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Mol Psych:减缓老年痴呆基因被分离

科学家们确定了9个基因形成的网状物对阿尔茨海默病的发病起着非常重要的作用。

澳大利亚国立大学首席研究员Mauricio Arcos-Burgos说,这一发现可以帮助科学家开发新疗法用来延缓疾病的发作。

在哥伦比亚一项家族研究中,通过对5000人的研究,科学家们发现了延迟疾病发展的基因。

“如果你能找出怎样减缓该病的方法,就会产生深远的意义。”约翰科廷医学研究学院(JCSMR) 医学遗传学家Arcos-Burgos副教授说。

“我认为推迟疾病的发病比完全阻止疾病发生将更有可能实现。即使我们推迟发病一年,这将意味着在2050年时可阻止九百万人发病。”

阿尔茨海默氏症影响世界各地约3500万人,预计到2050年会影响85分之一的人。

哥伦布家族受到一种遗传性阿尔茨海默氏症的困扰。它们是对抗疾病的唯一一种独特的资源,因为他们生活在哥伦比亚西部山区一个特定地区的强大且紧密的家族。

美国国立卫生研究所已经把1.7亿美元用于治疗阿尔茨海默氏症,这些费用将在这个家族中被用来进行测试。

Arcos-Burgos副教授和他的研究组采取了不同的方法研究了这个家族老年痴呆症的发病年龄,而不是在以后的生活中试图治疗症状的发展,因为即使在20岁之前也可以观察到个体大脑的变化。

研究组与家族合作能够分析环境因素并跟踪他们阿尔茨海默病的遗传易感性。

研究组能够隔离阿尔茨海默氏症中的9个基因,其中一些基因延迟发病17年,而其它一些基因可推进其进程。这项研究发表在《分子精神病学》。

日期:2015年12月23日 - 来自[技术要闻]栏目
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Gynecol Oncol&Mol Cancer Ther:阻击卵巢癌生长的阿喀琉斯之踵

近日,加州大学圣地亚哥分校医学院生殖医学系教授David D. Schlaepfer博士带领下的一组科学团队报告:小分子抑制剂抑制粘着斑激酶(FAK)能选择性预防卵巢癌细胞的生长。

这项发现发表在Gynecologic Oncology和Molecular Cancer Therapeutics杂志上。卵巢癌是女性癌症死亡的首要原因。平均而言,每年美国,超过21,000名妇女诊断患有卵巢癌,14,270名患者死亡。许多妇女疾病会缓解,但癌症的复发率超过75%,这就提示需要新的治疗方法。

卵巢癌细胞通过一个独特的机制,即通过涉及小簇肿瘤细胞(称为球体)的生存在妇女腹膜间隙内的扩散,Schlaepfer说:我们的研究表明,FAK信号功能在肿瘤细胞存活信号网络中发挥中心作用。

第一项研究发表在Gynecologic Oncology杂志上,第一作者Nina Shah医师等发现低水平肿瘤抑制蛋白merlin的卵巢肿瘤细胞,显示对FAK抑制剂高度的敏感性,研究结果支持这一假设:蛋白质生物标志物如merlin可以识别哪些患者可能是最好响应FAK抑制剂疗法。

第二项研究发表在Molecular Cancer Therapeutics,第一作者Isabelle Tancioni博士发现骨桥蛋白生成的信号网络(骨桥蛋白是β-5整合素受体)在细胞与细胞之间的信号传导中发挥作用;FAK控制卵巢癌球体的增长,高水平的β-5整合素和FAK表达与一些卵巢癌患者预后差相关联。因此,高水平的β-5整合素可作为一种新的生物标志物,用于指示具有活化FAK信号的卵巢癌细胞。

Schlaepfer指出,肿瘤的复发和转移是导致大多数卵巢癌有关死亡的原因,新的研究结果支持了在进行中的临床试验,即粘着斑激酶抑制剂是防止卵巢癌进展的新药物。

日期:2014年6月24日 - 来自[肿瘤相关]栏目

Mol Cell:靶向SRPK1酶的抗癌药物

近日,加州大学圣地亚哥医学院的研究人员发现一种新的专门调控RNA剪接的信号转导通路,RNA剪接是指从DNA模板链转录出的最初转录产物中除去内含子,并将外显子连接起来形成一个连续的RNA分子的过程。这一发现发表在2012年6月27日的Molecular Cell杂志上,该研究提示新发现的通路可能是一个新的抗癌药物作用环节。

早期研究证实SRPK1与癌症和其它人类疾病有关。例如SRPK1在调节血管内皮生长因子或血管内皮生长因子刺激血液肿瘤血管生长过程中起着关键作用。在许多癌症如肾脏、乳腺癌肺癌和胰腺癌等中SRPK1都被证实表达失调。

Fu和他的同事在这项新的研究中,发现了SRPK1存在于一个重要的细胞信号转导通路中,SRPK1在PI3K-Akt通路中发挥核心作用。

 

