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专利观察:利用离子溶剂储存生物催化剂可更好维持其催化活性

许多生物催化剂,如酶和酵母菌等的分子构象易被破坏,活性容易下降,即在温度、pH值、溶剂、或分子间的静电斥力的影响下催化能力衰退。因此,在生物催化剂的储存或使用过程中,对其活性位点和氨基酸残基的构象的保...即将发布

日期:2017年3月24日 - 来自[技术要闻]栏目
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植生生态所科研人员揭示产溶剂梭菌木糖信号感应及转运新机制


12月1日,国际学术期刊《Molecular Microbiology》在线发表了中科院上海生科院植生生态所姜卫红研究组题为“A novel three-component system-based regulatory model for d-xylose sensing and transport in Clostridium beijerinckii”的研究论文。该工作揭示了产溶剂梭菌的木糖信号感应及转运新机制。

产溶剂梭菌在发酵过程中可产生丙酮、乙醇和丁醇等化学品和生物燃料,是一类重要的工业微生物。如何使产溶剂梭菌高效利用碳源,特别是廉价的糖基原料并转化为目标产物,一直受到人们的关注。木糖是自然界中储量最丰富的五碳糖,是秸秆等木质纤维原料中除葡萄糖外最主要的糖组分。因此,木糖信号感应及转运对于微生物利用这类生物质至关重要。

姜卫红组的博士研究生孙喆和顾阳研究员通过生物信息学分析在梭菌中发现了一组可能与木糖信号响应及转运相关的连锁基因。进一步的研究表明,该基因簇中的双组分调控系统LytS/YesN与常规不同,并不能直接感应木糖信号,而由相邻的蛋白XylFII执行这一功能。XylFII与激酶LytS在跨膜结构和互作关系上均有独特性。因此,它们构成了一种新型的“三组分系统”(XylFII-LytS-YesN)来完成对环境中木糖分子的感应以及通过信号传导对下游ABC转运蛋白的调节功能,从而促进木糖的利用。该“三组分”系统在厚壁菌门细菌中广泛存在,预示着它具有普适性,在细菌木糖代谢过程中扮演着重要角色。

该工作得到了科技部973计划和国家自然科学基金委项目的支持。


日期:2014年12月5日 - 来自[技术要闻]栏目

浙江合资药企华义医药爆炸 有机溶剂罐起火

    6月10日19时49分,浙江省金华市公安消防支队义乌大队接到报警称:位于义乌市佛堂镇的浙江华义医药有限公司车间罐体爆炸并起火。爆炸起火部位为室外露天罐体共两排22个,单个罐体大约容量为4-5个立方,内部物质为甲醇(2558,17.00,0.67%)、乙酸、乙酯等有机溶剂。21时10分,现场火势基本控制,火灾过火面积约为300平方米,经现场初步确定现有一人轻微伤。
    接警后,义乌市公安消防大队立即调派特勤二中队、稠江中队共10辆消防车56名指战员以及佛堂专职消防队、赤岸专职队、义亭专职队、江东专职队共6辆消防车45人赶赴现场扑救。火灾发生后,金华消防支队迅速调派金东、东阳、特勤三个大队5辆消防30人赶赴义乌增援。
    当晚19时55分,佛堂镇专职消防队第一时间到达现场。21时10分,现场火势基本控制,火灾过火面积约为300平方米,经现场初步确定现有一人轻微伤。
    浙江华义医药有限公司位于义乌市佛堂镇双峰路15号,为中外合资企业,注册资金1950万美元。主要生产中间体医药原料药,共有员工258名,占地面积110亩,建筑面积约5万平方,厂区内共有生产车间5栋,研发车间2栋,综合仓库、成品仓库、办公楼、综合楼等建筑,厂区内共有制药用的反应釜96个,离心机28台,着火车间为厂区第四车间,主要生产克拉霉素等药品,起火部位位于回收二甲基亚砜(反应溶剂)。(中国新闻网)

日期:2014年6月13日 - 来自[企业观察]栏目
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上海生科院受邀在国际期刊发表关于产溶剂梭菌的综述论文

