2011年10月11日下午17:30，第37届国际高效液相色谱及相关技术会议 （含仪器展览会）（HPLC 2011 Dalian）暨第18届全国色谱学术报告会及仪器展览会（18th NSEC）在大连世界博览广场二楼一号会议室顺利闭幕。本次会议共作了11个大会报告、十五个平行分会暨厂商讲座，举行了近两百场学术交流会，并有六十多家公司参加了仪器展。大会还评选出了PSC青年科学家奖和优秀墙报奖。
闭幕式由大会副主席许国旺教授担任主持。在接下来的颁奖环节中，首先颁发的是PSC青年科学家奖，获得本次青年科学家奖前三名的分别是Takayuki Kawai、Fangjun Wang、Huiming Yuan。同时还有7个提名奖，获奖者分别是Juanjuan Feng、Zhi-Guo Shi、Zhongping Huang 、Qiong-lin Liang、Yawei Wang、Mingxia Gao、Tao Jing。除了一等奖获得1000美金、二等奖获得500美金以外，其它七位分别获得了1000元人民币奖金，奖金均由安捷伦公司提供。
此外，组委会还从546个墙报中评选出了18位优秀墙报获得者，分别为Chaoou Shi、Xindu Ceng、Xin Wang、Yuan Wang、Min Li、Shaochun Zhu、Kai Zhang、Jun Shen、Jin-Ming Lin、Zhiliang Xiao、Sumin Zhao、Qiang Huang、Rongjie Fu、Peng Zhang、Jiaoran Meng、Kristof Hormann、Junpei Katagiri、Menglei Niu。Springer 为Kristof Hormann、Junpei Katagiri、Menglei Niu提供了价值200欧元的书券以鼓励他们的科学研究；而其余15位优秀大字报获奖者则得到了由岛津公司提供的1500元人民币奖金及奖杯。
接下来， HPLC 2013的主办方上台演讲并邀请大家共同参加2013年6月16-20日在阿姆斯特丹举办的HPLC会议，HPLC 2012 的主办方也发表了演讲，邀请大家参加6月16-21在 Anaheim 的会议。据了解，目前HPLC会议2016年前的举办地点均已确定。
之后，为了感谢会务组对本次大会所作出的努力，特邀其成员上台合影留念，并给予了鲜花和香槟的奖励。
HPLC会议由11位（其中美国5位、欧洲4位、日本1位、中国1位）科学委员会组成的常务委员会（PSC）进行管理。作为惯例，闭幕式上，Lindner教授代表PSC将其他10位委员自费购买的水晶猫头鹰赠与本届大会主席，以此表示对其辛劳操办会议的肯定和感谢。
最后，传承HPLC会议的惯例，大会以摇铃开始，也以摇铃表示圆满结束！
2011年10月9日，正逢第37届国际高效液相色谱及相关技术会议 （含仪器展览会） (HPLC 2011 Dalian)在大连世界博览广场如火如荼举办之际，安捷伦科技有限公司在大连成功举办了媒体见面会，中国色谱网作为媒体支持方应邀出席。
在本次安捷伦媒体见面会中，我们可以分享到安捷伦科技产品的几项最新分离技术新亮点：
1. 智能化模拟技术（ISET）----更胜一筹的方法转移
安捷伦推出了采用智能化模拟技术（ISET）的 Agilent 1290 Infinity LC —--世界上首款真正通用的液相色谱系统，只需点击一次鼠标，就可以执行 HPLC 和 UHPLC 方法并得到一致的色谱结果。来自安捷伦的 ISET，不仅仅是科学，更是模拟的艺术。
很多实验室的分析方法受到法规的制约，各个液相色谱的延迟体积、流速、耐压程度、柱外体积、采样速率、灵敏度都不相同，基于以上问题，造成了目前仪器与仪器之间的分析方法无法转换，需要重新开发方法才能得到相同的数据，同时该分析方法还需要得到验证。
