龙是中华民族的象征，是华夏子孙的图腾。2012年是我国农历龙年，在中药材大家族中，也有不少带“龙”字的成员。
五爪龙 学名乌蔹莓，是葡萄科植物乌蔹莓的全草，又名乌蔹草、五叶藤、母猪藤。生于旷野、山谷、林下、路旁。性平味甘、微苦。具有祛风除湿、祛瘀消肿、清热解毒、活血散瘀、利尿的功能，可以治疗咽喉肿痛、疖肿、痈疽、疔疮、痢疾、尿血、白浊、跌打损伤、毒蛇咬伤等症。
龙胆 为龙胆科植物及中药材龙胆的统称。中国有龙胆属240多种，多产于西南高山地区。龙胆也是重要的药用植物，其根和根茎入药具有清热、泻肝、定惊之功效。《本草纲目》记载：“性味苦，涩，大寒，无毒。主治骨间寒热、惊病邪气，继绝伤，定五脏，杀虫毒。”龙胆对治疗头发全脱也有很好的疗效。
龙齿 为古代哺乳动物如象类、犀牛类、三趾马等牙齿的化石。龙齿性凉，味甘涩，功能镇惊安神，清热除烦。主治惊痫，癫狂，心悸怔忡，失眠多梦，身热心烦。
龙骨 别名陆虎遗生、那伽骨、五花龙骨、青化龙骨、花龙骨、白龙骨，为古代哺乳动物象类、犀类、三趾马、牛类、鹿类等的骨骼化石。由磷灰石、方解石以及少量黏土矿物组成。呈圆锥形或圆柱形，多煅后敲碎用．该品味涩性凉，能镇惊安神、除烦清热，治心悸、失眠等。
地龙 为环节动物门蚯蚓科动物参环毛蚓，俗称环毛蚯蚓的干燥体。主产于广西、广东、福建。性寒，味咸。可清热、定惊、通络、平喘、利尿；用于高热神昏、惊痫抽搐、关节麻痹、肢体麻木、半身不遂，肺热喘咳，尿少水肿等。
龙子衣 药方常写龙衣、蛇蜕，为游蛇科动物黑眉锦蛇、锦蛇或乌梢蛇等蜕下的干燥表皮膜。春末夏初或冬初采集，除去泥沙，干燥。气微腥，味淡或微咸。具有祛风、定惊、解毒、退翳的功效。用于小儿惊风，抽搐痉挛，角膜出翳，喉痹，疔肿，皮肤瘙痒等。
龙葵子 为茄科植物龙葵的种子，龙葵植物秋季果实成熟时采取。种子所含脂肪酸主要是棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸，并含少量甾醇。味甘，性温，无毒。主治急性扁桃体炎，疔疮。
龙血竭 为百合科剑叶龙血树的树脂，主要分布在我国云南及东南亚国家。主要成分为龙血素B，微有清香，味淡微涩。功能活血散瘀，定痛止血，敛疮生肌。用于跌打损伤，瘀血作痛，妇女气血凝滞，外伤出血，脓疮久不收口。
辽宁、吉林、黑龙江三省（以下简称东北）是我国北龙胆的重要产区，产量（野生与家种）占到全国北龙胆总量的80%以上。东北产量的多与少，销势的畅与滞，以及价格的涨与跌等市场商情，对全国药市的整体走势从某种意义上讲是举足轻重的，关系重大，因此更加引起药厂、药企、药商和药农的特别关注。据笔者了解，2011年秋末冬初东北龙胆的产销基本告一段落，产量、销量、价格、库存以及销势等现状已趋明朗，现报道如下。
一、东北龙胆产区分布
辽宁：清原、凤城、桓仁、新宾、西丰、宽甸等地。
吉林：珲春、桦甸、延边、磐石、蛟河、永吉、长白、汪清、白城、通榆、洮南、长岭、大安、松原、前郭旗、通化等地。
黑龙江：大庆、安达、肇州、肇源、杜尔伯特、泰来、甘南、龙江、富裕、齐齐哈尔、绥化、海伦、五常、海林、伊安、勃利、东宁、伊春、穆棱等地。
二、东北龙胆整体走势
据对东北龙胆主产区的清原、桓仁、新宾、珲春、通化、大庆、安达、齐齐哈尔等20余个市县的调查显示，2011年东北龙胆市场整体走势可以概括为：野生家种产量双双减产，减幅在50%以上，市场需求逐年大幅增长，各地库存十分薄弱，供需缺口逐年扩大，价格继续保持坚挺态势，行情持续稳步上涨，涨幅接近或达到高价期的2008年。东北龙胆的这一走势已引起中医药界和中药材行业以及产地药农的密切关注。
三、龙胆产量继续减少
21世纪之前，供应国内国际两个市场的东北龙胆主要依靠野生资源，不见家种。进入21世纪后，野生龙胆资源日趋枯竭，产量逐年减少，减幅加大。一项调查显示，上个世纪90年代，东北野生龙胆至少在5000吨左右（估算，下同），到21世纪初的2000年已锐减至1300-1500吨，5年之后的2005年大幅减少至600吨，2010年已减至150吨，2011年已不到100吨，减幅为2000年的13-15倍，创下野生产量的新低。东北野生龙胆产量缘何大幅减少？调查显示：一是连年滥采乱挖。进入2002年后，东北龙胆价格大幅上涨，由2000-2001年的5-7元（千克价，东北均价，下同），大幅上涨至10-12元，涨幅是前两年的2倍左右，药农采挖一天龙胆，至少收入100元以上，这一收入在当时是很可观的。于是，在利益的驱动下，主产区和次产区的广大药农，甚至周边的临场、农场、工厂、企业等的职工乃至城镇赋闲人员，一哄而起，大挖特挖，连年不断，如此循环不已，导致野生资源日趋枯竭，五年之内难以再生，产量急剧下降。二是为改变东北老区的落后面貌，迅速发展地方经济，三省各地大兴修路、挖矿、建厂、修渠、造田、植树、改造小城镇、开发旅游区之风，极大地破坏了龙胆赖以生存的环境，致使野生产量大幅减少，近年在主产区的山区、半山区、草地、草原、河边、湿草甸等生长区域已难见到连片的龙胆，可见资源之枯竭。三是产区连年不断发生自然灾害（如：旱、涝、泥石流、热风、火灾等），导致龙胆大面积死亡。