4月28日,Current Opinion in Biotechnology 杂志在线发表了中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所姜卫红和杨晟研究组的特邀综述,题目为Utilization of economical substrate-derived carbohydrates by solventogenic clostridia: 

pathway dissection, regulation and engineering。

产溶剂梭菌(Solventogenic clostridia)为革兰氏阳性、厌氧细菌,在发酵过程中可产生丙酮、乙醇、正丁醇等化学品和生物燃料,是一类重要的工业微生物。如何使产溶剂梭菌高效利用碳源,特别是廉价的糖基原料(如富含戊糖、己糖的木质纤维原料以及工业生产中伴生的糖基副产物等)并转化为目标产物,是人们关注的热点之一。

随着近年来基因组信息的完善和分子工具的发展,产溶剂梭菌中糖转运和代谢途径的解析以及相关调控机制的研究都取得了一些突破。该综述论文总结了这方面的最新进展,首先介绍了产溶剂梭菌糖代谢的研究概况,然后着重阐述了经济型发酵底物中各种糖类利用相关的基因、代谢途径及调控机制;在此基础上,还介绍了梭菌糖代谢相关的菌株遗传改造及代谢工程的研究进展;最后提出了有待解决的问题,并对未来的研究方向进行了展望。

植生生态所姜卫红和杨晟研究组一直致力于产溶剂梭菌的基础与应用研究,重点关注重要代谢途径及其调控机制的解析。近年来,他们与国内外研究者及相关企业密切合作,在产溶剂梭菌的分子工具开发、遗传改造、代谢途径的重构与调控,以及产业化推进等方面取得了一系列进展,相关研究成果申请了国内外多项专利,并发表于微生物和代谢工程领域多个主要期刊上。相关研究工作得到了国家科技部、国家自然科学基金委,中科院项目的经费支持。

日期:2014年5月5日 - 来自[技术要闻]栏目

全有机溶剂中化学-酶法高效制备手性菊酯技术获奖

由中国浙江大学杨立荣教授领衔开发的全有机溶剂中化学—酶法高效制备手性菊酯关键技术获得2012年度国家技术发明奖,近日杨立荣教授向世界农化网介绍了该成果的产业化意义。

酶催化反应因具有高度专一性、高效性、反应条件温和等独特优点,全球的科学家都在积极利用生物催化来实现有机化合物的合成。

现代社会两种重要的物质加工方式中,化学加工大多涉及有机溶剂和脂溶性产品,生物加工则更多涉及水/微水体系和水溶性产品。酶催化技术是生物加工的核心。如果要将酶催化技术应用到化学加工体系加工脂溶性产品,那么最好能让酶在有机溶剂中发挥作用并具有催化活力。

但是目前在有机溶剂中进行的生物催化过程存在缺乏高效生物催化剂、催化效率低、酶容易失活等问题,虽然在实验室研究中已经开展了广泛的研究,但至今未见有工业化应用的报道。

针对上述问题,浙江大学重点研究适用于有机溶剂高效工业生物催化剂的制备和生物催化反应过程工程技术,针对全有机溶剂反应体系特殊要求,通过菌种选育和甲基丙烯酰氧丙基凝胶法高效固定化技术,显著提高了固定化脂肪酶的活力、稳定性和对映体选择性,解决了缺乏适用于有机溶剂环境高效工业生物催化剂的问题。创新了全有机溶剂中酶促拆分制备手性醇的工艺路线,解决了底物浓度和反应效率低的问题。

据杨立荣教授介绍,常州康美化工有限公司采用这一技术建成的拟除虫菊酯类杀虫剂生产线产能达到300吨/年,产品吨成本从30余万元降至20余万元,所产生的废水较传统方式减少了80%。该技术还可以推广应用于医药、农药、化工、食品等行业,有助于推动行业技术升级和改造。 

日期:2013年4月23日 - 来自[科教新闻]栏目
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盘点国内各大药企发明专利

浙江新赛科药业有限公司杨和军等人的发明专利:“一种缬沙坦的精制方法”于2012年8月1日公开,专利号:CN102617497A。

该发明公开了一种缬沙坦的精制方法,步骤包括:将缬沙坦粗品用醇溶剂或酯溶剂溶解,再加入无机碱成盐,离心得缬沙坦的盐,将所得缬沙坦的盐加入到酯溶剂中,加入无机酸的水溶液酸化、分层,酯溶剂层经水洗涤后回收干溶剂,再加入酯溶剂溶解物料,溶解后经搅拌、降温结晶、离心和干燥,制得缬沙坦。