研究人员认为SRPK是疾病干预和治疗的一大新靶标。因为其核心作用,并且易被控制,抑制其活性可以有效抑制血管形成。

日期:2012年6月28日 - 来自[肿瘤相关]栏目
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婴儿重症胆汁淤积综合征1例

【关键词】  胆汁淤积;阴黄;中医治疗;温阳燥湿;活血

 1 病历摘要

  患儿男,82天。2007年9月17日接种疫苗时发现皮肤巩膜黄染,当日即在当地医院住院治疗。入院诊断:黄疸原因待查,婴肝综合征?予抗感染、支持对症处理,两天后转省儿童医院治疗。入院查肝功:总胆红素125.2 μmol/L,直接胆红素66 μmol/L,间接胆红素59.2 μmol/L,总蛋白35.6 g/L,白蛋白27.5 g/L,球蛋白8.1 g/L,谷丙转氨酶24 u/L,谷草转氨酶168 u/L,碱性磷酸酶1 419 u/L,谷氨酰转肽酶216 u/L,总胆固醇5.39 mmol/L。血尿粪常规基本正常,肾功、电解质、心肌酶阴性,乙肝五项及前SI抗原阴性、丙肝抗体(Hcv-Ab)阴性、巨细胞病毒(CMV-DNA)、宫内感染、病原微生物(TORCH)阴性,血培养(-),肝胆ECT示,肝脏增大,胆汁排泄延迟,24 h肝脏影像仍未消退。腹部超声示:肝脏轻度肿大,肝光点粗密,胆囊壁毛糙,脾、双肾未见明显异常。心脏超声示:卵圆孔未闭,动脉导管未闭。彩色血流显示:房水平左向右分流,大血管左向右分流,左室假腱索。头颅CT示:缺血缺氧性脑病恢复期。入院按婴肝综合征治疗,于2007年10月10日出院来我院门诊诊治。出院时查肝功能:总胆红素108.2 μmol/L,直接胆红素55.9 μmol/L,间接胆红素52.3 μmol/L,总蛋白45.4 g/L,白蛋白35.2 g/L,球蛋白10.2 g/L,谷丙转氨酶28 u/L谷草转氨酶169 u/L,碱性磷酸酶

  1 514 u/L,谷氨酰转肽酶217 u/L,总胆固醇3.82 mmol/L。

  10月12日初诊,患儿系第一胎早产,新法接生,出生时无窒息,母乳喂养。出生后第五天发现皮肤有轻微黄染,未治疗。否认有家族史。一般情况较差,呼吸平稳,表情淡漠,营养状况差,体重2.5 kg,全身皮肤及巩膜明显黄染,色晦暗(呈古铜色),前囟稍凹,双目无神,颈软,两肺呼吸音清,心音低钝,心前区可闻及Ⅱ级吹风样杂音。腹软,皮下脂肪<0.4 cm,肝肋下1 cm,质软,脾未及,肠鸣音存在。病理反射未引出。食纳尚可,易吐乳,易惊,大便溏4~5次/d,小便黄,舌质淡苔白滑腻。依据病史及实验室检查,西医诊断:(1)胆汁淤积综合征;(2)营养不良中度;(3)先天性心脏病?(4)缺血缺氧性脑病恢复期。中医辨病辨证:黄疸(阴黄),脾肾两虚。治宜温阳利湿退黄,活血健脾疏肝。方选茵陈术合五苓汤化裁,茵陈6 g,白术6 g,云苓6 g,泽泻2 g,猪苓2 g,车前子(包煎)1 g,薏仁 2 g,丹参2 g,郁金2 g,制附片(先煎)0.5 g,虎杖2 g,白蔻1 g,肉桂0.5 g,红参1 g,肉蔻1 g,蝉身7只,开水煎服温服,并嘱乳母忌口。11月1日复诊,患儿精神状态明显好转,双目有神,食欲增加,大便溏,睡眠安宁,舌淡苔白滑腻。此为正气始复,寒湿初化。继服原方去红参、肉桂、肉蒄、蝉身,加金钱草6 g。12月5日患儿在西安唐都医院行3DMRI胆道水成像示:肝、胰、脾MR平扫未见异常,肝内、外胆管未见显示。肝功:胆红素67.3 μmol/L,直接胆红素40.5 μmol/L,间接胆红素26.8 μmol/L,总蛋白58.7 g/L,白蛋白43.6 g/L,球蛋白15.1 g/L,谷丙转氨酶28 u/L,谷草转氨酶101 u/L,总胆汁酸145.8 μmol/L。院方教授同意胆汁淤积综合征之诊断,建议继续中药治疗。12月7日复诊,患儿神情活泼,面色黄中泛红,全身皮肤黄色减退,巩膜轻度黄染,食欲明显增加,体重增至6 kg。近日感冒鼻塞,舌淡苔白厚滑腻,继守原方加麻黄1 g,桂枝2 g,细辛0.5 g,黄芪6 g,荆芥穗(后下)5 g,苍耳子3 g,莪术2 g,开水煎服。12月21日复诊,黄疸明显消退,鼻塞已通,上方去荆芥穗、苍耳子,加重制附片(先煎)1.5 g。