四是产区政府主管部分为保护生态环境，防止水土流失，严禁无证采挖药材，以及产区青壮年劳力多去城里务工，家中老幼无力采药，加之资源少，采挖效益低，很少有人愿意进山采药等诸多原因也导致野生龙胆产量连年下降。由于野生龙胆资源枯竭，产不足需，供需缺口加大，拉动价格大幅上涨，于是家种龙胆应运而生。东北三省人工种植龙胆始于1990年，至今已有20多年的历史了。到2011年东北龙胆种植面积已达10000亩左右。那么2011年龙胆产量多少？据不完全统计，今年产新量应为2009年（龙胆生长期为3年）种下的6000亩（其中辽宁为5000亩。吉、黑两省为1000亩），辽宁每亩产干品150千克，总产量应为750吨左右，吉林黑两省每亩产量为200千克，总产应为200吨。三省总产相加为950吨。但这只是正常年份的产量。实际产量几何？调查显示，辽宁清原县生产基地2009年种下的4000亩龙胆，因遭遇严重干旱，产量减少
减幅高达50%以上。据该县英额门镇椽子沟村党支部书记，人工栽培龙胆创始人徐等一向笔者介绍说：我们清原县今年干旱严重，产量减了一半，每亩单产只有150千克左右，总产300-360吨左右，辽宁其它几个龙胆产区也同样受灾减产，产量估算为50吨左右，辽宁全省2011年龙胆产量估算为350-400吨左右，加上吉黑两省150吨的产量，2011年东北家种龙胆总产应为500-550吨左右，较正常年份减产400-450吨左右。
综上所述，2011年东北龙胆总产量定格在600-650吨，其中野生产量为100吨，家种产量为500-550吨，总产量同比减少50%左右。
四、市场需求持续增长
龙胆为龙胆科多年生草本植物龙胆和三花龙胆或条叶龙胆的干燥根及根茎。龙胆始载于《参农本草经》，具有清热燥湿，泻肝胆实火，除下焦湿热及健胃的功效。主治湿热黄疸、急性传染性肝炎、胆囊炎、膀胱炎、高血压、头昏耳鸣、小儿高热抽搐、惊痫狂躁、目赤肿痛、耳聋、肋痛、带状疱疹、湿疹瘙痒等症。现代医学研究证明，龙胆还有助消化、增食欲、保肝、利肝、降低丙氨酶等作用。龙胆应用范围广泛，我国2000多家中药厂大量采用龙胆生产中成药、新药和特药等，主要品种有：龙胆泻肝丸、小儿清热片、炎热清片、熊胆丸、参农本草膏、清阳痫速康胶囊、康肤霜等。几百家中药饮片厂还用龙胆生产大包装、小包装、精包装、颗粒等10多种中药饮片。我国数以万计的中医院采用龙胆处方治疗，民间所用单方、验方、偏方等均有龙胆成分，龙胆还大量用于植物提取及出口等多个领域，所用龙胆原料呈逐年增长之势，年增幅已逾10%，出口量年递增15%左右。据不完全统计，2000-2005年市场用量由1000吨左右，增长至1800吨左右，2006-2010年又增长至1900-2200吨左右，2011年已上升至2400吨左右，平均每年递增100吨左右。
五、库存空虚存量下降
由于龙胆野生资源枯竭加剧，野生产量（包括北龙胆和南龙胆）持续10年减少，到2011年东北龙胆产量只有100吨左右，南龙胆已降至1000吨，同时，东北家种龙胆受灾减产，减幅在50%左右，产量大约只有1600吨，加上库存200吨左右和囤积压货惜售的数量100吨，2011年社会存量为1900吨左右，目前库存已趋空虚，各地存量极少，据不完全统计，由于多年大量吃库存，大型药市库存量多则50多吨，少则几吨，中小型药市库存也只有几吨甚或1吨以下。但国内国际两个市场的需求却只增不减，而且逐年在增长，2011年已增长至2400吨左右，但市场仅能供应1900吨左右，供需缺口高达500吨。据悉，近期产地库存已趋空虚，陈货已售罄，新货供不应求，多商去产地争购，哄抬价格，致使北龙胆与南龙胆价格在逐月上涨。
六、龙胆价格逐月上涨
供需缺口带来商机，助推价格逐月上涨。市场调查显示，2011年北龙胆价格在利多因素的推动下，已上涨至65-80元，基本与2008年7月的高价位持平。值得关注的是，东北龙胆此轮价格上涨是在2011年下半年全国药材价格普遍降温的大环境下再度逆市上扬，而且是逐月上涨。调查统计资料显示，东北龙胆价格2011年1-3月份上涨至53-73元，4月份上涨至58-78元，5-6月再涨至60-78元，7-8月份又涨至65-80元，9-11月份价格略有震荡，暂时徘徊在65-75元之间。引起药厂、药商和药农的密切关注，同时特别关注2012-2013年的后市走势。
七、后市仍有上行空间
由于家种龙胆生产周期长达3年，产区即或在2011-2013年大力发展人工栽培，扩大种植面积，也只能在2015-2016年见效，远水解不了近渴；野生产量越挖越少，产量逐年下降，到2012-2013年将降至100吨以下。东北龙胆产量（野生与家种）之少，与几千吨的市场用量相比可谓是杯水车薪。同时，市场需求只增不减，每年至少递增200吨左右。那么，尚有庄家炒作、热钱介入、大户囤积和药农惜售，加之全国物价、工值上涨、药材种植、加工成本一年高于一年等等因素，将是龙胆价格继续上涨的动力。
龙胆（草）已列入42种国家保护的野生动植物药材品种之一，野生龙胆资源日趋枯竭，几近濒危，家种产量的减少和不稳定，将导致供需矛盾日益加剧，加上库存空虚等诸多现实难题已成定局，短期内难以解决。因此可以断定，东北龙胆的后市将进入高价期，价格将在目前的价位上稳中趋升，预测为：2012年将上涨至90元，2013年有望闯入百元关口。