该方法操作简单,收率高,成本低,得到的缬沙坦质量好,由于试剂均为一些常用试剂,价廉易得,同时有利于环保,适合工业化生产,得到的缬沙坦的质量符合2010版中国药典的标准,精制质量收率达75%以上。

广东东阳光药业有限公司雷鑫等人的发明专利:“一种合成缬沙坦的改进工艺”于2012年8月29日公开,专利号:CN102649780A。

该发明提供了一种合成缬沙坦的改进工艺,此方法以N-[(2’-氰基-1,1’-联苯-4-基)甲基]-L-缬氨酸甲酯盐酸盐为起始原料,通过对酰化反应,环化反应,水解反应和结晶过程的分别改进控制,得到高纯度的缬沙坦;此工艺操作连续、简单,收率、纯度高,适宜于工业化生产。

浙江新赛科药业有限公司胡宇宏等人的发明专利:“一种高纯度缬沙坦的制备方法”于2012年3月28日公开,专利号:CN102391200A。

该发明公开了一种高纯度缬沙坦的制备方法,步骤包括:将缬沙坦粗品用酯溶剂重结晶后干燥,再溶于无机碱的水溶液中,然后用盐酸的水溶液调至酸性,经离心、干燥和粉碎后的物料用酸的水溶液洗涤、离心、干燥,制得高纯度的缬沙坦。

该方法操作简单,制得的缬沙坦纯度高,质量为:有关杂质未检出,手性异构体未检出,单个溶残小于100ppm,试剂均为一些常用试剂,价廉易得,且成本较低,同时有利于环保,适合工业化生产。

浙江新赛科药业有限公司李洪武等人的发明专利:“一种缬沙坦母液的回收方法”于2012年1月25日公开,专利号:CN102329276A。

该发明公开了一种缬沙坦母液的回收方法,步骤包括:(1)将缬沙坦母液回收溶剂后得到油状物,加入酯溶剂溶解油状物,再冷却结晶,分离出固体,经干燥得到粗品;(2)将上一步骤中的粗品用酯溶剂溶解,降温后加入缬沙坦晶种,继续降温析晶,分离出固体,经干燥得到缬沙坦。该方法操作简单,回收产品质量好,回收过程使用单一溶剂,且可回收套用,成本低,适于工业化生产。

安徽省虹升生物科技有限公司沈仕等人的发明专利:“一种改进的制备缬沙坦方法”,于2012年1月18日公开,专利号:CN102321038A。

该专利由缬沙坦中间体(N-(1-戊酰基)-N-[4-[2-(5-氰基)苯基]苄基]-L-缬氨酸开始通过对重氮化,皂化析晶和纯化工艺的改进,缩短重氮化反应的时间,减小能量的损耗和对环境的污染,再通过对皂化析晶和精制的控制,提高缬沙坦的收率和纯度,不仅降低了工业生产成本,而且符合国家节能减排要求,更适合工业化生产。

江苏江神药物化学有限公司王俊华等人的发明专利:“一种高纯度缬沙坦甲酯晶体的生产工艺”于2011年5月18日公开,专利号:CN102060797A。

该发明提供了一种清洁、环保、高纯度的缬沙坦甲酯晶体生产工艺,避免了使用对人体和环境毒害大的有机锡化合物,如叠氮化三丁基锡、氯代三丁基锡等;通过结晶纯化,能够得到高化学纯度、高光学纯度的缬沙坦甲酯晶体。该发明还提供了一种将该缬沙坦甲酯晶体进一步水解,高产率地生产高纯度缬沙坦的生产工艺。

山东新时代药业有限公司赵志全等人的发明专利:“一种缬沙坦制备方法的改进”于2011年4月13日公开,专利号:CN102010381A。

该发明提供了一种合成缬沙坦的改进方法,其特征在于采用叠氮基三甲基硅烷代替了叠氮基锡化合物作为叠氮基的来源,使毒性大大降低,四丁基氟化铵作催化剂时采用无溶剂反应法引入四唑环,简化了操作,提高了收率,收率达80%以上。