自从Agilent公司在两年前推出1290 Infinity后，就一直在考虑如何实现分析方法之间的无缝转移。现在，Agilent 1290 Infinity系统可以通过软件ISET技术来模拟Agilent 1100 LC、Agilent 1200 LC、Agilent 1260 Infinity LC、Agilent 1220 Infinity LC、以及其它LC等系统上的梯度行为，然后在Agilent 1290 Infinity上运行得到与之相同的分析数据。
智能系统模拟技术ISET的技术优势在于：1）加速方法转移：方法转移无障碍，简单使用鼠标选定原始开发所有的液相色谱系统，即可模拟该系统。2）使投资更安全: 用ISET运行现有的经典分析方法，同时充分利用1290 Infinity LC的UHPLC速度，分离度与灵敏度。3）获得更高的生产率: 利用UHPLC性能加速方法开发，之后再利用模拟目标系统来微调优化方法，从而确保分析方法在目标系统上能够获得预期结果。
ISET技术不仅在Agilent现有的液相色谱平台之间实现方法转移，同样该软件技术也能够与其他品牌的色谱产品之间实现分析方法的转移。ISET技术使得Agilent 1290 Infinity系统不仅能够使用小颗粒技术达到快速、分离度高的UHPLC性能，同时还可兼顾常规分析并获得与常规液相色谱系统相同的分离结果。
例如有很多研发实验室使用Agilent 1290 Infinity快速将方法优化好之后，这时需要将该方法转换到常规的分析仪器上如Agilent 1200液相，转化过程中由于系统体积不一样，方法在转换后还需要调整。ISET技术的主要作用就在于在Agilent 1290 Infinity实现Agilent 1200的梯度性能，方法无需再进行调整。
常言道 “人中吕布，马中赤兔”，十分形象的比喻了Agilent 1290 Infinity与ISET技术的结合。如果将Agilent 1290 Infinity的推出比作是‘人中吕布’，那么，ISET技术便可形容为‘马中赤兔’。不论是‘吕布’还是‘赤兔’都是绝品，两者的结合更加能够体现出Agilent 1290 Infinity系统技术的领先地位，在性能上又将重新定义行业的标准------世界上首款真正通用的液相色谱系统。
2. 宽动态范围（High Dynamic Range – HDR）与高灵敏度的最新完美结合
宽动态范围与高灵敏度是痕量杂质定量中最关注的性能，亦是以往相互矛盾的两个因素。安捷伦创新的HDR(High Dynamic Range)技术，以简单灵活的方式和巧妙的设计，解决了灵敏度与动态范围的相互折中。采用HDR技术，可以在灵敏度提高15-30倍的同时，将现有紫外检测器的动态范围拓展30倍。对于需要进行杂质和主成分同时定量的用户，采用HDR技术不仅可以显著提高痕量杂质的检测灵敏度，还可以由此改善痕量杂质定量的精度与数据质量，而且可以同时进行主成分的准确定量。因而，用户一次进样即可完成痕量杂质与主成分的准确定量。现有用户亦可添加适当的部件而实现HDR的功能，从而充分保护安捷伦用户的投资，体现了安捷伦一贯服务用户的价值理念。
3. 仪器控制框架技术（ Instrument Control Framework , ICF),
安捷伦专利的ICF技术是一种提供给其它LC供应商化学工作站并让其进行第三方软件控制安捷伦LC硬件平台的一种仪器驱动（instrument driver）。这种技术的诞生已由安捷伦公司在全球率先打破各家LC不能彼此控制且研发成本昂贵的技术壁垒。安捷伦创新开发出的这种用于液相色谱模块控制的全新模式，以此定义了仪器控制的新概念并建立了全新的标准，使得所有主流色谱数据软件供应商都可以免费获得对安捷伦仪器的控制能力。即插即用的简便方式，使得第三方软件通过ICF可简单方便地、直接并全面控制安捷伦液相色谱仪器的所有功能特性。
截止2011年8月，沃特世和戴安等LC供应商已公开宣布，他们已可提供他们的液相工作站中对安捷伦公司基于ICF公共开放平台的LC控制软件驱动（driver），已实现对安捷伦1100、1200、1260 Infinity LC、1290 Infinity LC等众多LC模块的第三方软件控制，这就显示了安捷伦LC在此技术研发领域的领先性，同时彰显其LC硬件真正实现通用性的广大使用前景。