【摘要】 目的 考察龙胆野生品与人工种植品中龙胆苦苷含量的差异。方法 采用以咖啡因为内标物的高效液相色谱内标法[1]。结果 随着龙胆生长年限的增长，其中的龙胆苦苷含量也在增加，三年人工种植品的含量才基本接近野生样品的含量。结论 为保证龙胆药材的质量，保护中药材资源，人工种植龙胆势在必行。
【关键词】 高效液相色谱;内标法;咖啡因;龙胆;龙胆苦苷;含量测定
龙胆系龙胆科多年生草本植物, 2005版《中华人民共和国药典》收载入药品种有4种，分别是条叶龙胆、龙胆、三花龙胆或坚龙胆。主要以根入药,属大宗常用中药材，主要有效成分为龙胆苦苷，有泻肝胆实火,除下焦湿热的功能[2]。过去三十几年一直列入国家和省管理的统配品种，为长期供不应求和大量收购的品种。近年来，由于盲目采挖使野生资源遭到严重破坏，野生资源日趋枯竭，产量和质量逐年下降，因此开发人工种植前景十分广阔[3]。
本文采用2005版《中国药典》规定方法，以咖啡因为内标物的高效液相色谱内标法，对贵州几个地区龙胆野生品与人工种植品中的龙胆苦苷进行含量测定，为龙胆野生品转为人工种植提供参考依据。
1 仪器、试剂与药材
1.1 仪器与试剂 LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司)，紫外检测器，柱温箱;AE-240双量程电子分析天平，量程：万分之一和十万分之一两档(梅特勒-托利多上海有限公司);甲醇为分析纯，水为娃哈哈纯净水;龙胆苦苷对照品和咖啡因对照品均购自中国药品生物制品检定所，批号分别为：110770-200510、171215-200406)。
1.2 药材 分别采自贵州省龙里县以及贵阳市郊乌当。经我院付智明讲师鉴定均为龙胆科(Gentianaceae)植物坚龙胆(Gentiana rigescens Franch.)，本实验均用其根作含量测定。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱Agilent ZORBAX Extend-C18 4.6mm×250mm, 5μm;流动相为甲醇-水(3:7);柱温25℃;检测波长：270nm;分离结果见图1。(a)咖啡因 (b)龙胆苦苷 图1 龙胆药材供试液加咖啡因内标(A)、 龙胆苦苷对照品加咖啡因内标(B)色谱图
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取龙胆苦苷对照品8.73mg用甲醇溶解并定容至20ml，即得浓度为436.50μg/ml的对照品溶液。
2.2.2 内标溶液的制备 精密称取咖啡因对照品45.01mg用甲醇溶解并定容至50ml，即得浓度为900.20μg/ml内标溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取经60℃干燥至恒重的样品粉末约0.1g，置于50ml具塞锥形瓶中，精密加入10ml甲醇，密塞，时时振摇，置于暗处冷浸12h。过滤，弃去初滤液取续滤液，再用0.22μm的微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。分别精密吸取供试品溶液1ml和浓度为900.20μg/ml内标溶液1ml于5ml容量瓶中，甲醇定容至刻度摇匀即可进行测定。
2.3 标准曲线的制作 分别精密吸取浓度为436.50μg/ml的对照品溶液1，1.5，2， 2.5，3，3.5，4ml于7个5ml的量瓶中，再分别精密加入浓度为900.20μg/ml的内标溶液1ml，甲醇定容至刻度并摇匀。用上述色谱条件对各浓度进行测定，以龙胆苦苷和内标物的峰面积比值A为纵坐标，龙胆苦苷浓度C为横坐标，进行线性回归，得回归方程：A = 4.6587 C + 0.0051，r = 0.99993 表明当内标物浓度为180.04μg/ml时，龙胆苦苷浓度在87.30～349.20μg/ml范围内线性关系良好。
2.4 精密度考察 分别精密吸取龙胆苦苷对照品溶液和内标液各1ml，用甲醇定容至5ml，按上述色谱条件连续测定6次，用龙胆苦苷对照品和内标物峰面积比值计算精密度，得RSD=1.40%。
2.5 稳定性考察 用2.2.3“供试品溶液的制备项”所制得的供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0，4，8，12，16，20h进行测定，用龙胆苦苷和内标物峰面积比值计算，得RSD为1.20%。结果表明龙胆苦苷溶液在20h内稳定。
2.6 重复性实验 精密称取2007年11月17日采收的乌当龙胆样品粉末6份，每份约0.1g，按2.2.3“供试品溶液的制备”项下制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果龙胆苦苷平均含量为4.71%，RSD为1.68%(n = 6)。
2.7 加样回收率试验 精密称取已知龙胆苦苷平均含量为4.71%的龙胆样品粉末6份，每份约0.05g，分别精密加入用甲醇配制成浓度为236μg/ml的龙胆苦苷对照品甲醇溶液10ml，按2.2.3“供试品溶液的制备”项下进行提取，按上述色谱条件进行分离测定，结果见表1。表1 加样回收率实验结果