北大国际医院集团西南合成制药股份有限公司王威等人的发明专利:“一种合成缬沙坦的新方法”于2011年1月5日公开,专利号:CN101935308A。

该发明用L-缬氨酸为原料,先酯化制得L-缬氨酸酯,然后氨化得L-缬氨酰氨,再与2’-(N-三苯甲基)四氮唑基-4-溴甲基联苯(BBTT)缩合,得到中间体N-[[2’-(N’-三苯甲基-四氮唑-5-基)-(1,1’-二苯基)]-甲基]-L-缬氨酰氨,然后经正戊酰化得到N-(1-氧戊基)-N-[[2’-(N’-三苯甲基-四氮唑-5-基)-(1,1’-二苯基)-4-基]-甲基]-L-缬氨酰氨。最后在酸性条件下将酰氨水解成羧酸同时脱去四氮唑环的保护基,得N-(1-氧戊基)-N-[[2’-(1H-四氮唑-5-基)-(1,1’-二苯基)-4-基]-甲基]-L-缬氨酸。

该发明避免了反应过程中有可能发生手性位消旋的强碱环境水解酯步骤,具有得到的高光学纯度缬沙坦收率高,无毒性残留物,易于产业化生产,操作简单等优点。

日期:2013年4月3日 - 来自[知识产权]栏目

复乳溶剂挥发法制备氧化苦参碱脂质体

【摘要】  目的 利用复乳溶剂挥发法制备脂质体,并考察其对水溶性药物氧化苦参碱的包封率。 方法 按文献利用高速剪切机制备水相溶有氧化苦参碱的W/O乳剂,再将此乳剂滴入水相中二次乳化并继续快速搅拌、挥干溶剂即得。并且采用超滤HPLC法测定了脂质体的包封率。 结果 复乳法制备的脂质体包封率较低,绝大多数情况小于10%,当水化液的离子强度较高时包封率在15%左右,样品低温储存2周后有药物晶体析出。 结论 采用复乳法制得氧化苦参碱脂质体包封率较低,与文献报道的情形相符。

【关键词】  脂质体;复乳溶剂挥发法;氧化苦参碱;大豆磷脂;包封率

Preparation of liposomal oxymatrine by multiple emulsificationsolvent evaporation method

  WANG Hao1,GU Jijin2,DENG Yingjie3

  (1.School of Pharmacy,Central South University,Changsha 410013,China;2.School of Pharmacy,Fudan University,Shanghai 201203,China;3.School of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China)

  【Abstract】 Objective To prepare liposomal oxymatrine by multiple emulsificatingsolvent evaporating process.Methods W/O emulsion that contained oxymatrine was prepared by employing highspeed homogenizer.Liposomal oxymatrine was obtained by adding the W/O emulsion into aqueous media dropwise and stirring the mixture vigorously until the organic solvent was evaporated thoroughly.10 times higher of phospholipid concentration was used compared to that reported in literature.UltrafiltrationHPLC method is adopted to determine the encapsulation efficiency of oxymatrine liposome.Results The encapsulation efficiency was rather low by employing multiple emulsificating and solvent evaporating method that it was below 10% in most cases but some cases around 15%.Drug crystal could be found after the samples were stored 4 ℃ for 2 weeks.Conclusion The result is accordant with the reports in references that watersoluble small molecular compound could be difficultly loaded in liposome with high encapsulation efficiency by the method adapted.

  【Key words】 liposome;multiple emulsificationsolvent evaporation;oxymatrine;soybean phospholipids;encapsulation efficiency

  氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)是从中药苦参和苦豆子中提取的有效成分,是近年来临床治疗肝炎效果较好的药物之一[1],国内已广泛用于乙型肝炎的临床治疗[2]。但是该药全身分布,消除半衰期短,而且该药在肝脏中的有效血药浓度持续时间短[34]。脂质体作为一种药物载体,可以被动靶向到肝脾等网状内皮系统丰富的器官,从而较多地分布于肝脏,提高药物在肝脏中的浓度,且能维持药物的释放时间[5]。OMT在水中的溶解度大于1(g·m)/L,是一个亲水性很强的弱碱性小分子药物,其结构式见图1.