  2008年2月23日复诊,全身皮肤巩膜无黄染,面色红润,体重8 kg。复查肝功(唐都医院),胆红素7.3 μmol/L,直接胆红素1.4 μmol/L,间接胆红素5.9 μmol/L,总蛋白60.9 g/L,白蛋白43.7 g/L,球蛋白17.2 g/L,谷丙转氨酶27 u/L,谷草转氨酶41 u/L,总胆汁酸3.2 μmol/L。心脏彩超示:二维超声心动图未见异常,多普勒超声心动图大致正常。给予温阳健脾之剂而愈。随访2年一切正常。

  2 讨论

  胆汁淤积综合征是各种原因造成胆汁的生成、排泄及转输障碍,以发病机制和病理命名的一组综合征。这例患儿出生后2个月黄疸逐渐加重,持续不退,体重不增,肝功能损害严重,尤其是直接胆红素高于间接胆红素,总胆汁酸显著增高,符合胆汁淤积的临床表现。

  患儿超声及肝胆ECT均提示无肝外梗阻及胆管扩张;乙肝系列及前SI抗原,HCV-Ab、CMV-DNA,TCRCH-IgM均阴性,肝外胆汁淤积及感染可排除,有可能是肝内胆汁淤积。因条件所限,代谢及遗传学检查未做,因此难以确诊。但肝内胆汁淤积是婴幼儿的一种严重的胆汁淤积肝病,常因病因不清,现代医学尚缺乏特效治疗,半数患儿可发展成肝硬化,多在2~15岁因肝功能衰竭而死亡。

  此病属中医“胎黄”、“黄疸”范畴,临床以“阳黄”多见。该患儿属“阴黄”。因阳虚之体,湿浊内阻,湿从寒化,寒湿阻滞,肝胆疏泄失常,致胆汁不循常道,溢于肌肤所成。若治疗不当或不及时,日久寒湿凝滞,势必影响气血的运行而生痞满,最终出现脏腑功能衰竭的危象。

  阴黄之治,温化利湿退黄为基本治法:方以附子、干姜、肉桂、人参、黄芪温补脾肾,五苓散加车前子、苍术、苡仁健脾利湿,使阳复气化行则寒湿自除,以治其本,除其因。茵陈、金钱草、虎杖利湿退黄以治其标。黄疸的发生与血分相关,故有“黄发自血分”之说。加以阳虚无力助血运,寒湿又碍血运,故方用赤芍、郁金、丹参、莪术、虎杖活血化瘀之品贯穿始终。值得一提的是在上述诸法之外,此例还运用“汗法”以退黄,提高了疗效,缩短了病程。

  现代药理研究证实,人参、黄芪、附子、白术等均能提高网状内皮系统的吞噬功能,升高血清补体和免疫球蛋白含量,促进淋巴细胞转化率和玫瑰花环形成率,促进天然杀伤细胞活性,诱生干扰素和白细胞介素2。附子还有明显的强心、抗心肌缺血缺氧作用。茵陈、金钱草、虎杖均有明显的利胆作用,在增加胆汁分泌的同时,也增加胆汁中胆酸和胆红素的排出量,能显著地降低血清谷丙和谷草转氨酶。丹参、郁金、虎杖、莪术有改善肝脏微循环、促进肝细胞DNA的合成、复制,这对肝细胞再生、恢复肝功能有临床意义,并有抗肝纤维化作用。上述药物还有抗炎、抗病毒作用。

  由于该患儿病因未查清,其治疗机理还有待进一步研究证实。

  

日期:2011年6月29日 - 来自[2009年第6卷第5期]栏目

哈尔滨医科大最新Mol Cells文章

来自哈尔滨医科大学,黑龙江省医学分子生物学重点实验室等处的研究人员通过免疫组化等方面的实验,分析了HIC1和TOB1蛋白的表达和调控,识别出了5个LOH亚区域,为胃癌研究提供了重要的理论资料和临床资料。这一研究成果公布在《Molecules  and  Cells》杂志上。
领导这一研究的是哈尔滨医科大学副校长傅松滨教授,其现任遗传学教授,博士研究生导师,医学遗传学研究室主任,哈尔滨医科大学副校长。主要从事“中国不同人群遗传资源保存及多样性研究”和“双微体的结构与功能研究”。其中参加的《中国不同民族永生细胞库的建立和中华民族遗传多样性的研究》2005年获国家自然科学二等奖。
胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一。胃癌可发生于任何年龄,但总的趋势是发病率随着年龄的增长而上升。青年人所患的胃癌,其恶性程度相对于中老年患者往往更为突出,应予以高度重视。由于胃癌在我国极为常见,危害性大,有关研究认为其发病原因与饮食习惯、遗传因素、胃部疾病等有关。
之前,这一研究小组曾识别了17号染色体上杂合性丢失(loss  of  heterozygosity,LOH)的三个重叠区域——LOH是一种等位基因缺失,表现为与同一个体正常组织相比,肿瘤组织的一个等位基因消失。在这一研究的基础,研究人员通过免疫组化实验,甲基化特异性PCR(methylation-specific  PCR,MSP),以及Western  Blot实验,分析了HIC1和TOB1蛋白的表达和调控,并识别出了5个更小的LOH亚区域:SR1–SR5  (0.54  -  3.42  cM)。
研究表明HIC1和TOB1蛋白沉默是胃癌中的一个常见事件,而且可能会促进这一疾病的发展。这一研究对于胃癌的理论研究和临床研究具有重要意义。
这一研究组集中探讨胃癌相关染色体区域缺失和扩增情况,胃癌相关基因的突变热点及其表达变异,人类原发胃癌差异表达基因及其功能,他们曾在对胃癌形成的变化规律及早期信号的研究中,通过对四种胃癌细胞系Twist蛋白水平的筛选,发现Twist在调控胃癌侵袭和转移中重要作用。
(生物通:万纹)
日期:2011年5月17日 - 来自[肿瘤相关]栏目
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复旦大学在Mol Cell杂志发表最新研究成果