4. 突破性的iFunnel技术
安捷伦 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS系统突破性的iFunnel技术，保证了灵敏度更胜一筹,同时可完成定性和定量检测，并具有40,000分辨率及亚1ppm的质量精度，每秒可采集50张图谱。独创 iFunnel 技术彻底变革了大气压离子采样过程，在获得不可比拟的检测灵敏度的同时，进一步确保了试验结果最佳的准确性、重现性和可靠性，尤其适用于药物代谢、生物药物鉴定、干血斑分析、食品/环境安全监测、蛋白质组学/代谢组学等对灵敏度与准确性具有更高挑战的研究领域。
5. GCMS及LC-QTOF的完美结合
作为GCMS及LC-QTOF的完美结合体，Agilent 7200 GC/QTOF气相色谱/三重串联四级杆飞行时间质谱仪是市场上唯一的气相色谱-四极杆-飞行时间高分辨质谱, 可提供高分辨及精确质量数的全谱质谱图；通过二级精确质谱图，进行痕量未知物的结构鉴定；其采用4GHz ADC 电路设计提供更高的采集速率 (32 Gbit/s)。
2010年安捷伦科技全球内完成对瓦里安的收购整合，历经一年的融合发展，全新安捷伦互补的产品线在材料测试领域展现出全新的生命力，色谱、质谱、光谱等产品在新平台推动下焕发出勃勃生机。应对技术挑战、保持领先优势，安捷伦还将为用户提供更具优势的全新行业解决方案，包括医药/生物医药研发和生产、生命科学研究和学术研究，临床研究、食品安全、环境、法医鉴定、石油化工和材料科学等市场。安捷伦将一如既往地“追求无限，创造卓越”，为业界提供更全面的测试测量产品线、更加完善的解决方案，让世界变得更加美好！
2011年10月9日，第37届国际高效液相色谱及相关技术会议 （含仪器展览会） (HPLC 2011 Dalian) 暨第18届全国色谱学术报告会及仪器展览会(18th NSEC)在大连隆重开幕之际，PerkinElmer公司新品发布会座无虚席。
第2届大连国际色谱学术报告会及仪器展览会(2nd DISEC)即将拉开帷幕 ，大会包含：第37届国际高效液相色谱及相关技术会议及仪器展览会 (HPLC 2011 Dalian) 和第18届全国色谱学术报告会及仪器展览会 (18th NSEC) 。目前已公布星海附近地图和大连色谱会议日程简表。
星海附近地图
气相色谱是具有高分离效能、高选择性、高灵敏度、分析速度快、定性定量准确、应用范围广泛、样品用量少等特点的一种新型通用分离分析技术。它在分析空气和废气中的如CO2、CH4及一些痕量污染物中有着很广泛的应用。垃圾填埋场产生的填埋气中的许多成分诸如CO2、CH4及一些VOCS都可以通过调整和选择最佳操作条件如：载气流速的选择、载气的选择、柱温的选择、柱形和柱长的选择来进行分离和分析。气相色谱法在垃圾填埋气分析中有着广泛的应用。
垃圾填埋气一般用气相色谱法来进行监测。
垃圾填埋气的主要气体是指CH4和CO2。国外的资料表明，在一个典型的垃圾填埋场一般CH4的含量可达45%~50%，而CO2的含量可达40%~60%，我国由于垃圾中食品垃圾含量高，含水率也比国外要高。因此，我国的垃圾填埋气中CH4含量要比国外的高。有研究表明：深圳市垃圾填埋气中CH4含量为62.2%，而CO2的含量为34.7%。必须对垃圾填埋气主要气体进行监测。
对于CH4和CO2的监测分析方法国家并没有一个标准，目前国外主要用便携式气体分析仪进行分析。但也可以用气相色谱法进行分析。
1.仪器及设备
上海灵华仪器有限公司GC-9890B气相色谱仪，配热导池检测器，SD-2020色谱数据工作站，高纯氮气，100毫升医用注射器。
2.气相色谱分析条件
玻璃填充柱一根，柱长2m，柱内径3mm，内载40~60目G.D.X-502（天津化学试剂二厂），载气为高纯氮气，柱流量60ml/min，柱温30℃，气化室温度120℃，检测器温度120℃，池电流50mA，进样量0.5ml。
