组召开了多次专家研讨会，征求专家意见，对初稿进行了反复修改，形成送审稿。方法验证工作由广东省疾病预防控制中心、湖南省疾病预防控制中心、湖北省疾病预防控制中心、福建省疾病预防控制中心分别进行验证试验。在此基础上，征集、整理和归纳相关意见和建议形成送审稿。

保化司于2010年8月再次召开课题协作组工作会议，参会的有中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、广东省疾病预防控制中心、上海市疾病预防与控制中心、北京市疾病预防控制中心、四川大学华西公共卫生学院、中国中医研究院西苑医院的专家近10人，会上针对验证过程中存在的技术问题及可操作性作了充分讨论并提出修改意见，起草工作小组根据会议精神对修订方案做了进一步完善，并邀请北京市疾病预防控制中心进行部分项目的验证，综合了方法验证单位的意见后最终形成了送审稿。

2011年7月，保化司在北京召开“保健食品功能评价方法及有关程序修订”定稿专家研讨会，参会的有中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、北京大学、广东省疾病预防控制中心、北京市疾病预防控制中心、上海市疾病预防控制中心、中国中药研究院、中国中医研究院西苑医院、北京医院、国家食品药品监督管理局保健食品审评中心的专家14人，会上对修订后的“有助于降低化学性肝损伤危害”的科学性、客观性和可操作性给予肯定，并提出修改意见，后经多次司务会研究做了进一步完善，形成本修订稿。

 

三、编制原则

1、总原则，提高保健食品“对化学性感损伤有辅助保护功能”检验方法的科学性、准确性和规范性，适应当前法规对保健食品实行严格监管的要求。

2、要符合当前化学性肝损伤研究的基础理论，既考虑原规范合理的方法，又要提高保健食品功能检验的技术标准，选择保留、改良或新增加的指标要在国内外已经广泛应用并得到普遍的认可，可以反映保健食品的对化学性肝损伤的辅助保护功能。

3、在撰写过程中，注意科学性、合理性、和适用性。

 

四、确定相关技术内容及新旧技术规范的对比

本修订稿与原规范比较，具体修改部分见下表

编号	原方法		现方法		修订理由
	序号	内容	序号	内容
1	1	方案一：四氯化碳肝损伤模型		方案一：删除四氯化碳肝损伤模型，增加刀豆蛋白A急性肝损伤模型，并增加血清中乳酸脱氢酶指标	新增方法适用性强，并提高判定标准
2	2.1	原理	2.1	原理修改内容包括，增加“乙醇能增加甘油三酯的合成，减少脂肪的氧化，降低肝脏肝脏运出脂肪的功能，同时增加脂肪组织的脂肪动员,引起早期酒精性脂肪肝和高脂血症”， 删除氧化还原的内容。	从脂质代谢紊乱的途径考虑急性酒精性肝损伤机理
3	2.3.1	剂量分组及受试样品给予时间	2.3.1	增加“乙醇密度0.8g/ml，折合乙醇的剂量为4800-5600mg/kgBW”	使得乙醇的摄入量更明确。吸收的酒精量=饮酒量×酒精度数×0.8
4	2.3.3	实验步骤	2.3.3	实验步骤和造模方法中增加“动物腹腔注射60mg/kg BW的戊巴比妥钠溶液麻醉后腹主动脉采血”	推荐采血方法，减少溶血
5	2.3.4	检测指标	2.3.4	检测指标中增加体重、血清中甘油三酯（TG）、血清中极低密度脂蛋白(VLDL-C)，删去“肝匀浆中TG、MDA、GSH含量的测定”	通过文献和实验研究，确定敏感指标。
6	2.4、2.5、2.6	肝匀浆中MDA测定方法、肝匀浆中GSH测定方法、肝匀浆中TG测定方法	2.4、 2.5	删除肝匀浆中MDA测定方法、肝匀浆中GSH测定方法，增加血清中TG的测定方法、血清中极低密度脂蛋白（VLDL-C）测定方法	灵敏度和特异度差，增加血清中TG的测定和血清中极低密度脂蛋白（VLDL-C）测定，因该两种方法敏感性较高，特异度较好
7	2.7.4	数据处理和结果判定	2.6.4 结果判定	结果判定中增加乙醇模型对照组与阴性对照组比较脂肪变性程度加重有统计学意义（P＜0.05），表示模型成立。在模型成立的前提下，受试样品任何一个剂量组与乙醇模型对照组比较，脂肪变性程度减轻，有统计学意义（P＜0.05），可判断为阳性结果。	对结果判定内容进行细化，明确阳性判定的依据。
8	2.8	结果判定	2.7 急性酒精性肝损伤的结果判断	结果判断修改为血清中TG、VLDL-C指标阳性和病理组织学检查结果阳性，删除原来的结果判断。	急性酒精性肝损伤的原理部分是从大剂量的酒精短时间可引起急性酒精性脂肪肝和高脂血症进行阐述。
9			3	增加方案三亚急性酒精性肝损伤模型	针对部分人群小剂量，长期饮酒的模式增加该方案，建立亚急性酒精性肝损伤模型。
10				增加“有助于降低酒精性肝损伤危害结果判定“在急性酒精性肝损伤结果判定、亚急性酒精性肝损伤结果判定中，任何一项为阳性时，可判定该受试物具有有助于降低酒精性肝损伤危害功能”。	增加该项目，明确判定受试物阳性的依据。