来自复旦大学与哈佛医学院的研究人员近日在Mol  Cell杂志上报道了DNA羟化酶Tet1在小鼠胚胎干细胞中的生物学功能。
DNA甲基化修饰在发育与疾病过程中发挥重要作用,然而DNA羟甲基化修饰的功能还知之甚少。Tet1是一种能够催化甲基化胞嘧啶(5mC)成为羟甲基化胞嘧啶(5hmC)的酶,在小鼠胚胎干细胞中高表达。在施扬和石雨江两位教授的领导下,复旦大学生物医学研究院表观遗传学实验室与哈佛医学院的研究人员密切合作,研究了Tet1在小鼠胚胎干细胞中的生物学功能。该研究揭示了Tet1与5hmC在小鼠胚胎干细胞全基因组范围的分布规律,阐明了Tet1在DNA甲基化与羟甲基化动态平衡及基因表达调控等方面的作用。
Tet家族基因及5hmC修饰的功能研究是当前表观遗传学领域的研究热点之一,在该Mol  Cell论文发表期间,多篇相关研究论文发表于Nature与Genes&Dev等杂志。
哈佛医学院许于飞博士、复旦大学生物医学研究院吴飞珍博士与谭理博士为论文并列第一作者。复旦大学生物医学研究院为该论文的第一完成单位,分时PI石雨江教授为通讯作者。此项研究受到教育部“985”工程与科技部“973”计划的资助。
日期:2011年5月5日 - 来自[克隆与干细胞研究]栏目

空气中甲醛检测方法-----酚试剂分光光度法

  空气中甲醛检测方法-----酚试剂分光光度法

  1.原理

  空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪,嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化成蓝绿色化合物,根据颜色深浅,比色定量。

  2.仪器设备

  2.1气泡采样管或多孔玻板采样管;

  2.2QC-2A大气采样仪或TMP1500电子控时采样器;

  2.310mL具塞比色管;

  2.4723型可见分光光度计。

  3.药品试剂

  本法中所用水均为重蒸馏水或去离子交换水,所用试剂纯度均为分析纯。

  3.1吸收原液(C(MBTH)=0.001g/mL):称量0.050g酚试剂(MBTH),用水溶解后稀释至50mL(贮于

  冰箱中可稳定三天)。

  3.2吸收液(C(MBTH)=0.00005g/mL):量取5mL吸收原液,用水稀释至100mL(采样时,临用现配)。

  3.30.1mol/L盐酸:量取浓盐酸(C摩(mol/L)=C质(%)×ρ总(g/mL)×1000/M(g/mol)=12mol/L)8.33mL,用水稀释

  至1000mL。

  3.41%硫酸铁铵溶液:称量1.0g硫酸铁铵,用0.1mol/L盐酸溶解后稀释至100mL。

  3.5碘溶液(C(1/2I2)=0.1000mol/L):以下两种方法二选其一,若有可能,则优先采取3.5.2的方法。

  3.5.1准确称量40g碘化钾,溶于25mL水中,加12.7g碘,用水溶解后稀释至1000mL(移入棕色瓶

  中,暗处贮存);

  3.5.2外购试剂进行当量换算:精确量取外购碘溶液V取(mL)=100/C摩(mol/L)(BR(1/2I2)浓度C摩(mol/L)见说明书,C摩(mol/L)≥0.1000mol/L),用水稀释至1000mL(移入棕色瓶中,暗处贮存)。

  3.61mol/L氢氧化钠溶液:称量40g氢氧化钠,用水溶解后稀释至1000mL。

  3.70.5mol/L硫酸溶液:量取浓硫酸(C摩(mol/L)=C质(%)×ρ总(g/mL)×1000/M(g/mol)=18mol/L)28mL,缓慢加入水中,冷却后用水稀释至1000mL。