在这些条件下，所测气体组分采用保留时间进行定性，外标峰高法进行定量。由于二种气体均为不活泼气体，它们与采样器玻璃注射器之间无明显吸附解吸现象发生，所采集的气体样品可保留较长时间，样品浓度变化较小，对测定结果无显著影响。另外，由于本方法是采用注射器从现场直接采样，采样时间短具有可瞬间采样的优点，适合气体发生量的测定工作。本方法在采样过程中不需要加入任何气体吸附剂，无吸附回收率问题，故准确度很高。
垃圾填埋气痕量气体的气相色谱监测
垃圾填埋气中包括许多微量气体，尽管这些微量气体的浓度很低，但其毒性强，对环境和人体健康的危害很大。微量气体大多是挥发性有机污染物（VOCS）。在一些发达国家如美国已将一些微量的芳烃化合物和卤代化合物作为垃圾填埋场空气的常规监测项目。我国邹世春等人通过对广州第二垃圾填埋场进行监测，共检测出了多达63种VOCS，其中有16种为美国国家环保局（USEPA）优先控制污染物，包括苯、甲苯、乙苯、氯乙烯、氯仿、氯苯等污染物[7]。这表明在垃圾填埋场空气中存在着可产生三致作用的毒害性有机物，并使垃圾填埋场有可能成为较严重的污染源。
1.苯系物的气相色谱法监测
1．1 原理
用活性炭吸附采样管富集空气中的苯、甲苯、乙苯、二甲苯等后，加二硫化碳解吸，经DNP+Bentane色谱柱分离，火焰离子化检测器测定，以保留时间定性，峰高外标法定量。
1．2 仪器及设备
气相色谱仪：具有火焰离子化检测器，色谱柱长2m，内径3mm不锈钢柱，柱内填充涂附2.5%DNP及2.5%Bentane的Chromosorb W HP DMCS（80~100目）；空气采样器：流量0~1L/min；活性炭吸附采样管。
1．3 色谱条件
柱温：64℃；气化室温度：150℃；检测器温度：150℃。
载气氮气流量：50ml/min；燃气氢气流量：46ml/min；助燃气空气流量：320ml/min
在这些条件下，进行实验测定。先配制苯系物的标准储备液，然后进样测定，绘制标准曲线。
2 .非甲烷烃的气相色谱法测定
2．1 主要仪器设备和试剂
（1）GC-9890型气相色谱仪（上海灵华仪器有限公司），氢火焰离子检测器（FID）；（2）TD-1型热解吸仪；（3）活性炭吸附采样管，长10cm，内径6mm，壁厚0.8~1mm；（4）注射器，1ul，5ml，100ml；（5）TDP-1000型大气采样器，采样流量0~1L/min；（6）正己烷标准溶液。
2．2 色谱分析条件
硅烷化玻璃微球（60~80目）不锈钢填充柱：柱长3m，进样器温度170℃，检测器温度170℃，辅助温度160℃，柱温75℃，载气流量（N2）30VmL/min，燃气流量（H2）30Ml/min，助燃气（O2）流量300ml/min；进样量：直接进样1Ml。
2．3 正己烷标准气体的配制
以N2为空白稀释气体。吸取1uL正己烷标准溶液于100ml充有N2的注射器中，待完全挥发，充分摇匀，此注射器中的气体为标准源气。再吸取1ml标准源气于另一有氮气的注射器中，摇匀，该气体即为定性和定量分析是的标准气体。
醛酮污染物的气相色谱测定
1. 试剂和标准样品
甲醛、乙醛、丙烯醛、丁醛和苯甲醛均为分析纯，正戊醛为优级纯，丙酮、丁酮和苯乙酮均为分析纯。2，4-二硝基苯肼，AR；二硫化碳，AR，现用现蒸；双蒸水用前现蒸。2，4-二硝基苯肼吸收液：用1mol·l-1硫酸溶解适量2，4-二硝基苯肼固体，制成饱和溶液，用1/10（V/V）二硫化碳提取两次。吸收液应在采样前48h内制备纯化。
2. 仪器及其条件
气相色谱仪为上海灵华仪器GC-9890。色谱柱为SE-54毛细柱，长25m，内径0.32㎜；检测器为电子捕获检测器。柱温220℃恒温；气化温度270℃；检测器温度375℃；载气为N2,40ml·min-1,分流比1：50。进流量1μl。
3.实验方法
采用两支U型多孔玻璃板吸收管串连采集空气样品，吸收管内装入10ml 2，4-二硝基苯肼吸收液。采样装置为空气采样器，转子流量计以皂膜流量计校准。采样速度为0.5～1.0 ml·min -1,采样时间为10～60 min.