2.8 样品含量测定 精密称取各样品粉末约0.1g，按2.2.3“供试品溶液的制备”项下制备供试品溶液，并按上述色谱条件进行测定，用龙胆苦苷和内标物的峰面积比值代入上述回归方程进行计算，结果见表2。
3 讨论
3.1 由大方和乌当两地人工种植品中龙胆苦苷含量测定结果可以看出，随着生长年限的增长，龙胆苦苷含量逐渐增加。野生龙胆通常不知道其生长年限，通过与大方、乌当两地人工种植的龙胆中龙胆苦苷含量进行比较，3年人工种植品中龙胆苦苷的含量才基本接近野生龙胆的含量，因此我们所采的野生龙胆的生长年限应该在3年或3年以上。可以看出，对野生龙胆的滥采滥挖，不仅龙胆原料药材的质量难以保证，又对资源造成较大破坏，所以人工种植龙胆势在必行。表2 龙胆苦苷含量测定结果
3.2 由表2可以看出 龙胆苦苷的含量在11月会出现降低的现象，12月份又明显增高，这种现象可能与气候变化有关，所以，根据分析结果，最佳采收时间选择9月份或12月份较好。
3.3 本实验所采用的以咖啡因为内标物的高效液相色谱法是根据2005版《中国药典》对龙胆药材中龙胆苦苷含量测定的方法，该方法操作较为实用和简便。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典(一部).北京:化学工业出版社,2005，64.
2 刘涛, 才谦,付玉芹,等.中药龙胆的研究进展.辽宁中医杂志,2004,31(1):85-86.
3 张海洋,张守平.龙胆草的价值与栽培技术.特种经济动植物,2002,(8):28-29.
辽宁省清原县是关龙胆产销大县，又是东北三省关龙胆人工栽培主要产地之一，也是全国规模化最大的龙胆草产业基地，总产量占到该省的70%左右，占到东北三省总产量的80%左右，清原县关龙胆产销形势直接关系到东北乃至全国龙胆草市场的走势，是药材市场龙胆草行情的“晴雨表”。2010年清原县关龙胆的产销工作已于10月底全部结束。据对今年该县关龙胆的产销走势的调查显示，总产量在300-400吨之间，产量同比下降100吨左右，供需缺口在200吨以上。产新前后大货走动畅快，批量交易频繁，有省内外药厂、饮片加工厂、药市、中药店等用户不断深入到该地区主产地的20多个乡镇收购，见货就收，有多少要多少。由于货源短缺，缺口加大，加之厂商争购，出价不菲，拉升行情从春季第一轮产新开始就小幅上涨，一直到秋季第二轮产新结束，价格仍然上涨不止。资金大户见价格上涨，立马高价收购，囤积大货，估算囤积总量已逾百吨，与此同时，药农见此形势纷纷开始惜售，待明年价格上涨至百元附近再出手，估算药农惜售货源总量也逾百吨。据了解，大户囤积和药农惜售的关龙胆总量在200吨左右，实际流通到市场终端（药厂、药企、医疗单位、药市等渠道）的关龙胆只有180-200吨左右，占到该县年产量的50%左右，供应量是2005年以来最少的一年。由于产量少、无库存、囤积和惜售，到11月无论是大货还是小批量货源清原已无货供应，进一步加剧货源供求紧张的矛盾，为行情继续上涨推波助澜。
“物以稀为贵”。清原县关龙胆产不足需，供不应求，与此同时，东北其它一些产地的产量也在同步减少，而市场需求却在不断增长，库存无力补充，价格上涨已成定局。据调查显示，清原县关龙胆春秋两季的收购价和药市价的具体走势为：春季收购价由上年的34-37元，（千克价，下同），上涨至40-45元，药市价由上年的43-45元，上涨至58-70元。秋季收购价由春季的40-45元，上涨至50-55元，药市价由春季的58-70元，上涨至60-74元。
据该县英额门镇橼子沟村“药材大王”、党支部书记徐等一和龙胆草专业户合作社主任秦昌玉介绍，龙胆草生产周期3-5年，全国各地少有库存，明年全国总产量增幅不大，依然是产不足需，缺口加大，龙胆草价格仍有上行空间，提醒业界同行密切关注其行情发展，抓住商机，创造最佳效益。
秦艽作为一种常用的传统中药,野生品种早已不能满足临床需要，栽培秦艽开发利用尚处于起步阶段，对其的研究多见于化学成分及药效学方面，少有对药动学的研究。有报道龙胆苦苷在Beagle犬体内的药动学过程表现为静脉内给药一房室模型［1］;大鼠灌胃给予含龙胆苦苷药物后［2］；用HPLC法测定龙胆苦苷呈静脉外给药的二房室模型。龙胆苦苷是裂环烯醚萜苷类化合物，极性大，吸收较少，静脉外给药其血药浓度均较低。为此本实验选择兔耳静脉注射秦艽水煎醇沉液，用HPLC法定量测定家兔体内龙胆苦苷的药动学过程。
1 材料与仪器
1.1 药品三年生栽培秦艽采于宁夏六盘山药材栽培基地(由宁夏六盘山药材栽培基地张守宗高级农艺师提供)，经宁夏药检所邢世瑞主任药师鉴定原植物为秦艽Gentiana macrophylla Pall.的生药材；按中药制剂药理学实验的常规制备方法制备秦艽水煎醇沉液1.0 g/ml（以生药计），于冰箱内冷藏保存。
1.2 试剂与药物龙胆苦苷对照品（中国药品生物制品检测定所，批号：770-200105）。乙腈、甲醇（美国TEDIA，色谱纯），水为去离子水，其余试剂均为分析纯。