  3.8硫代硫酸钠标准溶液(C(Na2S2O3)=0.1000mol/L):外购试剂(BR(Na2S2O3)浓度C摩(mol/L)见说明书)。

  3.90.005g/mL淀粉溶液:称量0.5g可溶性淀粉,用少量水调成糊状后,加入100mL沸水,并煮沸

  2~3min至溶液透明(标定时,临用现配)。

  3.10甲醛标准贮备溶液(C(HCOH)≈1mg/mL):量取2.8mL含量为36%~38%甲醛溶液,用水稀释至1000mL(实际浓度C(mg/mL)按5.1.1~5.1.10用碘量法标定)。

  3.11甲醛标准溶液(C(HCOH)=1μg/mL)(分析时,临用现配):以下两种方法二选其一,若有可能,则

  优先采用3.11.2的方法。

  3.11.1精确量取甲醛标准贮备溶液V取(mL)=1/C(mg/mL),用水稀释至100mL(此时C(HCOH)=10μg/mL),再精确量取此溶液10.00mL,加5mL吸收原液,用水稀释至100mL(放置30min后,用于配制标准色列管,此溶液可稳定24h);

  3.11.2外购试剂进行当量换算:精确量取外购甲醛标准溶液V取(mL)=500/C(mg/L)(BR(HCHO)浓度C(mg/L)见说明书),用水稀释至50mL,再精确量取此溶液10.00mL,加5mL吸收原液,用水稀释至100mL(放置30min后,用于配制标准色列管,此溶液可稳定24h)。

  3.12甲醛标准样品:精确量取外购甲醛标准样品1.00mL,加1.25mL吸收原液,用水稀释至25mL,(BY(HCHO)浓度C(mg/L)见说明书)

  4.采样

  4.1用一个内装5mL吸收液的气泡吸收瓶或多孔玻板吸收瓶,接上QC-2A型大气采样仪或TMP1500型电子控时采样器,一般以0.5L/min流量采气10L,并记录采样点的温度(t,℃)和气压(p,kPa),按6.3计算标准状态下的采样体积V0,具体参见作业指导ADT/OG011-B.0-2007《室内环境污染物大气采样与验收的要求》。

  4.2采样后的样品在室温下,于24h内按5.3.1~5.3.5测定完毕。

  5.操作步骤

  5.1甲醛标准贮备溶液的标定(碘量法)

  5.1.1精确量取20.00mL待标定的甲醛标准贮备溶液,置于250mL碘量瓶中。

  5.1.2加入20.00mL碘溶液(C(1/2I2)=0.1000mol/L)和15mL1mol/L氢氧化钠溶液,摇匀后放置15min。

  5.1.3加入20mL0.5mol/L硫酸溶液,摇匀后放置15min。

  5.1.4用硫代硫酸钠标准溶液滴定,至溶液呈现浅黄色时,加入1mL0.005g/mL淀粉溶液继续滴定至

  恰使蓝色褪去为止,并记录所用硫代硫酸钠标准溶液体积(V2-1,mL)。

  5.1.5重复5.1.1~5.1.4,并记录所用硫代硫酸钠标准溶液体积(V2-2,mL)。

  5.1.6精确量取20.00mL水,置于250mL碘量瓶中。

  5.1.7重复5.1.2~5.1.4,并记录所用硫代硫酸钠标准溶液体积(V1-1,mL)。

  5.1.8重复5.1.6~5.1.7,并记录所用硫代硫酸钠标准溶液体积(V1-2,mL)。

  5.1.9若两次平行滴定误差(|V2-2-V2-1|或|V1-2-V1-1|)大于0.05mL,重复5.1.1~5.1.9。

  5.1.10按6.1计算甲醛标准贮备溶液浓度C(mg/mL)。

  5.2标准曲线的绘制

  5.2.1取10mL具塞比色管9支,用甲醛标准溶液和吸收液按表1精确量取,制备标准系列。

  5.2.2各管中,加入0.4mL1%硫酸铁铵溶液,摇匀后放置15min。

  5.2.3调节723型可见分光光度计波长(λ)至630nm处,用1cm比色皿,以水作为参比调100%T,测定各管溶液的吸光度Am(m=0,1,2,…8)。

  5.2.4以甲醛的质量浓度Cm(μg/mL)(m=0,1,2…8)为横坐标Xm,吸光度Am为纵坐标Ym,按6.2计算标准曲线回归方程,绘制标准曲线,得出回归线斜率K(吸光度×mL/μg),并以1/K(吸光度×mL/μg)作为样品测定的计算因子Bc(μg/吸光度×mL)。

  5.2.5取1mL甲醛标准样品于10mL具塞比色管中,加4mL吸收液,并按5.3.2和5.3.3操作后,按下式CHCHO测=(A测-B)×Bc×κ计算标准样品测量浓度C(mg/L)HCHO测,若相对误差τ(|CHCHO测-CHCHO|/CHCHO)不超过5%,则采用该标准曲线,否则重复5.2.1~5.2.5。