  文献介绍的复乳法制备的脂质体采用的磷脂浓度比较低,且药脂比亦较低[6],本研究试用较高药脂比(mol:mol,1:1)和较大原料药浓度(约16.1 mg/ml,8.05 mg/ml)来制备氧化苦参碱脂质体,采用粒度测定仪分析有机溶剂挥发后其粒径大小的分布情况,并采用超声法对其粒径进行了进一步的减小。并且通过微孔滤膜超滤HPLC法对其包封率进行了测定。

  1 仪器与试药

  高效液相色谱仪(日本Shimadzu公司);扫描电子显微镜(日本Hitachi公司);微粒粒度测定仪(英国Beckman公司);高速均质机(广州,UITRA TURRAX,T18Basic);DZDW2型电子恒温不锈钢水浴锅(上海路达实验仪器有限公司);Amicon 8010 搅拌超滤器(美国Milipore公司);PHS2C型精密酸度计(上海雷磁仪器厂);Adventure AR1140电子天平(美国Ohaus 公司);DF10B集热式恒温磁力搅拌器(浙江省乐清县乐成仪器厂)。

  氧化苦参碱(纯度>98%,连云港正大天晴有限公司);超滤膜(截流分子量10万,上海亚东核极树脂有限公司),氯仿(分析纯,天津市博迪化工有限公司);甲醇(色谱纯,天津康科德有限公司);Triton100(北京化工厂)。

  2 方法与结果

  2.1 复乳溶剂挥发法制备氧化苦参碱脂质体

  根据文献报道,复乳溶剂挥发法是少量的缓冲盐与多量的有机溶剂进行第一次乳化,形成W/O型反胶团,减压除去一部分或完全不除去溶剂,然后加入大量的缓冲液进行第二次乳化,形成W/O/W的复乳系统[67],并进行除去溶剂最终得到脂质体的过程。本实验欲考察2次乳化除溶剂时,生理盐水和蒸馏水的使用以及不同水浴温度对氧化苦参碱脂质体包封率的影响。

  2.1.1 油相及水相储备液的制备 称取83 mg注射用大豆磷脂,胆固醇20.8 mg,配制10 ml氯仿溶液;称取80.5 mg注射用大豆磷脂,胆固醇20.1 mg,配制10 ml 乙醚溶液;称取1 600 mg氧化苦参碱,用去离子水定容至10 ml.

  2.1.2 脂质体的制备与形态观察 取溶有注射用大豆磷脂和胆固醇的氯仿储备溶液,乙醚储备溶液各1 ml.溶有氧化苦参碱的去离子水溶液各1 ml,其中大豆磷脂︰氧化苦参碱︰胆固醇(w:w:w)=4:1:1,置于10 ml的小试管中,在7 500 r/min均质机下均质5 min,得W/O型乳剂,立即将该W/O乳剂倾入水浴温度为40 ℃,装有10 ml生理盐水的圆底烧瓶中,搅拌2 h除去有机溶剂,得氧化苦参碱脂质体。

  按同样方法操作,水化介质改为20 ml的生理盐水、10 ml纯净水、20 ml纯净水制备脂质体,每组3份。在45 ℃、55℃下,上述水化介质条件下制备脂质体,每样也制备3份。

  此外,另取溶有大豆磷脂和胆固醇的氯仿溶液1 ml置茄形瓶中,在50 ℃条件下真空除去有机溶剂使脂质材料在瓶壁内形成均匀的薄膜。40 ℃条件下5 ml氧化苦参碱储备液水化4 h,将所得脂质体粗分散液分别通过2次0.8 μm,2次0.45 μm,3次0.22 μm,3次0.1 μm微孔滤膜进行整粒。

  以45 ℃,10 ml生理盐水条件下制备所得脂质体混悬液为例,观察脂质体的微观形态并对其粒度分布进行了测定。在4 ℃储存2周后经过扫描电镜观察发现有颗粒状脂质体的形成(图2),图中板状晶体可能是高浓度的氧化苦参碱在干燥时析出所致。

  采用Beckman粒度测定仪对由复乳溶剂挥发法制备所得脂质体粗混悬液体积径分布的测定结果(见图3A)。未被超声时,得到的脂质体粒度分布非常宽且不均一,甚至有10~30 μm的大粒子出现。而超声过后的脂质体粒度分布变窄且粒径有较大幅度的减小,较大粒子在体系中所占比重也相应减小。同时,以采用薄膜水化分散微孔滤膜挤出法制得的粒径分布较为均一的脂质体(图3B)作为对照说明。

  2.2 氧化苦参碱脂质体包封率的测定方法

  2.2.1 氧化苦参碱含量测定HPLC条件 色谱柱:DiamonsilODS 柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),接预柱,流动相:甲醇︰磷酸盐缓冲液(含50 mm磷酸,三乙胺调pH 3.5)(20∶80,v∶v),波长:220 nm,流速:0.8 ml/min,柱温:室温,进样量:20 μl.