1.3 仪器日本岛津LC-20A系列高效液相色谱仪(包括LC-20AT输液泵、DGU-20A5在线、脱气机、SPD-20AV紫外检测器、SCL-20Avp系统控制器、LC-solution色谱工作站)。Explorer电子分析天平(Ohaus Corporation，美国)；UV-2550 型紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。
1.4 动物家兔1.5～2.5 kg ，普通级,由宁夏医科大学实验动物中心提供。
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【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷 方法 以C18反相柱为色谱柱，甲醇—水为流动相。检测波长270nm，用乙酸乙酯和甲醇混合液作提取剂。结果 平均回收率为98.38%。r=0.9995,线性关系良好。 结论 此方法灵敏、准确，适用于龙胆苦苷的测定。
【关键词】 高效液相色谱法 清肝胶囊 龙胆苦苷
龙胆为龙胆科植物，其根及根茎含龙胆苦苷，龙胆苦苷具有清肝解毒、消食健胃的功效。用高效液相色谱法（HPLC）测定复方制剂中的龙胆苦苷，其操作步骤简便，样品回收率高，重现性好，结果可靠，现报道如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器
紫外分光光度计（日本岛津UV-260）；高效液相色谱仪（Waters510泵，490紫外检测器，740数据处理仪）；薄层自动涂铺器（瑞士CAMAG）；薄层层析点样台TLC-SP-1（西安市秦西机械厂）；离心机800型（江苏医用设备仪器厂）；微量进样器（上海医用激光仪器厂）。
1.2 试药
中性氧化铝（100～200目）（上海五四试剂厂）；硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；龙胆苦苷对照品（中国药品生物制品检定所）；乙酸乙脂、甲醇、氯仿均匀为分析纯（上海试剂一厂）。
2 含量测定
2.1 色谱条件 与系统适用性试验
用十八烷基硅胶为填充剂；甲醇—水（3：7）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。
2.2 内标溶液的制备
精密称取咖啡因适量，加甲醇制成1ml含0.4mg的溶液，即得。
2.3 测定法
精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液各5ml，摇匀，取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品中含龙胆粉量约0﹒5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，放置12h，时时振摇，精密加内标溶液2ml，加甲醇至刻度，摇匀，取10ul注入液相色谱仪，按内标法以峰面积计算，即得。
3 试验方法与结论
3.1 条件试验
3.1.1 龙胆苦苷对照品的含量确定和水溶性实验
3.1.1.1 龙胆苦苷的测定 : 照高效液相色谱法采用Nucleosil C18柱（46cm×0.25cm），精密吸取含量测定项下配制的龙胆苦苷对照品溶液进样，以甲醇—水为流动相，连续重复进样3次，归一化法计算含量。
3.1.1.2 水溶性实验 ：精密称取龙胆苦苷对照品0.2608g，加水1ml，根据操作规范［１］，可见立即溶解。故认为龙胆苦苷对照品水溶性在易溶范围。
[SX(]1[]0.2608[SX)]=38.3ml/g
3.1.2 样品与龙胆苦苷对照品紫外光谱对照取复方制剂样品和对照溶液2.5ml，分别在波长200～400nm间进行扫描。结果表明：二者紫外吸收曲线基本一致，在波长（271±1）nm处均有最大吸收。
3.1.3 提取溶剂的选择：龙胆苦苷为裂环环烯醚萜单糖苷，极性大。清肝胶囊为复方制剂，成分复杂，提取溶剂的选择会影响下一步的薄层分离。因此，试用了甲醇、丙酮、乙酸乙酯等溶剂提取找出最佳提取溶剂。试验表明，甲醇对龙胆苦苷的提取效率高，同时出提出大量糖类水溶性杂质，影响薄层分离，干扰紫外吸收。而乙酸乙酯虽提取效率较差，但提取的糖类等杂质也较少。因此，采用乙酸乙酯—甲醇（70：10）的比例混合作提取溶媒；既能定量地提取龙胆苦苷，又能尽可能少地提出杂质，在该溶媒条件下的最大吸收波长为270nm。
3.2 回收率试验
取清肝胶囊样品5份，精密称量，分别加入一定量的龙胆苦苷对照品，照含量测定项下的方法分别测定含量，计算回收率。
3.3 精密度实验
3.3.1 样品测定精密度实验取清肝胶囊样品 6份，每份5g，照含量测定项下的方法试验，分别测定含量。
3.3.2 薄层层析精密度试验取清肝胶囊样品5g，照含量测定项下的方法试验，在6块薄层板上点样［２］，每块板上点2个点，测定含量。
3.4 紫外光谱试验
取清肝胶囊与空白龙胆制剂各5g，分别照含量测定项下的方法制备供试品溶液，照分光光度法试验，在200～350nm间进行重叠扫描。结果表明，在270nm处，制剂中其它原料几乎不影响龙胆苦苷的测定。