样品采集后，定量转移到100 ml分液漏斗中用2×5ml CS2萃取。有机层转移到25 ml容量瓶中，以CS2定容到25 ml。用相对保留时间定性，用外标法定量。
【摘要】 目的 建立RP-HPLC对葛根芩连片中黄芩苷含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(Stable Bond Analytical 4.6×250mm，5μm)，流动相为甲醇-0.2%磷酸水(50：50)，流速为1.0ml/min，柱温30℃，检测波长280nm。结果 操作简单，结果准确，平均回收率为96.48%。结论 本法操作简便、准确、重现性好，可用于葛根芩连片中黄芩苷含量的测定方法。
【关键词】 葛根芩连片;黄芩苷;RP-HPLC
[Abstract]Objective To set up a method for determining the content of baicalin in Gegen Qinlian Tablets with HPLC.Methods Chromatography was performed on a Agilent ZORBAX SB-C18(Stable Bond Analytical 4.6×250mm，5μm),with a mixture of methanol-0.2% phosphoric acid(50:50) as the mobile phase.The detection wavelength was 280nm ,and the column temperature was maintaned at 30℃,and the flow rate was 1.0ml/min.Results The mean value of recovery rate is 96.48%.Conclusion This methed was shown to be simple, accurate, with a good reproducibility and could therefore be used for the quality control for Gegen Qinlian Tablets.
[Key words] Gegen Qinlian Tablets;Baicalin;RP-HPLC
葛根芩连片是由葛根、黄芩、黄连、炙甘草四味中药材组成的中成药制剂，具有解肌清热、止泻止痢的功效，用于湿热蕴结所致的泄泻、痢疾等症[1]。其中黄芩为该中成药中的君药，故在质量控制时选用测量黄芩中主要有效成分黄芩苷的含量。本文采用HPLC方法对葛根芩连片中的黄芩苷进行了含量测定，获得较为满意的效果，并结合PDA检测器对样品中黄芩苷色谱峰的光谱纯度进行了有效的定性。
1 实验部分
1.1 仪器
Waters 2695高效液相色谱仪(Waters2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站)，超声波清洗器(KQ2200DB，40kHz，80W，上海新苗医疗器械制造有限公司);混合纤维素酯微孔滤膜(孔径：0.45μm)，电子分析天平(Sartorius BS 224 S), SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。
1.2 试剂与材料
甲醇(色谱纯，20070315112)，乙醇(分析纯，20070827093)，黄芩苷对照品由中国药品生物制品鉴定所提供(批号110715-200212，供含量测定使用)，水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。葛根芩连片(河南禹州市药王制药有限公司，批号分别为081005、081010、081012)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性考察
Agilent ZORBAX SB-C18 (Stable Bond Analytical 4.6×250mm，5μm)色谱柱;流动相：甲醇-0.2%磷酸水(50：50)，流速：1ml /min，柱温30℃，检测波长280nm，在此色谱条件下，理论塔板数大于7000，分离度大于1.5，进样量为10μl。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取黄芩苷对照品适量，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.483mg/ml的黄芩苷对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取供试品10片，研细，混匀，精密称取相当于平均每片的样品重量，置50ml容量瓶中，精密加入70%乙醇50ml，摇匀，称定重量，超声处理(功率200W，频率50Hz)30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。以上所配溶液的HPLC色谱图见图1。图1 样品HPLC色谱图
