主题:薯蓣

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留人治癌的优点与不足

  前不久门诊中印象比较深的有位晚期肠癌患者,年近80。他是去年2月来就诊的,那时他已确诊为晚期肠癌,不停地便血,贫血,消瘦。已经转移,没办法手术,进行了两次化疗,因反应太大,食欲全无,也没能继续下去。

  我给他服用了薯蓣丸,改汤剂服用,并嘱咐他注意营养,要食用猪蹄或牛筋。老人患有胆囊炎,不敢吃猪肉,遂改用牛蹄筋,炖至极烂,每日少许佐餐。他大约2~3个月来一次门诊。方子几乎不变。自从服用中药以后,体重止跌回升,去年夏天的时候,精神气色均不错,大便出血也少了很多。但今年以来,体重又开始下降,大便次数增加。病情还是在缓慢发展。我还是给服原方,在这种情况下,扶正理虚,是最佳的选择。

  我接诊的肿瘤患者,大多是手术、化疗以后转来的。年轻的、全身状况较好的,我有用五苓散、小柴胡汤的;年龄大、全身状况差的,我大多用炙甘草汤、薯蓣丸等。上世纪七八十年代,我也曾使用过一些清热解毒药如白花蛇舌草、半枝莲、半边莲、蜀羊泉等,或活血化瘀的三棱、莪术等,但总是感到这些药,药证不明,疗效不明,九十年代以后,我渐渐不用了,思路转向经方医学。

  留人治病,是我的治癌观。很多情况下,生命岌岌可危,元气仅仅一丝尚存,如果再用攻击性的药物,往往玉石俱焚,人病均去。这种治疗方案,我认为是不可取的。在经方医学看来,肿瘤患者大多消瘦、食欲不振,当作虚劳论治。经方中的理虚方,有薯蓣丸、黄芪建中汤、炙甘草汤、大黄   虫丸等。而其中薯蓣丸气血双补、五脏兼调,是一种十分合适的调理方。这个老人,就是服用的薯蓣丸。这一年过得还可以,癌病没有能够治愈,但他依然在人世间。

  从留人的角度出发,我给肿瘤患者提出了判断生命不息的三不原则:精神不垮,体重不减,胃口不倒。也就是说,只要你有希望,有信心,有勇气;只要你注意营养,保持体重;只要你有良好的食欲,你的生命就能不断延续的。这就是宏观的指标,这就是从“人”着眼的治疗价值取向。

  但是,留人治癌还有不足和遗憾。因为毕竟癌症是凶险的,有时光调理体质也不能从死神手中夺回生命。如果能够找到克病的良药,那当然更好!现在,我也瞪大了眼睛在苦苦寻觅,我期待着有高手能交流经验,我期待着眼前能出现一些与放疗化疗相媲美的、有抑制肿瘤发展、防止癌细胞转移的特效中药方。

日期:2013年2月26日 - 来自[临床验案]栏目
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薄层扫描法测定粉萆薜和绵萆薜中薯蓣皂苷元的含量

                                                               来源:中国色谱技术网

  摘要:目的:利用薄层扫描法分别对薯蓣科植物粉背薯蓣及绵萆薜药材进行薯蓣皂苷元的含量测定。方法分别取粉苹薜、绵萆薜各3批经提取后点样,以氯仿:丙酮(9.7:0.3)为展开剂,采用薄层扫描法,检测波长λs=480nm,λR=700nm。结果平均回收率为100.1%和99.64%,RSD为1.42%和2.10%,稳定实验RSD=2.26%。结论本方法方便、简单、准确,可用于该品种的质量控制。

  粉萆薜和绵萆薜均为少常用中药《中国药典>2000年版有收载。粉萆藓为薯蓣科植物粉背薯蓣DioicoreahypoglaucaPalibin的干燥根茎。具有利湿去浊,祛风除痹之功效。用于膏淋,白浊,白带过多,风湿痹痛,关节不利,腰膝疼痛。绵萆薜为薯蓣科植物绵萆藓DioscoreasepemlobaThunb的干燥根茎。具有利湿去浊,祛风痛通痹之功效,用于淋病白浊,白带过多,湿热疮痛,腰膝痹痛。二者均为秋冬二季采挖,除去须根,洗净,切片,晒干。

  1、仪器与材料

  CS-9301PC型薄层色谱扫描仪(日本岛津公司);939型薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂);定量点样毛细管(USADrummondScientificCo.);硅胶G(青岛海洋化工有限公司);羧甲基纤维素钠(上海化学试剂采购供应站);薯蓣皂苷元(中国药品生物制品检定所200001含量测定用);粉萆薜和绵萆薜均由广西中医药研究所赖茂祥副研究员鉴定后提供。所用试剂均为分析纯。

  2、方法与结果

  2.1对照品溶液的制备:精密称取经80℃干燥至恒重的薯蓣皂苷元约10mg,加甲醇溶解,并制备成每lml含薯蓣皂苷元0.5mg的溶液,作为对照品溶液。

  2.2试品溶液的制备:取供试品粉萆薜25g,绵萆薜10.0g,加21ml/L的盐酸50ml加热回流3小时使其水解冷却过滤,药渣用水洗至中性。置80℃干燥。干燥物置索氏提取器中,用石油醚(60~90℃)30ml水浴加热回流4h将石油醚挥干后,加甲醇于残渣中并定量转移到50.0ml容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。作为供试品溶液。