  2.2.2 脂质体中总药量的测定方法 脂质体中总药量的测定方法采用TritonX100破坏法测定,具体操作参见文献[8]。

  2.2.3 方法回收率考察 采用复乳溶剂挥发法制备空白脂质体,并取空白脂质体0.2 ml各3份置10 ml容量瓶中,分别加入9.85 mg/ml的氧化苦参碱药物溶液0.16、0.20、0.24 ml,得到3种不同浓度药物的脂质体混悬液。向各样品中滴加10%曲拉通溶液,超声溶解至出现澄明溶液,加入蒸馏水定容至刻度。同法不加入脂质体,制备上述3种浓度的药物溶液,液相色谱法测定上述样品溶液的色谱峰峰面积。3次实验的回收率分别为98.1%、97.5%、99.3%.可见,TritonX100可以很好地破坏脂质体,使药物完全从脂质体中溶解出来,同时TritonX100与药物之间无相互作用,对药物含量测定无影响,可以用于测定脂质体中药物含量。回收率计算公式见下:

  Recovery rate = AOMT in limsomes/ AOMT in solution × 100%

  2.3 复乳溶剂挥发法制备氧化苦参碱脂质体包封率结果

  不同水化温度、水化体积和水化介质下的包封率见表1.表1 不同水化温度、水化体积和水化介质下的包封率(n=3)

  3 讨论

  通过扫描电子显微镜发现采用复乳溶剂挥发法可以制得脂质体,但采用此法制备氧化苦参碱脂质体时,由于药物在水中的溶解度较大,并且该制备方法在水化即挥发有机溶剂过程中时间较长,这时会有大量药物从脂质体中渗漏进入外水相,导致其中药物包封率很低。

  去离子水水化过程中,在45 ℃时的包封率可达到15%以上,而生理盐水水化组的包封率普遍较低,这可能是由于包封进脂质体内水相的氧化苦参碱由于高浓度的盐溶液使其在水中析出小结晶的结果。

  复乳法很难制备成功单位体积高载药量脂质体,表现为药物的包封率较低,绝大多数条件下制得的样品包封率小于10%,当溶液中离子强度较大时,其包封率可达到15%左右,说明采用复乳法制备单位体积高载药量氧化苦参碱脂质体有一定的难度。包封率相对较高的制备工艺所得样品在25 ℃存放1个月后有药物结晶析出。

  文献报道的氧化苦参碱HPLC测定方法较多,其中包括制剂中[910]、溶出介质中[11]及血浆样品中[12]氧化苦参碱的检测,我们采用了杜松等[13]报道的脂质体中氧化苦参碱的测定方法,该法符合HPLC方法学要求,并且具有HPLC进样样品制备简单的特点。并且,采用已有报道的超滤法分离载药脂质体与外水相中的游离药物,测定药物的包封率。

  Tomoko Nii等曾报道采用此法来制备水溶性小分子药物5氟尿嘧啶的脂质体,并研究了该法中各种制备因素对药物包封率的影响[6],发现采用该法制备的脂质体对水溶性小分子药物包封率较低,约在15%以下。本实验结果与文献报道的情形较为相符[6]。我们认为王汀等[14]报道的复乳溶剂冻干法可能是提高氧化苦参碱脂质体包封率的一条途径。

【参考文献】
    [1] 李第灶,潘显道,吴松.苦参碱类生物碱研究进展[J].医学研究通讯,2005,34(1):6566.

  [2] 吴智慧,黄绳武.苦参生物碱的药理研究进展[J].中南药学,2006,4(5):380382.

  [3] 王毅,孟根达莱.氧化苦参碱在乙肝患者体内的药动学[J].中国临床药学杂志,2003,12(4):228229.