3.5 标准曲线的制备
取龙胆苦苷对照品约400mg，照含量测定项下的方法绘制标准曲线。回归方程为Conc=17﹒856A-0.0275，r=0.9995，曲线通过原点，线性相关较好。
4 讨论
采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷的含量，样品的预处理是关键。在工艺上采用连续回流提取方法提取龙胆苦苷［３］，至提取液近无色时，可提尽龙胆苦苷。其残渣经薄层层析检验，无龙胆苦苷斑点。提取液浓缩后加入水，龙胆苦苷转溶于水中，过滤，可除去提取中带来的脂溶性杂质；水溶液经氧化铝层析柱，甲醇洗脱，大部分色素等杂质被吸附［４］，而龙胆苦苷被洗脱下来。柱层析洗脱过程中，采用100ml甲醇洗脱，龙胆苦苷几乎全部洗下来。
采用薄层层析方法，用硅胶GF254板分离，荧光熄灭法定位，龙胆苦苷斑点清晰，有利于刮板。
通过试验证实，采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷，方法准确、稳定、可靠。
参考文献
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［2］吕武清，龙新华﹒中成药中的药材薄层色谱鉴别［Ｍ］北京：人民卫生出版社，1997，178-179
［3］庄越，曹宝成，萧瑞祥﹒实用药物制剂技术［Ｍ］北京：人民卫生出版社，1999 ，110-114
［4］王如治﹒药剂学［Ｍ］北京人民卫生出版社，1997，120﹒
来源：中国色谱技术网
摘要目的：建立高效毛细管电泳法测定生药龙胆中有效成分龙胆苦苷含量的方法。方法：毛细管区带电泳(CZE)：运行电解质为含10％甲醇的20mmol/L硼砂缓冲液(pH10．6)；工作电压18kV；柱温25℃；检测波长280IIm。结果：测得龙胆苦苷的回归方程为y=0．0787+1．9981X(r=O．9998)；平均回收率为101％；RSD=2．64％(，l=5)。结论：本方法简便，准确，快速，重复性好。可用于龙胆中龙胆苦苷的测定。
关键词：毛细管区带电泳；龙胆；龙胆苦苷
龙胆为龙胆科植物，其药用部分的主要有效成分为龙胆苦苷，龙胆苦苷属环烯醚萜苷类化合物，有清肝解毒、消食健胃的功效。龙胆苦苷已被中国药典2000版作为龙胆HPLC方法含量测定的定量化学指标。目前国内外均未见HPCE分析龙胆苦苷的报道。为了扩展分析手段，据文献¨加以改进，采用CZE方法对生药龙胆中提取的龙胆苦苷进行测定。
1、仪器与试剂
1．1仪器：PA／CES000型毛细管电泳仪，紫外检测器，SystemGold软件，熔融石英毛细管柱(57cm×75μm，有效长度50cm)(Beckman美国)，低温高速离心机(Beckman美国)，超声仪(UhrosonicHomogenizer4710美国)，分析天平(MettlerToledo瑞黑龙江省教育厅科学技术研究项目重大项目(955zzoo2)
1．2试剂：龙胆苦苷对照品(纯度为98％，DELTA天然有机化合物信息中心安徽)，内标氯霉素(Sigms美国)，其它试剂为国产分析纯，样品(在黑龙江省泰康，牡丹江等地采集，由哈尔滨师范大学王臣老师鉴定)。
2、方法和结果
2．1实验方法
2．1．1对照品及内标溶液的配制：分别精密称取适量的龙胆苦苷和氯霉素，甲醇溶解定量稀释制得。浓度分别为1．14mg/mL、0．545mg/mL。
2．1．2样品溶液的制备：精密称取龙胆粉末0．1g，加入甲醇2mL超声处理40min后离心20000r/min5min，分取上清液用0．45pan滤膜过滤。
2．1．3电泳条件：毛细管区带电泳(CZE)：电解质为含10％甲醇的20mmol/L硼砂缓冲液(pH
10．6)；工作电压18kV；毛细管恒温25℃；检测波长280rim；样品压力进样5s(34kPa×S)。
2．2实验结果
2．2．1标准曲线的制备：精密量取龙胆苦苷对照溶液200，300，4OO，500，6OOμL，分别置1mL量瓶各加入内标溶液4OOμL，用甲醇定容至刻度摇匀，进行CZE测定。以对照品浓度(μg/mL)为横坐标，以对照品与内标物峰面积比值为纵坐标，进行线性回归，得到龙胆苦苷的回归方程为：Y=0．0787+1．9981r=0．9998由此可知，在内标浓度为0．545mg/mL时，龙胆苦苷含量在0．114-0．684mg/mL时线性关系良好。
2．2．2精密度考察：取龙胆苦苷对照品溶液4O0μL置1mL量瓶加200L的内标溶液，加甲醇定容至刻度，连续进样5次，以峰面积比计算RSD为2．64％。
2．2．3样回收率实验：分别取龙胆苦苷对照品溶液25，50，75，100，125μL，各加已知含量的样品溶液适量，按“2．1．2”项操作制备所需溶液，依次进样，测得回收率为101％。
2．2．4样品含量测定：取样品溶液200置1mL量瓶加4OOμL内标溶液，加甲醇定容至刻度摇匀。依上述方法测定了4个不同品种的样品(n=3)。
3、讨论
3．1提取方法的选择
本实验比较了3种不同的提取方法：①室温冷浸提取12h，时时摇动]。②37℃震荡提取12h。③室温超声提取40min。结果表明方法③提取的龙胆苦苷回收率最好，为101％，RSD=1．2％且节约时间。