  2.3色谱系统:以0.5%CMC-Na为粘合剂的硅胶G薄层板。展开剂为氯仿-丙酮(9.7:0.3),展距10cm,展开后迅速吹干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,取出,立即在薄层板上覆盖上同样大小的玻板,周围以封口胶封好。

  2.4扫描参数:将薯蓣皂苷元对照品溶液,绵萆薜,粉萆薜和空白溶液点于同一块薄层板上,依法展开显色后对斑点进行波长扫描,结果在480nm波长处均有最大吸收,空白无干扰,故确定检测波长为480nm,参比波长为?00nm。扫描方式:双波长,反射法,线性扫描,狭道0.4xl0.0nm,线性参数SX=3。

  2.5标准曲线与线性范围:用定量毛细管吸取薯蓣皂苷元对照品溶液1、2、3、4、5μl,分别点于同一块板上,依法展开,显色,按上述条件进行试验,记录峰面积分值,以斑点的峰面积分值为纵坐标,点样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,其回归方程为Y=372.83X十63.339,r=0.999。结果表明,点样量在0.5—2.5μg之间有良好的线性关系。因截距不为零,故采用两点校正法。

  2.6样品测定:精密吸取供试品溶液粉萆薜lμl,绵萆薜3μl,对照品溶液1.3μl,分别交叉点于同一块薄层板上,依法展开,显色,扫描得出供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值,以外标两点法计算供试品中薯蓣皂苷元的含量。

  2.7精密度试验:精密吸取对照品溶液2μl共6份,分别点于同一薄层板上,依法展开,显色,扫描。测得同板6点同浓度吸收度积分值,RSD=1.21%(n=6),另取6块硅胶CMC—Na薄层板,分别点对照品溶液2μl,依法测得异板同浓度吸收度积分值,RSD=2.03%(n=6)。

  2.8稳定性试验:取同批号的供试品溶液,依法点样,展开,显色,封好在0.5、1、2、4、8、12小时内进行扫描,记录色斑吸收度积分值,在12小时内基本稳定,RSD=1.27%(n=6)。

  2.9加样回收试验:称取已知含量的绵萆薜和粉萆薜各3份,分别精密加入薯蓣皂苷元,按供试品溶液制备方法制备,再按样品测定方法进行点样,展开,显色,扫描,并计算回收率。

  3、讨论

  3.1展开剂的选择:实验证明,展开剂以氯仿-丙酮(9.7:0.3)最为适宜,因氯仿极性比丙酮小,而丙酮在整个展开剂中起到调节比移值的作用,故丙酮比例过大或过小都会影响各斑点的分离,使斑点不清晰或有拖尾的现象。

  3.2近年来,对粉萆薜和绵萆薜中薯蓣皂苷元含量测定研究的报告较少,有利用反相高效液相色谱法四,而本方法方便、简单、准确,可用于该品种的质量控制。

日期:2010年9月9日 - 来自[色谱分析实例]栏目

薯蓣丸加减治疗慢性疲劳综合症69例

  慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome,CFS)是一种以疲劳、低热或自觉发热、咽喉痛、肌肉痛、头痛、关节痛、注意力不易集中、记忆力差、睡眠障碍和抑郁等非特异性表现为主的症候群。自1987年由美国疾病控制中心提出以来,已经受到医学界的广泛关注和研究。我们自2000年9月至2008年9月选用薯蓣丸治疗该病69例,疗效确切,特报告如下。1临床资料

  1.1一般资料 观察病例共69人,均为湖南中医药高等专科学校附属医院与茶陵县人民医院门诊就诊者。其中男38例,女31例;年龄最小者20岁,最大者5l岁,平均43岁;病程最短9个月,最长3年,平均l.6年;患者职业以办公室电脑操作员最多,共21例,经商者19例,教师l2例,医生5例,全职太太8例,工人3例,农民1例。

  1.2诊断标准 参照美国疾病控制中一t:,1994年修订的诊断标准:(1)临床评估不能解释的慢性疲劳,持续或反复发作6个月或以上;(2)同时兼有下列4项或4项以上的症状,且已经持续存在或反复发作5个月或6个月以上:①短期注意力或记忆力下降;②咽痛;③颈部或腋下淋巴结肿大、触痛;④肌肉痛;⑤无红肿的多关节疼痛;⑥新出现的头痛;⑦睡眠紊乱(失眠载嗜睡);⑧运动后疲劳持续超过24 h。

  1.3排除标准有明确引起疲劳的已知病因;有严重的神经性厌食或食欲亢进;严重的精神病;在疲劳状出现前2年或症状出现后任何时候有酗酒或药物滥用。

  2治疗方法

  采用张仲景方薯蓣丸加减口服治疗,4N为1疗程。药用:薯蓣90g,当归、桂枝、曲、干地黄、豆黄卷各30g,甘草84g,人参21g,川芎、芍药、白术、麦冬、杏仁各18g,柴胡、桔梗、茯苓各l5g,阿胶21g,干姜9g,白蔹6g,防风18g,大枣100枚。炼蜜和丸,每丸重约6—9g,共l00丸。口服,3次/d。加减法:偏重气虚,则四君子汤加重剂量使用;阳虚为主,可重用干姜,减轻麦冬、干地黄等用量,或可加附子温振阳气;血虚为重,则重用干地黄、芍药、当归、阿胶、大枣;偏重阴虚,则可重用麦冬、阿胶,轻用干姜。