黄芩苷对照品(A)、供试品(B)及阴性样品、(C)HPLC色谱图
光谱纯度分析及样品中黄芩苷色谱峰定位分析：选择与黄芩苷对照品相对应的色谱峰进行光学纯度分析，以保证此色谱峰的光谱纯度较高，没有共流物的出现。
PDA光谱纯度分析设定波长为210～400nm全波段扫描。由以上四个光谱纯度分析图上可以看出：在供试品11.050min的色谱峰位置与黄芩苷对照品光谱有较大相似，如图2、图3;将两者光谱重叠得到PDA光谱区别图(如图4)，由图4中可以看出，区别曲线在0.000范围内波动较小，并且由PDA数据校正产生纯度与阈值角度上来看 (如图5) ，PDA光谱匹配角度为0.678，PDA匹配的阈值角度为1.272，光谱匹配角度<匹配的阈值角度，说明该色谱由较高光谱纯度;由PDA光谱纯度分析图中可以看出，自动阈值角度>色谱纯度角，说明该色谱峰的光谱纯度较高，没有光谱共流物的出现，可以作为样品中黄芩苷进行定量分析。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取“2.2”项下的黄芩苷对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配成系列浓度的对照品溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱，以峰面积为纵坐标，以黄芩苷浓度为横坐标进行回归计算，得线性回归方程为Y=2.82×104X～9.24×104，r =0.9998(n=5),结果表明在19.32～96.60μg/ml范围内与黄芩苷的峰面积呈良好的线性关系。图2 黄芩苷对照品PDA光谱图图3 供试品在11.050min色谱的光谱图图4 对照品与供试品PDA光谱区别图图5 PDA光谱纯度分析图
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10μl，重复进样5次，并进行测定，测定其RSD为0.75%，表明精密度良好。
2.6 稳定性试验
按“2.3”项下供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μl，立即进样，分别于0、4、8、16、24、48、72h进样，测定其RSD值为0.83%(n=6)，结果表明，供试品溶液在48h内稳定性良好。
2.7 重复性试验
按“2.3”项下供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，制备5份供试液，精密吸取供试品溶液10μl，并进行测定，RSD为0.91%(n=5)，说明供试品溶液的重复性良好。
2.8 加样回收试验
取葛根芩连片(批号 081012)10片，按照“2.3”项下制备供试品溶液，制备同时加入适量对照品溶液，用70%乙醇稀释至刻度，再取0.5ml此溶液至10ml容量瓶中，加入甲醇定容，进行测定，记录色谱，计算其RSD=0.62%(n=6)，其结果见表1。 表1 加样回收率实验
2.9 黄芩苷的含量测定
取3个不同批号的葛根芩连片按“2.3”项下制备供试品溶液，分别进样10μl，测定(n=3)，取三次测定平均值，结果见表2。
3 讨论
3.1 2010版
《药典》对黄芩供试品制备采用回流提取，本实验供试品制备采用超声提取方法，采用3批葛根芩连片分别制备供试品，结果显示黄芩苷含量符合药典要求，超声提取方便、节约时间，提取效率高，适合于黄芩样品供试品的制备。表2 3批样品的含量测定结果
3.2 检测波长的确定
经过检测器在200～400nm波长段扫描紫外吸收光谱图，发现黄芩苷在280nm和317nm处有两个吸收峰，由于在280nm处为最大特征吸收峰，因此选择280nm处为黄芩苷的测定波长。
3.3 流动相的选择
实验曾选用甲醇-水-磷酸(47:53:0.2)、甲醇-0.2%磷酸水(50：50)、乙腈-0.02%磷酸(47:53)为流动相，经实验比较，选用甲醇-0.2%磷酸水(50：50)为流动相，色谱分离较好，理论塔板数较高，达到色谱系统性要求。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典，2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005: 211-212.
2 温华珍,肖盛元,王义明,等.黄芩化学成分及炮制学研究.天然产物研究与开发, 2004, 16(6): 575-580.