  表1甲醛标准系列

  管号012345678

  标准溶液,mL00.100.200.400.600.801.001.502.00

  吸收液,mL5.04.94.84.64.44.24.03.53.0

  质量浓度,μg/mL00.020.040.080.120.160.200.300.40

  (注:甲醛标准曲线斜率的影响因素

  ①标准溶液的配制:稀释倍数越低,斜率越高;

  ②制备标准系列:先加吸收液后加甲醛标准溶液,然后立即混匀;

  ③环境条件(温度、湿度与气压):温度越高、湿度越高、气压越大,斜率越高;

  ④移液管移液的操作:要统一(自上而下准确放量或准确量取后放下),且移液前用溶液润洗3次;

  ⑤配制溶液的操作:先用容量瓶定容(双眼平视溶液凹液面底部与容量瓶刻度线相切,且内壁上不能挂水珠),再充分摇匀;

  ⑥系统误差:在重复条件下对同一测量进行无限多次测量所得结果的平均值与被测量的真值之差;

  ⑦随机误差:测量结果与在重复性条件下对同一测量进行无限多次测量所得结果的平均值之差。)

  5.3样品的测定

  5.3.1采样后至实验室,将各样品溶液充分摇匀后,分别用少量吸收液洗涤吸收瓶,并全部转入10mL具塞比色管中,使总体积合并为5mL。

  5.3.2在每批样品测定的同时,于10mL具塞比色管中按表1制备0号管,作为试剂空白。

  5.3.3按5.2.2和5.2.3操作,测定试剂空白的吸光度A0和各样品溶液的吸光度An(n=1,2,3…)(按样品编号由小到大)。

  5.3.4若有样品溶液的吸光度An超过标准曲线的范围,可用试剂空白来稀释该样品,并按下式计算样品稀释倍数κ=V稀释后/V未稀释,否则取κ=1。

  5.3.5按6.4计算样品浓度Cn(mg/m3)(n=1,2,3…)。

  6.结果计算

  6.1甲醛标准储备溶液浓度的计算公式:

  C=(V1-V2)×C摩×15/20

  C-甲醛标准储备溶液的质量浓度,mg/mL;

  V1-试剂空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积,mL,V1=(V1-1+V1-2)/2;

  V2-甲醛标准储备溶液消耗硫代硫酸钠溶液的体积,mL,V1=(V2-1+V2-2)/2;

  C摩-硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度,mol/L;

  15-甲醛的当量;

  20-所取甲醛标准储备溶液的体积,mL。

  6.2标准曲线回归方程的表达式:

  Ym=KXm+B,R=…

  横坐标Xm-甲醛的质量浓度Cm(m=0,1,2…8),μg/mL;

  纵坐标Ym-吸光度Am(m=0,1,2…8);

  K-回归方程的斜率,吸光度×mL/μg;

  B-回归方程的截距,吸光度;

  R-回归方程的回归系数(若R<0.999,重复5.2.1~5.2.4)。

  6.3标准状态下采样体积的计算公式:

  V0=Vt×[T0/(T0+t)]×P/P0

  V0-标准状态下的采样体积,L;

  Vt-采样体积(为校准流量υ校(L/min)与采样时间t(min)的乘积:Vt=υ校×t),L;

  T0-标准状态下的绝对温度,273K;

  t-采样点的气温,℃;

  P0-标准状态下的大气压,101kPa;

  P-采样点的大气压力,kPa。

  6.4样品浓度的计算公式:

  Cn=(An-A0)×Bc×V×κ/V0

  Cn-空气中甲醛的质量浓度(n=1,2,3…),mg/m3;

  An-样品溶液的吸光度(n=1,2,3…);

  A0-试剂空白的吸光度;

  Bc-由5.2.4得到的计算因子,μg/吸光度×mL;

  V-甲醛吸收液的体积(一般为5mL),mL;

  κ-由5.3.4得到的样品稀释倍数;

  V0-由6.3计算的标准状态下的体积,L。

  7.备注

  7.1测量范围:5mL样品溶液中含0.1~1.5μg甲醛(当标准采样体积为10L时,可测浓度范围为0.01~0.15mg/m3)。

  7.2灵敏度:5mL吸收液中含有1μg甲醛,吸光度A约为0.357(即约为2.80μg/吸光度)。

  7.3检测下限(MDL):0.1μg/5mL甲醛(当采样体积为10L时,最低检出浓度为0.01mg/m3)。

  7.4干扰和排除:20μg酚、2μg醛以及二氯化氮对本法无干扰;二氧化硫共存时,使测定结果偏低,

  因此对二氧化硫干扰不可忽视,可将气样先通过硫酸锰滤纸过滤器,予以排除。

  7.5方法的精密度(再现性):当样品中甲醛含量为0.1,0.6,1.5μg/5mL时,重复测定的变异系数分别为5%、5%、3%。

  7.6方法的准确度(回收率):当样品中甲醛含量0.4~1.0μg/5mL时,样品加标准样品的回收率为93%~101%。

  相关文件

  GB50325-2001《民用建筑工程室内环境污染物控制规范6.0.6》(2006年版)