  3治疗结果

  3.1  疗效标准参照《中医内科疾病诊疗常规》。痊愈:症状消失,自我感觉良好,工作、生活、学习恢复正常,随访半年内无复发;显效:症状消失,停药后又复发,或症状明显改善,工作、生活、学习基本恢复正常;有效:临床症状有所减轻;无效:服药前后症状无改善。

  3.2疗效结果全部患者服药顺利,无1例自动停药。共服药1—3个疗程,平均2个疗程。其中痊愈32例,显效21例,有效16例,总有效率达100%。治疗过程中,未发现毒副作用。

  附典型案例

     李某,女,41岁,办公室文秘。2005年9月6日就诊。患者由于长期伏案电脑操作,工作紧张,出现失眠、疲乏、健忘2年,曾多方诊治,诊断为“神经官能症”。口服过安神、镇静等中西药,症状可以缓解,但反复出现。近半年来上述症状明显加重,自觉发热,心悸,烦躁不安。检查血常规及肝肾功能、胸片、心电图等皆无异常发现。结合其病因、症状和检查结果等,诊断为慢性疲劳综合征。予以薯蓣丸口服治疗。用法如上所述。用药7d,症状明显改善,连续服药28 d,症状消失.自我感觉良好,工作、生活等恢复正常,随访半年未见复发。

  4体会

  慢性疲劳综合征(CFS)是亚健康状态的一种特殊表现,由于发生在中高收人、有较高的教育背景的三、四十岁人群较多,曾被形容为“雅皮士感冒”。目前医学界尽管已在病毒感染、免疫系统功能下降、神经内分泌紊乱、自主活动异常及营养代谢和神经精神障碍、遗传倾向等多方面进行了广泛的研究,但对其病因与病理机制均未达到共识。研究表明,长期工作紧张、竞争压力大、情绪不稳定和负性生活事件容易诱发本病。中医认为本病的发生与烦劳过度、情志抑郁、先天禀赋不足、大病后失于调理有关。笔者采用薯蓣丸治疗。该方出自《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治第六》,乃仲景设立治疗“虚劳风气百疾”的方剂。因脾胃为后天之本,气血营卫生化之源,故重用薯蓣健脾为主,人参、白术、茯苓、干姜、豆黄卷、大枣、甘草、曲益气调中,当归、川芎、芍药、地黄、麦冬、阿胶养血滋阴,柴胡、桂枝、防风祛风散邪,杏仁、桔梗、白蔹理气开郁,诸药合用,共奏扶正祛邪之功。临床应用本方治疗CFS,安全有效,值得进一步研究应用。

日期:2010年1月14日 - 来自[药物与临床]栏目
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薯蓣史话

  薯蓣即山药,又叫薯药、诸薯、山芋、延草、延章、玉延、大薯等,为薯蓣科植物薯蓣的块茎,能补虚、益智、延年、疗疾。

  薯蓣始载于《神农本草经》,被列为上品,在我国已有相当悠久的历史,《山海经》中就提到,“景山,北望少泽,其草多薯蓣”。早在周朝时期(约公元前ll世纪)已有种植。据史料记载,自公元前734年薯蓣作为贡品进献周王室起,至清朝末年,一直作为进献历代王朝之品,被誉为“国药之宝”。考古发现敦煌石窟中即有应用薯蓣的记载。汉代张仲景的医著《伤寒杂病论》列有薯蓣丸,以之命名,可见在方中的重要。

  关于薯蓣的作用及用法,《本草衍义》中提到,山药入药,其法,冬月以布裹手,用竹刀子剐去皮,于屋檐下风径处,盛竹筛中,不得见日色。一夕干五分,俟全干收之,惟风紧则干速。《别录》中提到,主头面游风,风头(一作‘头风’)眼眩,下气,止腰痛,治虚劳赢瘦,充五脏,除烦热,强阴。《药性论》中提到,补五劳七伤,去冷风,止腰痛,镇心神,补心气不足,患人体虚赢,加而用之。《日华子本草》中提到,助五脏,强筋骨,长志安神,主泄精健忘。《普济方》中提到,治心腹虚膨,手足厥冷,或饮过苦涩凉剂,晨朝未食先呕,或闻食即吐,不思饮食,此乃脾胃虚弱:山药一味,劁如小豆大,一半炒热,一半生用,为末,米饮调下。《本草正义》中提到,薯蓣能健脾补虚,滋精固肾,治诸虚百损,疗五劳七伤。第其气轻性缓,非堪专任,故补脾肺必主参、术,补肾水必君茱、地,涩带浊须破故同研,固遗泄仗菟丝相济。诸丸固本丸药,亦宜捣末为糊。总之性味柔弱,但可用力佐使。

  在东晋大书法家王羲之(321-379)的草本《山药帖》中已有了字词,后来唐代诗人韦应物(737-786)也有“山药寒始华”的诗和文学家韩愈(768-824)“山药煮可掘”的词。南宋陆游的诗句“久绿多病疏云液,近为长斋煮玉延”,描写的也是薯蓣。

  关于薯蓣的轶文趣事亦数不胜数。薯蓣在历史上就是作为滋养健身的上品对待的,有一则关于薯蓣能使人滋养强壮的轶文就很能反映出来。古时有一败军被围困在大山之中,围困的士兵也不敢冒进,只好围而不打,等待山中粮食耗尽,出来投降。结果,几十天过去了,并未见败军出来投降,他们认为被围士兵已全部饿死,便放松了戒备。突然,一天山中喊声四起,被困士兵个个生龙活虎,劲头十足,冲杀出来,杀得围困的军队一败涂地。原来这些被困的士兵在粮草将要耗尽之时,及时请教了当地老农,挖吃山中野薯蓣,不但没有饿死,反而筋骨强健,精力倍增,动作轻捷,并突出重围,一举获胜。尽管这则故事难以考据,但历史上的薯蓣粥,薯蓣丸,薯蓣饼等,确实证明山药的强身健体补虚抗衰的作用。据传说,这些突出重围的士兵为记念这种食物,就给这种植物取名为“山遇”。后来发现它有治病作用,就把“山遇”改成“山药”。