　　认为自己研制制作的有孔虫模型被人仿制成雕塑，八旬院士郑守仪走上法庭，状告雕塑家刘俊谦及雕塑制作公司、雕塑摆放者侵权。今天（7日）上午，山东省青岛市中级人民法院对此案进行公开宣判，依法判决被告的雕塑作品侵权，被告要修改雕塑作品介绍，并分别承担赔偿、登报道歉消除影响、支付使用费等责任。    
　　郑守仪是中国科学院海洋研究所研究员、中国科学院院士，从事中国海域有孔虫分类和生态学研究逾半个世纪，凭借专业的科研手段和分类学专家的知识经验，雕琢了230多个有孔虫模型。郑守仪称，2008年6月，她发现烟台滨海中路新落成的10个雕塑与青岛科技大学艺术学院教师刘俊谦从郑守仪处借走的有孔虫模型极为相似，同时几乎全部雕塑歪曲了有孔虫美学的天然性，特别是大部分有孔虫雕塑的所谓“学名”，乃是张冠李戴的错误引用，使有孔虫雕塑完全失去其科学意义。事后经烟台环境艺术管理办公室证实，有孔虫雕塑系是刘俊谦与莱州市万利达石业有限公司合作制造，由烟台环境办购买放置于烟台市滨海中路。
　　郑守仪及其所在的中科院海洋研究所将刘俊谦和万利达公司、烟台环境办告上法庭，请求法院判令三被告立即停止侵权，清除有孔虫雕塑，消除因侵权行为给原告造成的不良影响，在媒体上向原告公开赔礼道歉，赔偿原告经济损失50万元。
　　法院经审理认为，被控雕塑中有9座侵犯了郑守仪享有的署名权，侵犯了中科院海洋研究所享有的复制权、修改权、保护作品完整权。法院判令：被告烟台环境办将9座侵权雕塑底座上的相关介绍移除，并在显著位置注明“根据中国科学院海洋研究所、郑守仪的有孔虫模型、对局部进行变形处理制作而成”，指明有孔虫的具体名称，同时向中国科学院海洋研究所支付作品使用费5万元；刘俊谦、万利达石业有限公司、烟台环境办在当地媒体上向原告公开赔礼道歉；刘俊谦赔偿中国科学院海洋研究所经济损失及合理费用共计6万元。
　　-背景知识-
　　有孔虫
　　有孔虫是一种古老的原生动物，被誉为见证地球沧海桑田变迁的“活化石”，5亿多年前就生活在海洋中，至今种类繁多，有“大海里的小巨人”之称。有孔虫对环境的反应特别敏感，有明显的深度分布范围，因而它们是最好的海深指示生物。由于不同时期有不同的有孔虫，因此，根据有孔虫的沉积物不但能确定地层的地质年代，而且还能提示地下情况，从而为寻找矿藏尤其是石油，提供重要依据。
　　-庭审焦点-
　　有孔虫模型是否拥有著作权
　　郑守仪称有孔虫是她几十年来研究的课题，刘俊谦未经自己同意，复制、歪曲、篡改他人作品谋取利益，是对其著作权的严重侵犯。刘俊谦辩称，有孔虫是自然界客观存在的，早已被人类发现并认识的物种，就像大虾、大白菜一样，任何人都可以对这个题材进行创作。
　　法院认为，有孔虫模型根据自然界中的单细胞动物有孔虫的外形、构造，按照一定比例放大制成，具有长、宽、高等要素属立体结构，其形式上符合我国著作权法关于模型作品的定义。因此，有孔虫模型是否受著作权法保护的关键在于其是否具有独创性。
　　由于有孔虫本身非常小，人的肉眼根本无法看到，为了让社会公众能够欣赏到有孔虫的美，也为了普及有孔虫的科学知识，郑守仪花费大量时间对有孔虫进行观察、分析的基础上制成了有孔虫放大模型。因此，有孔虫模型系原告郑守仪独立创作完成，是她的智力劳动的成果，构成著作权法意义上的作品。
　　郑守仪认为烟台竖立的有孔虫雕塑侵犯了她的著作权，刘俊谦辩称自己的雕塑作品与郑守仪的模型作品，一个属于艺术领域，一个属科学领域，两者不具有可比性。
　　法院认为，模型作品与被控烟台雕塑虽然分属不同的领域，但两者都是立体作品，均是通过点、线、面等构成要素之间组合的变化、相互依赖从而形成各种形态，故两者可以进行比对。经过比对，法院认定除一件雕塑以外，其余9件被控雕塑与郑守仪模型作品的整体结构、基本形态、表现手法均构成相似，仅是在局部进行了简单的改变，从整体上看，两者不存在明显的视觉差异。
　　法院同时认为，有孔虫作为自然界客观存在的生物，任何人都有权以其为对象进行自由创作，但是这种自由创作应是以有孔虫为对象，而非郑守仪的模型作品。如果是以模型作品为对象进行创作，在二者构成实质性相似的情况下，这种“创作”构成对郑守仪作品的复制，并可能侵犯原告对其作品享有的其他权利。