3．2电解质的选择
实验先后采用了加10％甲醇的50mmol/L硼砂缓冲液和不加10％甲醇的50mmol/L硼砂的缓冲液，用0．1mol/LNaOH和0．1mol/LHC1在9～10．6范围调节pH，结果发现加10％甲醇的50mmol/L硼砂的缓冲液(pH10．6)的测量结果虽然有明显的龙胆苦苷峰但未能与溶剂甲醇峰完全分离且加甲醇后峰形更好；将加10％甲醇的缓冲液中硼砂浓度降低至40mmol/L和20mmol/L分别考察其pH9～10．6的范围，发现当缓冲液中硼砂浓度为20mmol/L(pH10．6)时龙胆苦苷与溶剂峰完全分离且峰形较好。电解质确定为含10％甲醇的20mmol/L硼砂缓冲液(pH10．6)。
3．3内标物的选择
实验考察了多种可用的内标物，最后确定氯霉素为内标物，它在本实验条件下可与龙胆苦苷完全分离且迁移时间相差不到2min。
4、结论
本实验通过对不同电泳条件和电解质体系的优化及系统方法学的研究，建立了高效毛细管电泳测定生药龙胆中龙胆苦苷含量的方法。与高海等测定龙胆苦苷含量的HPLC方法相比本实验将样品的测量时间从近10min降至8min；本实验回收率101％与其回收率98．2％相比也有提高。通过对样品的提取方法的改进和测量时间的缩短使实验简便、快速，同时确保了良好的准确性和重复性。在本实验中测定的条叶龙胆(Gent／armmanshuricaKitag)、龙胆(GentianascarbraBge)、三花龙胆(GentianatrifioraPal1)、坚龙胆(Gent／anaFranch)4个品种中的龙胆苦苷的含量分为4．24％，1．28％，1．O9％，O．28％。
【摘要】目的建立反相高效液相色谱法同时测定龙胆花中落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量。方法采用ZORBAX SB－CM18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱；流动相甲醇和水（含0.04%磷酸）为15∶85的比例洗脱；检测波长为238 nm；流速1 ml·min-1；柱温30℃。结果4种成分均达到基线分离，落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的线性范围分别为0.10～6.25 μg (r =0.999 9)，0.076～3.5 μg (r =0.999 8)，0.04～5.65 μg(r = 0.999 9)和1.27～7.62 μg (r =0.999 8)；平均回收率分别为99.2％(RSD=2.6％,n=5)，103.0％(RSD=1.5％,n=5)，101.0％(RSD=1.1％,n=5)，99.7％ (RSD=3.6％,n=5)。结论该方法测定快速，结果准确、可靠。
【关键词】 反相高效液相色谱 落干酸 獐牙菜苦苷 龙胆苦苷 獐牙菜苷 龙胆花
Abstract：ObjectiveTo establish a quantitative method of simultaneous determination of loganic acid,swertiamarin ,gentiopicroside and sweroside in Gentiana veitchiorum Hemsl by RP-HPLC.MethodsThe sample was separated on the column of Zorbax S-C18 (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) and eluted with methanol and water(0.04％ phosphoric acid) to 15:85,the detection wavelength was at 238 nm, the flow rate was 1ml·min-1，and the column temperature was at 30℃.ResultsFour compounds were isolated．The linear ranges of loganic acid，swertiamarin，gentiopicroside and sweroside were 0.10～6.25 μg (r=0．999 9)，0.076～3.5μg (r=0.999 8)，0.04～5.65μg(r= 0．999 9) and 1.27～7.62 μg (r=0.999 8) respectively. The average recoveries were 99.2％(RSD=2.6％, n=5)，103.0％(RSD=1.5％,n=5)，101.0％(RSD=1.1％, n=5) and 99.7％ (RSD=3.6％,n=5,) ，respectively.ConclusionThe method is rapid and precise .