  在《西厢记》中也记载着一个故事。永和初年,有一采药人,来到衡山,道迷粮尽,只好到一崖下休息。忽见一老翁,看上去好像四五十岁那么年轻,对着石壁作书。采药人告之以饥,老者给他食物,乃薯蓣;并指教出山的路途。六日到家,还不知饥。方知为食物之奇工。

 

 

日期:2009年12月30日 - 来自[辨药识药]栏目

抗皱方七

  细辛、王竹、黄芪、白附子、薯蓣、辛夷、芎劳、白芷各7.5克,瓜蒌、木兰皮各15克,猪脂4000克。

  本方滋养肌肤,除黑抗皱。

日期:2009年12月30日 - 来自[中医美容]栏目
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回忆邓国彪同志二三事

        作者:中国科学院成都生物研究所研究员  赵德华  吴衍庸  徐成基  溥发鼎  
        邓国彪同志是中国科学院成都生物研究所原党委书记。四川宁南人,老红军。他投身革命,是因为他的父亲为反抗国民党的残酷压榨,率领宁南县农民举行暴动,结果失败被抓,砍头示众,还要“斩草除根”。邓国彪为逃命连夜渡过金沙江,逃到云南巧家。红军长征经过云南,他投奔红军,随队伍北上。经过抗日战争,解放战争,抗美援朝战争,戎马一生,战功卓著。1958年转业到中国科学院水土保持研究所任职,1966年从北京调到中国科学院成都生物研究所任所领导。邓国彪同志忠诚地贯彻执行党的各项方针政策和中国科学院的办院方针。他为成都生物所的发展呕心沥血,取得一批重大成果,为科学技术的不断创新,为发展国民经济作出了突出贡献,为成都生物所的快速发展起了重要的奠基作用。这里仅介绍他领导进行的薯蓣资源研究与开发取得重大成果的几件事。  
        急国家之所急  
        上世纪60年代,国家为降低人口迅速增长,急需大量避孕药物。生产甾体激素避孕药的原料是薯蓣。但我国薯蓣资源的总体情况并不清楚。于是,国家科委、中国科学院、卫生部下文,由中国科学院和卫生部主办,在全国开展薯蓣资源调查。  
        四川省的薯蓣调查工作省政府决定由中国科学院成都生物研究所承担。以邓国彪同志为首的所领导班子对这项国家任务,高度重视,全力以赴,精心组织。由25个科研院所、大专院校和有关单位的217名多学科的科技人员组成调查队,对四川132个县,进行深入调查研究。通过3年的艰苦努力,查清了四川产的薯蓣种类多、分布广、蕴藏量大、皂苷元含量高质量好,向国家提交了63份基本资料,圆满完成了任务。根据调查资料,四川成了我国主要的薯蓣资源供应地,为生产避孕药提供了大量薯蓣原料。  
        薯蓣是生产甾体激素类药物(如避孕药、氢化可的松、地塞米松、培他米松等)的主要原料。而甾体激素类药物的用途广,需求量大,仅次于抗生素居第二位。因此,需要大量薯蓣资源。而大量利用野生资源,必然会使其很快枯竭。为保证我国薯蓣资源可持续利用,保证我国甾体激素药物(如避孕药等)能正常生产,满足国家之需要,薯蓣调查刚结束,邓国彪同志就支持科技人员进行薯蓣由野生变栽培的研究。他经常顶烈日深入试验场地,关心引种栽培试验情况。科技人员在他的鼓励支持下,经过深入研究,成功地使薯蓣由野生变为家种,并研究出一套高产栽培技术,通过各种方式向全国推广。从此,我国栽培薯蓣的面积迅速扩大,使之成为取之不尽,用之不竭的资源,也使种植薯蓣的农民增加了收入,创造了很好的社会效益和经济效益。  
        重视资源的综合利用研究  
        上世纪60年代,中央提出“资源综合利用”方针,为切实贯彻,邓国彪同志鼓励科技人员在薯蓣综合利用上作文章。当时,我国生产薯蓣皂苷元(皂素)的厂家,只利用了薯蓣中的皂苷元,而薯蓣中50%左右的淀粉没有利用,当废液排掉,这样既浪费资源,又污染环境。科技人员提出进行“酶法、酸法综合利用薯蓣的研究”,既要提取薯蓣皂苷元,又要充分利用淀粉,不污染环境。当时有专家对这项新颖的酶、酸法工艺表示怀疑。邓国彪同志有久经沙场的智慧和经验,有长期在科研战线担任领导工作的实践,他认为科学研究要敢想、敢干。于是,鼓励科技人员大胆实践,利用酶、酸法进行薯蓣综合利用研究,组织了多学科的科技人员进行攻关。从小试到中试他都经常深入现场,了解情况,克服种种障碍,帮助解决问题。试验终于获得成功。该项研究,不仅提高了薯蓣皂苷元的收得率,而且利用薯蓣淀粉生产白酒,酿酒产生的废液经处理又可作肥料。这套工艺,提高了薯蓣资源利用率,对环境友好,很快在全国推广。获得全国科学大会奖。
        支持科技人员大胆探索  
        前苏联研究发现,薯蓣中的皂苷成分,有抗心血管疾病的效果,但没有研究出药物上市。除此之外,未见国内外有利用薯蓣治疗心血管疾病研究的报导。邓国彪同志认为,国外虽然没有研究成功,却对薯蓣资源的开发提供了一个很好的方向,四川薯蓣资源丰富,种类也多,我们应该深入进行研究。于是,他大胆地支持科技人员,组织多学科专家,利用川产“穿龙薯蓣”进行治疗心血管疾病的研究。试验需要的原料、材料、设备,他亲自过问,指挥有关机构,保证试验顺利进行。在原四川医学院等十几家单位的大力协作下,经过药理研究,安全试验,临床观察,用较短的5年时间,成功研制出安全有效的治疗心血管疾病的新药“穿龙冠心宁”(出口名“川生冠心灵”)。经批准,有4家制药单位投产,向国内外销售,取得很好的效益。这是世界上第一个用薯蓣皂苷研制成功治疗心血管疾病的新药,1978年获全国医药卫生科学大会奖。之后,他又支持科技人员对“穿龙冠心宁”生产工艺成功地进行改革,为甾体皂苷药物的规模化生产提供了新工艺。该项工艺研究1983年获中国科学院科技成果二等奖。  
        “穿龙冠心宁”的研究成功,为课题组尔后用黄山药薯蓣研制出蜚声中外的防治心血管疾病新药“地奥心血康”,奠定了一定的基础。  
        鼓励科技人员勇担重任  
        上世纪70年代,国家需要大量高效皮质激素药物“培他米松”。该药的抗炎、抗过敏、抗恶性淋巴组织等疾病的作用最强,抗炎作用是“氢化可的松”的35倍、“地塞米松”的3~5倍;是创伤、危重疾病急救的重要药物。可是,我国不能生产,要花高价(7000英镑/kg)从国外进口。上海第十二制药厂受命进行研制,但未成功。原因是合成工艺中最关键一步格氏物中间体“脱氢”是用有毒化学试剂二氧化硒,收率低(35%左右),成本高,药品质量不达标,而且污染环境。该厂委托我所用生物技术“脱氢”,用生物技术与化学方法相结合研制“培他米松”。邓国彪同志鼓励科技人员勇担重任,进行研究。试验需要的设备、装置,他指挥有关部门充分给予保证。他经常深入实验室,“十分关心研究工作的全过程,与研究人员心连心,共度难关”。科技人员在他的支持下成功地完成合成“培他米松”工艺全过程,解决了用微生物“脱氢”这一关键步骤。选育的“脱氢”微生物菌株,使“脱氢”物的收得率达70%,比化学法提高1倍,研制出合格的“培他米松”。上海第十二制药厂1976年投入工业规模生产“培他米松”,为我国医药工业填补一项空白,跻身世界先进行列。该项技术在上海、天津、大同、沈阳、浙江等地推广。从此,彻底改变了我国依赖进口的状况。生产“培他米松”的原料也始于薯蓣,我国资源丰富,不仅能大量生产该药供应国内,还大量出口,创造了很好的社会效益和经济效益。
日期:2009年10月12日 - 来自[人物专访]栏目