【摘要】 目的 建立五味保肝丸定性定量质量标准。方法 薄层色谱法定性鉴别五味子和丹参的存在, 高效液相色谱法确定降酶丸中五味子甲素含量。结果 定性鉴别五味子和丹参, 方法简便，图谱清晰;高效液相色谱法测定含量，结果准确,阴性无干扰。结论 该实验方法可作为降酶丸的定性定量质量标准指标。
【关键词】 五味保肝丸;薄层色谱;高效液相色谱;五味子甲素
五味保肝丸由五味子、丹参等中药组成, 是我院传统中药自制制剂(鲁卫药制字Z02080175)，具有敛阴、活血、降酶功效, 用于乙型肝炎、转氨酶升高等病症, 临床应用近30年，疗效确切。为控制该制剂质量, 除常规检测项目外,实验研究五味子、丹参两味药的薄层色谱法鉴别方法，以及该制剂主要药效成分五味子甲素含量范围，为该制剂质量控制指标提供定性定量实验依据。
1 主要仪器、试剂与药材
1.1 主要仪器
Agilent 1100型高效液相色谱仪 (美国)， JA2003型电子分析天平(上海)，KQ100型超声波清洗器(昆山)。
1.2 主要试剂
五味子甲素对照品(中国药品生物制品检定所)，甲醇为色谱纯(美国),水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。
1.3 主要药材
五味保肝丸由本院制剂室提供，其他实验用药材取自本院中药库，经鉴定五味子为木兰科植物五味子Schisandchinensis(Turcz.)Bail的干燥成熟果实，丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.干燥根及根茎。阴性对照品实验时现制。
2 薄层色谱定性鉴别
2.1 五味子定性鉴别
取五味保肝丸2g，研碎，加氯仿30ml，超声提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液;另取缺五味子的处方比例量的其他药材细粉2g，按上述方法,制成五味子阴性对照液。再取五味子甲素对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液;吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚(30℃～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15：5：1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干。置紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，五味子阴性对照液无此斑点。
2.2 丹参定性鉴别
取五味保肝丸3g，研碎，加乙醚20ml，超声处理10min，过滤，滤液挥干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液;另取缺丹参的处方比例量的其他药材细粉2g，按上述方法,制成丹参阴性对照液;再取丹参酮ⅡA对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19：1)为展开剂，展开、取出、晾干。日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，丹参阴性对照液无此斑点。
3 五味子甲素含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：Agilent ODS柱(4.6mm×150mm,5μm)。柱温：30℃,流动相：甲醇-水(80：20),流速：1.5ml/min，检测波长：250nm。理论板数按五味子甲素计应不低于3000,五味子甲素峰与相邻峰分离度符合要求。
3.2 对照品溶液制备
精密称取减压干燥至恒重的五味子甲素对照品6.32mg,加甲醇使溶解,并定容至25 ml;制成浓度为0.2528mg/ml的对照品溶液。
3.3 样品液制备
取五味保肝丸适量，粉碎过四号筛, 置硅胶于干燥器中干燥24h后备用。取样品粉末约2g，精密称定,置150ml 具塞三角烧瓶中,准确加入氯仿50ml,称重，超声提取40min, 水浴温度45℃。提取液放至室温, 再称定重量，用氯仿补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，置水浴上蒸干,残渣加甲醇分次溶解定溶于10ml 容量瓶中, 得样品液。
3.4 阴性对照溶液制备
取不含五味子的处方比例量的其他药材细粉，照“2.3”项方法制成阴性对照溶液。
3.5 系统适应性试验
按“2.1”项下条件，将对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液分别进样10μl进行测定, 结果对照品溶液和供试品溶液色谱图在相应的保留时间处均有最大吸收峰，供试品溶液相邻峰无干扰;阴性样品色谱图中,在与对照品色谱相应的保留时间处无色谱峰出现,表明该制剂中其他组分对五味子甲素的测定无干扰。
3.6 线性关系考察