Key words：RP-HPLC; Loganic acid; Swertiamarin; Gentiopicroside; Sweroside; Gentiana veitchiorum Hemsl
藏药龙胆花为龙胆科植物蓝玉簪龙胆Gentiana veitchiorum Hemsl的花，藏名“榜间”，具有清湿热、泻肝胆实火、镇咳、利喉、健胃功能,主治感冒发烧、目赤咽痛、肺热咳嗽、胃炎、脑膜炎、尿道炎、气管炎、阴痒及阴囊湿疹、天花等［1］。
龙胆花主要含有裂环环烯醚萜苷类活性成分，如落干酸（loganic acid）、獐牙菜苦苷(swertiamarin)、龙胆苦苷(gentiopicroside)和獐牙菜苷(sweroside)等［2］。龙胆花常作为藏成药的君药或臣药，如龙胆花丸、十五味龙胆丸、三味龙胆丸等，对龙胆花及制剂中的活性成分的测定只有龙胆苦苷［3］，而对龙胆花的龙胆苦苷及上述3种活性成分同时测定的方法尚未见报道。本文利用高效液相色谱（HPLC）法同时测定了龙胆花中上述4种有效成分的含量，为全面评价龙胆花及藏成药质量提供更科学的依据。
1 仪器与试剂
Agilent1100高效液相色谱仪（配置：手动进样器、在线脱气机、高压二元梯度泵、恒温柱温箱、DAD检测器，Agilent1100色谱工作站）、ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱；KQ3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。
獐牙菜苦苷、龙胆苦苷对照品购自中国药品生物制品检定所；落干酸、獐牙菜苷对照品由本实验室自行分离得到，经归一化法测定，纯度大于98％；甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为自制三重蒸馏水。
龙胆花2007-08采于青海省果洛州玛沁县，由青海普兰特藏药研究所孙洪发研究员鉴定，阴干后粉碎过80目筛，冷藏保存。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为ZORBAX SB－C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）；流动相为甲醇∶水（含0.04%磷酸）为15∶85；流速1 ml·min-1；检测波长238 nm；柱温30℃。该色谱条件下落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷4种成分均被洗脱且达到基线分离。色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取适量的落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷对照品，用甲醇溶解，置10 ml的容量瓶中定容，摇匀作对照品溶液备用。使用时稀释为所需浓度。
2.3 供试品溶液的制备精密称取粉碎至80目的样品0.5 g，加入甲醇15 ml，超声提取40 min，抽滤，以甲醇洗涤滤渣两次，1 ml/次。重复上述操作，所得滤液与前一次滤液合并，浓缩后，用甲醇定容于50 ml容量瓶中。过0.45 μm滤膜，在选定色谱条件下测定有效成分的含量。
2.4 线性关系考察
分别精密量取适量4种对照品储备液，置2 ml容量瓶中，用甲醇定容于刻度，得混合对照品标液系列溶液。取混合对照品标液系列溶液分别进样10 μl，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，各组分进样量(μg)与峰面积A的线性方程及相关系数见表1。表1 4种活性成分的线性方程及线性范围（略）
2.5 检测限
在选定的色谱条件下，当信噪比S/N＝3时，对各组分最低检测限进行测定，结果表明，落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的最低检测限分别为0.56，0.25，0.45，0.84 ng。
2.6 精密度实验按“2.1”项下的色谱条件，取10 μl混合对照品溶液进样，测定色谱峰的峰面积，计算得4种活性成分的RSD分别为0.93%，0.81%，0.56%和1.2%(n=5)，表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性实验精密称取样品0.5 g，按“2.1”项下的色谱条件，分别于当日、次日及第3天进样分析，测定落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的峰面积，计算得RSD分别为1.2%，1.6%，1.3%和2.1%，表明供试品溶液3 d内稳定。
2.8 重复性实验
精密称取龙胆花粗粉（80目）6份，按“2.3”项下的方法，制备成供试品溶液。按“2.1”项下的色谱条件，进样分析，记录峰面积，按回归方程计算组分含量，得落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的RSD分别为0.87%，1.11%，1.87%和1.75%。
2.9 回收率实验精密称取已知含量的龙胆花粗粉5份，分别加入一定量的混合对照品溶液，照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的平均回收率分别为99.2％(RSD=2.6％)，103.0％(RSD=1.5％)，101.0％(RSD=1.1％)和99.7％ (RSD=3.6％)。
2.10 样品含量的测定
取“2.3”项下制备的样品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，经DAD检测器检测上述4种待测组分的峰纯度且其紫外光谱与对照品一致后，按外标法以峰面积积分值计算，得4种有效成分的含量(每个样品重复进样5次，取平均值)分别为1.16%，0.15%，5.47%和3.86%。
3 讨论
3.1 检测波长的确定
将落干酸、獐牙苦苷、龙胆苦苷和獐牙苷对照品溶液在200～400 nm范围内进行扫描,结果在254 nm及238 nm附近均有吸收。在238 nm杂质干扰少,故选择238 nm为检测波长。
3.2 提取方法确定
实验考察了甲醇回流提取法和超声提取等条件下的提取率,结果显示回流提取时裂环环烯醚萜苷类活性成分部分被破坏，故采用超声提取。超声提取时考察了药材的粉碎度以及不同溶剂下不同时间内的提取率,结果提示过80目筛后甲醇超声提取两次，每次40 min，提取完全。
3.3 流动相的选择在筛选裂环环烯醚萜苷类活性成分测定的色谱条件过程中,曾尝试过用不同比例的甲醇和水作为的流动相，发现甲醇-水（0.4%磷酸）为15∶85，4种成分均被洗脱且达到基线分离。
所建方法具有提取、分析方法简便、快速、结果准确可靠等特点，对全面评价龙胆花及其藏成药质量有重要的作用。
【参考文献】
［1］中国科学院西北高原生物研究所.藏药志［M］.西宁：青海人民出版社，1991：188.
［2］北京医学院，北京中医学院.中草药成分化学［M］.北京：人民卫生出版社，1884：344.
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