薯蓣皂苷类化合物体外抗肿瘤作用的研究

【摘要】  目的 探讨薯蓣皂苷类化合物的体外抗肿瘤作用。方法 用酸性磷酸酶法分别检测五种薯蓣皂苷对人源性肝癌BEL7404细胞株体外生长的抑制作用。结果 五种薯蓣皂苷对所试肿瘤细胞株的体外生长皆有一定的抑制作用,尤其是薯蓣皂苷5对肝癌细胞的生长抑制作用较强,抑制率达到90%以上。结论 体外实验表明五种薯蓣皂苷皆具有一定的抗肿瘤细胞生长作用,其中具有末端β半乳糖基的薯蓣皂苷5抗肿瘤细胞毒活性最高。

【关键词】  薯蓣皂苷;酸性磷酸酶法;抗肿瘤

    Study on antitumor effects of dioscin compounds in vitro

    MA Peng  CAO Tongtao  LIU Dong  et al

    College of Basic Sciences, Binzhou Medical University, Binzhou  256603

    【Abstract】 Objective  To examine antitumor activity of dioscins on tumor cell line in vitro.Methods  Acid phosphatase assay(APA) was adopted to detect in vitro the effects of these drugs on the growth of tumor cell line.Results  Five kinds of dioscins had inhibitory effects on tested tumor cell line. Especially,the growth inhibitory ratio of dioscin 5 on BEL7404 cell line reached above 90%, which was highest among them. Conclusion  Our results revealed that the five kinds of dioscin had potent inhibitory effects on BEL7404 cell line with different degree. Dioscin 5,which has βgalactosyl at the terminal, showed the strongest cytotoxicity on the growth of tumor cell line among them.