  [4] 王毅,孟根达莱.氧化苦参碱注射液的人体药代动力学[J].中国临床药理学杂志,2003,19(4):301305.

  [5] 邓英杰.脂质体技术(现代药物制剂技术丛书)[M].北京:人民卫生出版社,2007:77.

  [6] Tomoko Nii,Fumiyoshi Ishii.Encapsulation efficiency of watersolution and insoluble drugs in liposomes prepared by the microencapsulation vesicle method[J].International Journal of Pharmaceutics,2005,298(1):198205.

  [7] 陆彬.药物新剂型与新技术[M].北京:人民卫生出版社,2005:130.

  [8] 王浩,邓英杰,韩林林.pH梯度载药法制备氧化苦参碱混合膜材脂质体[J].中国药剂学杂志(网络版),2008,6(2):5054.

  [9] 向柏,孙英华.RPHPLC法测定苦参总碱中苦参碱、氧化槐果碱和氧化苦参碱[J].中草药,2005,36(12):18131815.

  [10] 曾令高.HPLC测定苦参碱葡萄糖注射液中苦参碱的含量及有关物质[J].华西药学杂志,2004,19(4):290291.

  [11] 周自桂,郭萍.高效液相色谱法测定苦参素分散片的含量[J].江苏药学与临床研究,2005,13(3):2224.

  [12] 费艳秋,安富荣.HPLC法同时测定人血浆中苦参碱和氧化苦参碱含量[J].中国药房,2001,12(8):479.

  [13] 杜松.氧化苦参碱脂质体的研究[D].沈阳:沈阳药科大学博士学位论文,2004.

  [14] Ting Wang,Wenxiu Li,Yingjie Deng,et al.Preparation of submicron unilamellar liposomes by freezedrying double emulsions[J].Biochim Biophys Acta,2006,1758:222231.

日期:2013年2月27日 - 来自[2010年第5卷第1期]栏目
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顶空气相色谱法测定溴芬酸钠有机溶剂残留量

【摘要】  目的 建立溴芬酸钠原料中二氯甲烷、甲苯、1,2-二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、乙醇残留量测定方法。方法 采用顶空气相色谱法测定。结果 待测物均能得到很好的分离,峰面积与浓度呈良好线性关系,精密度良好。结论 该方法可用于测定溴芬酸钠原料中有机溶剂残留量。

【关键词】  溴芬酸钠;有机溶剂残留量;气相色谱法;顶空进样

【Abstract】 Objective To establish a method for detection of dichloromethane, 1,2-dimethoxyethane, toluene, ethyl acetate and ethanol in bromfenac sodium.Methods The residual solvent in bromfenac sodium was determined by GC with headspace sample injection.Results The solvent could be completely separated and the calibration curves of each solvent showed good linear relationship within a certain range.Conclusion The method is accurate and reliable. It can be applied in detection of dichloromethane, 1,2-dimethoxyethane, toluene, ethyl acetate and ethanol in bromfenac sodium.

  【Key words】 bromfenac sodium; organic residual solvents; GC; headspace sample injection

  溴芬酸钠原为美国Wyeth-Ayerst公司开发的口服非甾体抗炎药,于1997年在美国上市,25mg/粒胶囊,用于治疗锐痛,疗效堪比吗啡类镇痛药。后来,由于在临床使用过程中出现因长期用药产生的肝脏副作用,由于难以控制病人因强烈疼痛而超疗程长期服用溴芬酸钠胶囊,开发商于1998年自愿将该药撤出市场。后来日本Senju公司将溴芬酸钠制成0.1%滴眼液,商品名ブロナックR点眼液(BRONUCKR OPHTHALMIC SOLUTION),5ml/支,每日2次用于外眼部及前眼部的炎症性疾病的对症治疗:眼睑炎、结膜炎、巩膜炎(包括表层巩膜炎)、术后炎症等,于2000年在日本上市。在美国现已以商品名XIBROMTM(含溴芬酸0.09%)于2005年3月上市,用于治疗白内障术后眼部发炎、疼痛及畏光症状。