  GB/T18204.26-2000《公共场所空气中甲醛测定方法酚试剂分光光度法》

  BR(HCHO)《甲醛标准溶液证书》

  BY(HCHO)《环境标准样品证书-甲醛》

  根据《室内环境质量及检测标准》中的检测环境要求,目前在测定甲醛常采用以下6种检测方法,分别是:

  1、测定工业废气和环境空气中甲醛的乙酰丙酮分光光度法,本法使用与树脂制造、涂料、人造纤维、塑料、橡胶、染料、制药、油漆、制革等行业的排放废气以及做医药消毒、防腐、熏蒸时产生的甲醛蒸汽测定。测量范围在0.5~800mg/m3。

  2、测定居住区和公共场所空气大气中甲醛浓度的AHMT(4-氨基-3-联氮-5-硫基-1,2,4-三氮杂茂)分光光度法。测量范围为0.01~0.16mg/m3.

  3、适用于公共场所空气中甲醛浓度的酚试剂(MBTH)分光光度法,测量范围为0.01~0.15mg/m3。

  4、气相色谱法

  5、用于测定纺织品中游离甲醛含量的水萃取法。适用为游离甲醛含量为20mg/kg到3500mg/kg之间的纺织品。

  6、用于测定纺织品中释放的甲醛含量的蒸气吸收法。适用为游离甲醛含量为20mg/kg到3500mg/kg之间的纺织品。

  目前,甲醛气体的检测方法按精确度划分,大致可分为两种,其一种为精密度测定法(仪器分析法),包括世界卫生组织推荐的高效液体色谱法(HPLC),气相色谱法(DNPH-GC法)及分光光度法等;其二为简易测定法,该法主要用于快速检测,其精确度要求不高。主要有电法学方法,可以显示测定数据,以及检测管方式和测定纸方式,即通过检测气体与指示剂发生法学反应而表现出的颜色变化来测定检测气体浓度。

 

日期:2010年5月29日 - 来自[色谱分析实例]栏目
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双花对人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

【摘要】  目的 探讨双花对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。 方法 采用MTT法测定双花对人A375黑素瘤细胞活力的影响,以NaOH裂解法测定黑素合成,并与氢醌的结果进行比较。 结果 100μmol/L、500μmol/L和1 000μmol/L双花对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性抑制作用,500μmol/L及1 000μmol/L双花与对照组相比有显著差异(P<0.01)。 结论 双花对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用。

【关键词】  双花 黑素细胞 酪氨酸酶

色素障碍性疾病是临床上常见的皮肤病之一,目前对色素性疾病的机理还不十分清楚,人体皮肤颜色各不相同,与种族、年龄、性别、外界环境以及某些疾病等因素密切相关,其中黑素细胞产生的黑素是决定皮肤颜色的主要因素。双花是一种中药单体,傅国强等研究认为其在细胞外对酪氨酸酶有较强的抑制作用[1]。本研究研究双花对于人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。

  1  材料与方法

  1.1  材料  双花购自中国药品生物制品检定所,纯度>99%;氢醌、中性酶、胰酶、二甲基亚砜(DMSO)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)均购自Sigma公司;小牛血清(杭州四季青公司);高通量多功能微板测试系统(德国BMG),图像信号采集与分析系统(德国LEICA公司),倒置显微镜,无菌工作台等。

  1.2  方法

  1.2.1  人A375黑素瘤细胞株  人A375黑素瘤细胞株购自中国医学科学院基础所细胞中心。细胞以1×106个/ml密度在37℃,5% CO2孵箱中进行培养传代,细胞增殖良好至80%左右融合时进行实验。

  1.2.2  双花对人A375黑素瘤细胞增殖的影响  MTT法选择对数生长期细胞,将人A375黑素瘤细胞按1×104/孔接种于96孔板,在37℃及5%CO2下孵育24h,去上清液,每孔加入含一定药物浓度的培养基200μl,双花设6个浓度(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L、400μmol/L、1 000μmol/L),每一浓度设4个复孔,对照组直接加培养基200μl,空白孔不加细胞,只加培养基,继续孵育72h,每孔加入5g/L的MTT溶液20μl,在37℃及5%CO2下孵育4h,弃上清液,每孔加DMSO 150μl,振荡10min,在酶标仪490nm波长(参考波长620nm)下测量各孔吸光度值,细胞增殖率=[(待筛物各浓度平均吸光度值-空白组平均吸光度值)/(对照组平均吸光度值-空白组平均吸光度值)]×100%。