    【Key words】  dioscin, acid phosphatase assay(APA), antitumor effect

    薯蓣皂苷(dioscin)属于甾体皂苷,水解可以得到薯蓣皂苷元(diosgenin,Dio),Dio是合成甾体激素和口服避孕药的原料,主要存在于薯蓣科、蔷薇科、石竹科等植物的根茎中,其中尤以薯蓣科含量最多。近年来随着分离提取技术的不断发展,多种薯蓣皂苷被分离出来,并不断发现其新的生物活性,特别是在抗肿瘤、免疫调节、抗炎、降血脂、抗艾滋病等方面的作用引起了人们的重视[1],为了更好的认识薯蓣皂苷的药用价值,本研究采用5种薯蓣皂苷类化合物对人源肝癌BEL7404细胞株进行抗肿瘤筛查,探讨其体外抗肿瘤作用。

    1  材料与方法

    1.1  主要仪器及试剂  超净工作台(苏净集团生产)、二氧化碳培养箱(Hereus公司)、EL311酶标免疫检测仪(BioTek公司)、相差倒置显微镜(Olympus公司)。薯蓣皂苷类化合物其衍生物由中国科学院生态研究环境中心生物技术室提供,DMSO购自中国医药集团上海试剂公司,阳性对照药顺铂由齐鲁制药厂生产。

    1.2  细胞株  所用细胞株引自北京师范大学生命科学院,本室保存。

    1.3  药物溶液的配制  薯蓣皂苷类化合物以二甲基亚砜(DMSO)溶解,加入细胞前用培养液稀释至0.1~10  μg/ml,其中DMSO最高浓度为0.1%。阴性对照为0.1%DMSO。阳性对照组加入顺铂,最终作用浓度为1~4  μg/ml。

    1.4  酸性磷酸酶法(APA)细胞敏感性筛选实验  细胞传代至对数生长期后,经胰酶EDTA液消化,制成细胞悬液,按1×103/孔的密度接种于96孔板。培养24 h后待细胞完全贴壁后实验组加入先用DMSO溶解、再经RPMI1640培养液稀释至终浓度为1~10 μg·ml-1的薯蓣皂苷;空白对照组加入RPMI1640培养液;溶剂对照组加入经同样稀释的溶剂,含0.01%~0.1%DMSO。实验中每个浓度设8个平行孔,作用72 h后参考文献报道的酸性磷酸酶法(APA)[2]经EL311酶联免疫检测仪在405 nm波长处测定吸光度OD值,空白孔调零,实验重复三次,取平均值。

    1.5  统计处理  所得数据以均数±标准差表示,采用SPSS 10.0统计分析软件包进行统计学处理。

    2  结果

    2.1  薯蓣皂苷作用后对BEL7404细胞形态的影响  BEL7404细胞生长72 h后, 光镜下观察, 未给药组细胞贴壁并呈梭形或多边形生长, 细胞数目多, 铺满整个瓶底, 细胞生长状态较好。薯蓣皂苷高剂量组细胞贴壁状况不好, 部分细胞漂浮在培养液中, 细胞数目较对照组少。培养液中漂浮有细胞碎片, 少数细胞呈圆形贴壁, 细胞生长缓慢, 高倍镜下可见细胞内颗粒物质。

    2.2  细胞敏感性筛选  经体外APA法检测筛选,薯蓣皂苷类化合物对肿瘤细胞生长的抑制作用见表1。薯蓣皂苷1、2对人肝癌细胞株BEL7404的有效浓度从1 μg/ml开始,薯蓣皂苷3、4的有效浓度分别从4 μg/ml、6 μg/ml开始,但薯蓣皂苷1~4在所用药物浓度中对肿瘤细胞生长的最大抑制率均为50%以下。人肝癌细胞株BEL7404对薯蓣皂苷5较为敏感,药物起效浓度为2 μg/ml,其最大抑制率可达到90%以上。表1  薯蓣皂苷类化合物对BEL7404细胞的增殖抑制活性比较  浓度(μg·ml-1)A405nm 值 注:与空白对照相比, *P<0.05, △P<0.001

    3  讨论

    当今很多抗肿瘤药物由于开发和原料的关系,费用高昂,其广泛普及受到限制。毒副作用小、成本较低的天然来源活性抗肿瘤药物越来越受到青睐。以北京市为例,植物性抗肿瘤药在抗癌药物中销售量已居首位[3]。薯蓣皂苷是自然界中分布很广的一种天然有机化合物,原料来源广泛,价格低廉。近年来薯蓣皂苷的一些生物活性,特别是在抗肿瘤、免疫调节、抗炎、降血脂、抗艾滋病等方面的作用引起了人们的重视。

    目前已发现很多薯蓣皂苷对多种肿瘤细胞都具有抑制作用或强烈的毒性[4,5],如从植物柴姜黄(Dioscorea collettii var. hypoglauca)中分离出的薯蓣皂苷、薯蓣皂苷元A和纤细皂苷对子宫癌、K562、BEl7402、HL60等癌细胞株有明显杀伤作用[6]。从百合科百合属Lilium speciosum X.L  nobiissium中分离得到的27CH2OHMGMe薯蓣皂苷元3OαL鼠李吡喃糖基(1→2)O[βD葡萄吡喃糖基(1→4)]OβD葡萄吡喃糖苷在5 μg/ml浓度下抑制活性为40.3%,是laxogenin活性的10倍多[6]。Hu等[7]从薯蓣属柴姜黄中分离到的Protodioscin (NSC698 796)体外试验对60种人的癌细胞具有细胞毒性,其中对白血病、肠癌和前列腺癌细胞最为敏感。