  1 仪器与试药

  Agilent 6890N气相色谱仪;甲苯(色谱纯99.99%)、二氯甲烷(色谱纯99.96%)、乙酸乙酯(色谱纯99.99%)、乙醇(色谱纯99.99%)均为国药化试集团有限公司提供;1-2-二甲氧基乙烷(色谱纯99.7%)fluka公司提供。溴芬酸钠由扬子江药业集团有限公司提供(批号080709、080730、080820)

  2 试验方法与结果[2,3]

  2.1 色谱条件与系统适用性 色谱条件:色谱柱为DB-35型毛细管柱,顶空进样,顶空平衡温度为80℃,平衡时间30min;进样口温度180℃;柱温采用程序升温:以40℃保持6min,然后以15℃/min的速度上升至150℃,保持5min;采用氢火焰离子化检测器(FID),检测器温度为250℃;分流比为10:1。系统适用性试验:分别精密称取二氯甲烷、甲苯、1,2-二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、乙醇对照品适量,加水稀释制成每1ml中含60μg 、89μg、10μg、500μg、500μg 的混合溶液,作为对照品溶液,同时制备相同浓度的单标溶液。分别取空白溶剂(水)、单标溶液及对照品溶液1ml,置于20ml顶空瓶中,于上述色谱条件下进样,结果(见图1)表明,各溶剂在上述色谱条件下均能达到有效分离,且空白溶剂无干扰。1-乙醇 2-二氯甲烷 3-乙酸乙酯 4-1,2-二甲氧基乙烷 5-甲苯

  图1 系统适用性试验色谱图2.2 线性范围 精密称取二氯甲烷、甲苯、1,2-二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、乙醇适量置同一容量瓶中,分别加水稀释制成每1ml中含有0.3mg、0.445mg、0.05mg、2.5mg、2.5mg的溶液。分别精密量取0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml置五5个10ml量瓶中,以水稀释至刻度,摇匀,在前述色谱条件下分别进样,记录色谱图,量取峰面积。以峰面积A为纵坐标,浓度C(mg/ml)为横坐标进行线性回归。结果显示,二氯甲烷在15~120μg/ml范围内呈良好线性关系(r2=0.998),甲苯在22.25~178μg/ml范围内呈良好线性关系(r2=0.998),1,2-二甲氧基乙烷在2.5~20μg/ml范围内呈良好线性关系(r2=0.993),乙酸乙酯在0.125~1.0mg/ml范围内呈良好线性关系(r2=0.9996),乙醇在0.125~1.0mg/ml范围内呈良好线性关系(r2=0.996)。

  2.3 进样精密度 精密量取“线性范围测定”项下的3号溶液2ml,加水稀释至10ml,于上述色谱条件下连续进样6次,记录色谱图。待测物峰面积的RSD分别为二氯甲烷0.74%、甲苯0.71%、1,2-二甲氧基乙烷3.07%、乙酸乙酯2.64%、乙醇3.28%,表明上述各溶剂在前述色谱条件下进样精密度良好。

  2.4 最低检测限 取甲苯、1,2-二甲氧基乙烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇加水溶解并逐级稀释后于上述色谱条件下测定,按信噪比为3:1计算最低检测限。结果分别为甲苯0.61μg、1,2-二甲氧基乙烷0.218μg、二氯甲烷0.484μg、乙酸乙酯0.404μg、乙醇8.096μg。

  2.5 样品测定 分别精密称取二氯甲烷、甲苯、1,2-二甲氧基乙烷、乙酸乙酯、乙醇适量,加水稀释制成每1ml中含60μg 、89μg、10μg、500μg、500μg 的溶液,作为对照品溶液;另精密称取本品3批样品各1.0g,置10ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各1ml,置20ml顶空瓶中,于上述色谱条件下进样,记录色谱图。按外标法以峰面积计算,即得。结果见表1。表1 3批样品残留溶剂测定

  3 讨论

  及小结本文所建立的方法准确、可靠,可用于溴芬酸钠原料中甲苯、1,2-二甲氧基乙烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇残留量的检测,对本品质量控制和使用安全有非常重要的意义。

【参考文献】
    1 国家药典委员会.中国药典,二部.北京:化学工业出版社,2005,Vol Ⅱ.

  2 The ICH steering committee.药品注册的国际技术要求.北京:人民卫生出版社,2001,343.

  

日期:2011年6月29日 - 来自[2009年第9卷第8期]栏目
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