  1.2.3  酪氨酸酶活性测定实验[2]  将人A375黑素瘤细胞按1×104/孔接种于96孔板,在37℃及5%CO2下孵育24h,去上清液,每孔加入含不同浓度药物培养基100μl,对照组只加培养基,空白组不加细胞,2μmol/L氢醌组作为阳性对照,每组重复3次,根据MTT实验结果选取3个浓度(100μmol/L、500μmol/L、1 000μmol/L),每隔1d换1次培养基,继续孵育6d后用不含Ca2+和Mg2+的PBS洗1次,然后每孔加入0.5%Triton-X溶液100μl,超声振荡30min后,每孔加入10mM/L左旋多巴溶液50μl,于37℃下3h,在酶标仪490nm波长(参考波长620nm)下测量各孔吸光度值,酪氨酸酶活性影响率=[(待筛物组平均吸光度-空白组平均吸光度)/(对照组平均吸光度-空白组平均吸光度)]×100%。

  1.2.4  黑素含量的测定[3]  将人A375黑素瘤细胞接种于60mm直径的培养皿中,在37℃及5%CO2下孵育24h,去上清液,分别加入含不同浓度药物的培养基,对照组只加培养基,2μmol/L氢醌组作为阳性对照,每组重复3次,双花根据MTT实验结果选取3个浓度(100μmol/L、500μmol/L、1 000μmol/L),每隔1d换1次培养基,继续孵育7d后用0.25%胰酶消化收获细胞,PBS洗2次,每组分别计数细胞,分别加入0.2ml双蒸水使细胞悬浮1min,然后加入500μl乙醇和500μl乙醚的混合物室温下放置15min,置离心机中以3 000转/min离心5min,去上清液,沉淀中加入1mol/L NaOH(含10%DMSO)1ml,于80℃下30min,加入4ml的双蒸水将NaOH稀释成0.2mol/L,分光光度计下测量475nm(参比波长620nm)的吸光度,黑素含量=[(待筛物组吸光度/细胞数的平均值)/(对照组吸光度/细胞数的平均值)]×100%,重复4次。

  1.3  统计学处理  全部数据采用SPSS统计软件进行两因素方差分析检验。

  2  结果

  2.1  双花对细胞活力的影响  MTT实验结果显示双花浓度在(0.1~1 000μmol/L)对人A375黑素瘤细胞增殖无影响(P>0.05),见表1。

  2.2  双花对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响  结果表明(表2),双花对于人A375黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性呈剂量依赖性抑制作用,双花组与阳性对照组比较,100μmol/L、500μmol/L及1 000μmol/L双花对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性抑制均有显著差异(P<0.01),1 000μmol/L双花作用优于氢醌。

  表1  双花对A375黑素瘤细胞增殖的影响(略)

  2.3  双花对人A375黑素瘤细胞黑素含量的影响  结果表明(表2),双花对于人A375黑素瘤细胞中黑素合成呈剂量依赖性抑制作用,双花组与阳性对照组比较,100μmol/L双花对于人A375黑素瘤细胞中黑素合成抑制作用有统计学差异(P<0.05),500μmol/L及1 000μmol/L双花对人A375黑素瘤细胞黑素合成抑制均有有显著差异(P<0.01)。1 000μmol/L双花作用与氢醌类似。

  表2  双花对酪氨酸酶活性以及黑素含量的影响(略)

  3  讨论
   
  色素性皮肤病历来是难治的一类皮肤病,我国天然药物资源丰富,大量天然药物已经在历史记载中具有调节色素沉着的作用,其中很多已经广泛应用于临床实践中,国内外已经对其中很多单体进行了体外细胞外黑素合成及酪氨酸酶活性的影响,筛选出许多潜在的可能影响细胞内黑素生成的单体,傅国强等研究发现双花在细胞外可以很好的剂量相关的抑制黑素合成。
   
  一些黑素瘤细胞常被用来检测黑素生成以及酪氨酸酶活性的变化,在此基础上筛选出的许多药物已经上市,一些药物(如氢醌)临床上获得了很好的疗效,因此本研究利用人黑素瘤细胞株A375研究双花对于细胞内黑素生成的影响,发现其可在不杀伤细胞的浓度范围内剂量依赖的抑制黑素生成,提示双花在治疗色素过渡沉着性皮肤病上具有一定的开发前景。

【参考文献】
    [1] 傅国强,马鹏程,吴勤学,等. 196味中药乙醇提取物对酪氨酸酶的抑制作用[J]. 中华皮肤科杂志,2003,36(2):103~106.

  [2] Kazuhisa S,Takahisa N,Koji S,et al. Inhibitory Effects of α-Arbutin on Melanin Synthesis in Cultured Human Melanoma Cells and a Three-Dimensional Human Model[J].Biol. Pharm. Bul.,2004,27(4):510~514.

  [3] Mun YJ, Lee SW, Jeong HW,et al. Inhibitory effect of miconazole on melanogenesis[J]. Biol. Pharm. Bul.,2004,27(6):806~809.

  [4] 范卫新,张美华,夏明玉,等. 甘草酸,熊果苷及氢醌对小鼠黑素瘤细胞黑素生成影响的比较研究[J]. 临床皮肤科杂志,2000,29(2):34~37.


作者单位:深圳市第九人民医院,广东 深圳 518000

日期:2010年1月13日 - 来自[2008年第8卷第8期]栏目
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