    由于肝癌是国内发病率较高的一类肿瘤,故本研究5种薯蓣皂苷对人源性肝癌细胞株BEL7404的体外抗肿瘤作用进行检测,结果表明5种薯蓣皂苷对所选用的肝癌细胞株均有一定的增殖抑制作用。薯蓣皂苷1、2对人肝癌细胞株BEL7404的有效浓度从1 μg/ml开始,薯蓣皂苷3、4的有效浓度分别从4 μg/ml、6 μg/ml开始,但薯蓣皂苷1~4在所用药物浓度中对肝癌细胞生长的最大抑制率均为50%以下。人肝癌细胞株BEL7404对薯蓣皂苷5较为敏感,药物起效浓度为2 μg/ml,其最大抑制率可达到90%以上。构效关系分析表明,薯蓣皂苷5的末端β半乳糖基可提高其抗肿瘤细胞毒活性。深入研究薯蓣皂苷的抗肿瘤作用,从中筛选新的抗癌药物无疑是一个很有实际意义的课题。

【参考文献】
  [1] 王晓鹏,陆羡.薯蓣皂苷生物活性研究新进展[J]. 国外医学中医中药分册, 2004 ,26 (3) :138141.

[2] 陈学清,杨晓鸥,潘国宗,等.酸性磷酸酶法在体外化疗药物筛选中的应用[J].癌症,1998,17(6):477478.

[3] 王佩,李玉珍,齐有利.植物类抗肿瘤药成为市场主导[J].首都医药,2003,10(5):3334.

[4] Zengli Yu, Wenjie Li, Fuyun Liu. Inhibition of proliferation and induction of apoptosis by genistein in colon cancer HT29 cells[J].Cancer Letters, 2004, 215(2):159166.

[5] Gu G, Du Y, Linhardt RJ. Facile synthesis of saponins containing 2,3branched oligosaccharides by using partially protected glycosyl donors[J].J Org Chem,2004,69(16):5497500.

[6] Hu K, Yong AJ , Yan XS ,et al. Antineoplastic agents; I. Three spirostanol glycosides from rhizomes of Dioscorea collettii var. hypoglauca[J].Planta Medica,1996,62 (1) :573575.

[7] Hu K, Yao X. Protodioscin (NSC698 796): its spectrum of cytotoxicity against sixty human cancer cell lines in an anticancer drug screen panel[J].Planta Med,2002 ,68(4):297301.


作者单位:滨州医学院基础学院 滨州市 256603

日期:2008年12月27日 - 来自[2008年第31卷第5期]栏目
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9种薯蓣属药用植物的组织化学研究

【摘要】  目的 为资源品质评价工作提供快速检测指标。 方法 采用组织化学方法。 结果 薯蓣皂苷的合成及储存部位是维管束分布部位及其周围的基本组织。两年生的根状茎中含有薯蓣皂苷的红色液滴与一年生的相比体积明显增大,而且数量增多,染色更深。 结论 组织化学方法及其反应现象作为一个资源品质评价的快速检测指标,是切实可行的。

【关键词】  薯蓣属;药用植物;组织化学研究

*基金项目:本研究为湖南省自然基金项目“Ri质粒转化盾叶薯蓣产生薯蓣皂苷元研究”(编号02JJY2033)”的部分研究内容
     Study  on  the  histochemistry    of  9 Yams

    XIAO  Bing-mei,SHENG  Xiao-bang,PENG fei,et al.Hunan Agricultural University,Changsha 410208,China 

    【Abstract】  Objective  To provide a quickly detection indicator for the quality of resources.    Method  Histochemistry.    Results  The synthesis and stock parts included v.b.  and ground tissues around them.Red liquids of diosconin in two year’s rizhome obviously augmented, compared with those in one year’s rizhome, the number increased also, and deep colors were observed.     Conclusion    Histochemistry   reaction  is  thought  of  as  practical  to  be a quickly detection indicator for the quality of resources. 

    【Key words】  yams;plants for drugs;histochemistry

    进行薯蓣属植物的组织化学定位研究,明确薯蓣皂苷的积累规律及分布部位,对加速育种进程、缩短育种周期有着直接的指导意义。曹玉芳等对目前我国薯蓣皂苷元的主要原料植物盾叶薯蓣,进行了有关其根状茎中薯蓣皂苷元的积累与分布定位研究[1]。薯蓣属其他植物的组织化学定位研究未见报道。本研究根据薯蓣属(Dioscorea)在湖南省的资源分布情况,选择了2002~2005年实地调查采到的9种野生薯蓣(柴黄姜D. nipponica var.、绵萆薢D. septemloba、薯蓣D. opposita、福州薯蓣D. futschauensis、黄独D. bulbifera、细柄薯蓣D. tenuipes、日本薯蓣D. japonica、盾叶薯蓣D.zingiberensis、薯莨D.cirrhosa Loar),对其地上茎叶、地下部分(根茎或块茎)的组织化学反应进行了研究,并分析其与薯蓣皂苷元分布规律、含量高低的关系,以期为品质评价工作提供快速检测指标。

    1  材料与方法

    1.1  组织切片的制备    分析材料取自于上述9种植物在湖南中医药大学药用植物园栽培的植株,分别为一年生和两年生的茎及地下部分,地下部分又分为顶端与中段两个部位进行徒手切片。

    1.2  组织化学定位    依1.1法徒手切片后,用三氯化锑的浓盐酸溶液或三氯化锑的高氯酸溶液对切片进行显色[2],在xsj-2型生物显微镜(重庆光学仪器厂)及神州数码显微成像系统观察并照相。

    2  结果与分析

    按1.2中方法,切片与显色剂作用5~10min以后,其皂苷呈现粉红色到深红色的颜色反应。在植物不同的部位、不同结构的细胞内薯蓣皂苷的分布和积累情况不同。

    2.1  盾叶薯蓣根状茎顶端原分生组织和叶片上的腺毛没有显色反应,不含薯蓣皂苷[图1:(1)~(2)]。基本分生组织细胞都呈粉红色,显色比较均匀,其中远离顶端的细胞则显色较深,但细胞内不形成红色液滴[图1:(3)]。  

    (1)在一年生根状茎的成熟结构中,木栓层及栓化表皮均无显色反应。小型维管束分布部位的基本组织中薯蓣皂苷的积累与分布最丰富,细胞中红色液滴数量多而密集,大小不一,最大的红色液滴也分布在此部分,直径约36μm。韧皮部的筛管、伴胞和薄壁组织细胞以及维管束鞘细胞内都有薯蓣皂苷的积累与分布[图1:(4)]。

    (2)二年生根状茎与一年生根状茎的成熟结构中薯蓣皂苷的分布情况是一致的,但是红色液滴的大小比一年生根状茎中的大,直径约61μm、呈深红色[图1:(5)]。在没有维管束分布的基本组织细胞中,除了有较大的深红色液滴分布外,还有许多红色的小颗粒分布,而且整个细胞都显浅红色[图1:(6)],显示薯蓣皂苷的积累与分布较一年生的丰富。

    2.2  日本薯蓣的茎叶对三氯化锑的高氯酸溶液几乎不显色,说明地上部分薯蓣皂苷含量甚微或没有。其块茎横切面有显色反应,基本组织内分布少数较大红色液滴,直径约30μm;与其皂素含量测定较低的结果是一致的[3]。维管束鞘及其中的细胞显色较深,说明这是薯蓣皂苷积累和分布的主要部位[图2:(1)~(2)],与盾叶薯蓣相似。

    2.3  薯蓣、黄独茎叶及块茎的组织化学反应与日本薯蓣基本一致;柴黄姜、细柄薯蓣、绵萆薢、福州薯蓣茎叶及根茎的组织化学反应与盾叶薯蓣相似。薯莨的块茎没有薯蓣皂苷的显色反应,与其含量测定没有皂素的结果完全一致[3];但是其茎叶对三氯化锑的高氯酸溶液呈现微弱的阳性反应,可能含有其他种类的皂苷。

    3  讨论

    (1) 有关皂苷的组织化学研究,一些学者曾报道过西洋参[4] 、绞股蓝[5]、人参[6]中的人参皂苷在组织中的积累动态。笔者在对湖南省9种薯蓣属植物进行组织化学研究的过程中发现有类似的结果。根茎顶端原分生组织不产生显色反应,而其下面的基本分生组织呈粉红色,颜色反应比较均匀。随着根茎的伸长,细胞中含有薯蓣皂苷的液滴逐渐由小变大。在分化发育完成的根状茎中这种液滴的体积大、数量多,所呈现的颜色深。这些变化说明,处于强烈分生状态的细胞不合成薯蓣皂苷及其前体物质,而基本分生组织细胞内开始合成薯蓣皂苷的前体物质或少量的薯蓣皂苷,分化完成的薄壁组织细胞内则大量合成并积累薯蓣皂苷。可见,根状茎中段薯蓣皂苷的含量比根状茎顶端的含量高。

    (2) 块茎的组织化学研究显示,仅基本组织内分布少数较大红色液滴,直径约30μm,维管束鞘及其中的细胞显色较深,说明这是块茎内薯蓣皂苷积累和分布的主要部位。无论是块茎还是根茎,其中薯蓣皂苷的合成及储存部位是维管束分布部位及其周围的基本组织,可见多数明显红色液滴。没有维管束分布的基本组织中液滴较少,显浅红色。

    (3) 我们用组织化学方法研究还表明,两年生的根状茎中含有薯蓣皂苷的红色液滴与一年生的相比体积明显增大,直径从36μm增加到61μm。而且数量增多,染色更深。谭远友等对栽培的盾叶薯蓣根状茎中薯蓣皂苷元含量进行了测定,表明种植时期越长,皂苷元越高[7]。笔者研究结果与上述报道一致。

    因此,组织化学方法及其反应现象作为资源评价以及筛选育种过程中一个快速选择的检测指标,是切实可行的。

【参考文献】
  1 曹玉芳,林如,胡正海.盾叶薯蓣根状茎的发育解剖学和组织化学研究. 武汉植物学研究,2003,21(4):288-294.

2 Hardman R.Antimony trichloride as atest reagent for steroids,especially diosgenin and yamogenin in plant tissue.Stain Technol,1972,47(4):205-208.

3 肖冰梅,王朝晖,刘平安,等.反相HPLC法测定9种薯蓣的皂素含量.中华医药杂志,2006,6(6):610-612.

4 胡正海,苏红文.西洋参根的形态发育与主要药用成分积累的关系.中草药,1996,27(增刊):162-164.

5 林如,曹玉芳,胡正海.绞股蓝营养器官的结构及其人参皂苷的组织化学定位研究.西北植物学报,2002,22(4):796-800.

6 郑友兰,李向高.吉林人参与西洋参生药学和组织化学的比较研究.吉林农业大学学报,1986,8(4):30-35.

7 谭友远,余展深,齐迎春,等.栽培盾叶薯蓣中皂苷元含量与质量的动态变化.湖北民族学院学报(自然科学版),2000,18(1):17-18.


作者单位:1 410128 湖南长沙,湖南农业大学 2 410208 湖南长沙,湖南中医药大学药学院

日期:2008年7月4日 - 来自[2007年第7卷第7期]栏目
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