精密量取“2.2”步对照品溶液2 ml，加甲醇定容10ml。分别准确吸取上述溶液2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0μl 依次进样,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,五味子甲素进样量(μg) 为横坐标,绘制标准曲线。回归方程为: 五味子甲素Y=2643.253X-3.756，r=0.9999(n=5)，线性范围0.1264～1.5168μg。
3.7 精密度试验
精密吸取“2.2”步对照品溶液(浓度为0.2528mg/ml)2μl, 按“2.1”色谱条件连续进样5次, 测定峰面积RSD为1.42%(n=5)。精密度良好。
3.8 稳定性考察
精密吸取对照品溶液(浓度为0.2528mg/ml)2μl,分别于配制后0、2、4、8、16、24h进样,测定面积的RSD为1.81%，表明供试品溶液在24h内稳定。
3.9 重复性试验
精密称定研细的同一批(090901)样品粉末2.0g共5份,按“2.3”项方法制备5份样品溶液,各吸取10μl进样,测定面积的RSD值为0.99%(n=5)。表明方法重复性较好。
3.10 加样回收率实验
精密量取已知含量五味子样品液(五味子甲素浓度为0.04136μg/μl)5.0ml 6份, 分别精密加入浓度为0.2528mg/ml的对照品溶液0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，并分别用甲醇定溶至10.0ml。分别进样10μl，测定,并计算回收率。结果见表1。表1 加样回收测定结果
3.11 样品含量测定结果
取5批五味保肝丸(降酶丸)样品，批号分别是：100312、100427、100604、100712、100802,按“2.3”步方法分别制备样品液，并进样，测定，计算，5批样品五味子甲素含量分别为0.3075、0.3121、0.2976、0.2684、0.2713mg/g。按5批样品含量测定结果，暂定降酶丸中五味子甲素含量不低于0.250mg/g。
4 讨论
五味保肝丸的主要药效成分为五味子，其主要有效成分为五味子甲素、五味子乙素。《中国药典》以五味子甲素含量作为五味子药材质量的评价指标[1],因此，以五味子甲素含量作为该制剂的制备工艺和质量控制指标是可行的。
五味子甲素为脂溶性成分,能溶于乙醇、甲醇,极易溶于苯、氯仿、乙醚。因此,在提取样品中一般都采用乙醚、氯仿、石油醚等有机溶剂超声提取后,挥干有机溶剂,残渣加甲醇定容来制备样品溶液。本实验采用氯仿超声提取，甲醇定容来制备样品溶液，五味子甲素加样回收率为97.64%,RSD=1.41%(n=6)，效果满意。
HTLC法测定五味子及其制剂中有效成分常用的流动相多用不同比例的甲醇-水[2～4]，也有用乙腈-水[5，6]，乙腈-甲醇-水[7]和甲醇-四氢呋喃-水[8]。对比试验结果表明，选用甲醇-水(80：20) ，供试品溶液相邻峰分离度能满足实验要求。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典，2005年版一部.北京：化学工业出版社，2005.
2 曹红,刘云.反相高效液相色谱法同时测定蚁肝丸中五味子甲素和五味子乙素的含量.药物分析杂志, 1997,17(4):238-240.
3 沙瑞国, 袁海龙, 李仙义, 等.高效液相色谱法测定肝泰胶囊中五味子甲素的含量.时珍国医国药,2001,12(5):398-399.
4 张大富,王玮.RP2HPLC色谱法测定降糖颗粒中五味子甲素、乙素的含量.湖南中医药导报, 2002,8(4):150-151.
5 傅黎春.降酶丸质量标准研究.广州医药,2000,31(2):78-79.
6 夏新华,邹龙.宝乐静颗粒剂质量标准的研究.中国实验方剂学杂志,2000,6(3):8-10.
7 崔兰贵, 王火, 朱铁梁, 等.HPLC法测定更年安片中五味子甲素和五味子乙素的含量.中草药,2001,32(5):409-411.
8 刘峰群, 贺承山, 李正明,等.高效液相色谱法同时测定肝得宁-Ⅱ号丸中五味子甲素和五味子乙素的含量.中国中药杂志,2000,25(3):157-158.
【摘要】 目的 利用薄层色谱法和高效液相色谱法鉴别哮喘药中是否添加了茶碱、盐酸麻黄碱、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松。方法 采用薄层色谱法、高效液相色谱法鉴别。结果 供试品中未检出以上4种非法添加物。结论 薄层色谱鉴别方法简便可靠，高效液相色谱法更灵敏精确，两种鉴别方法都可为打击在哮喘类中药中擅自添加茶碱、盐酸麻黄碱、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松成分的违法行为提供有力依据。
【关键词】 茶碱;盐酸麻黄碱;醋酸地塞米松;醋酸泼尼松;薄层色谱法;高效液相色谱法
哮喘病在我国是一种常见疾病,其发病率较高。有些药厂为了谋利，宣称自己生产的是纯中药制剂，并大肆宣扬其“特效、速效”，且无毒副作用，但其中往往非法添加了化学成分,常见的有茶碱、盐酸麻黄碱、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松。为了有效打击这种制假掺假的不法行为，保护服药患者用药安全，笔者建立了对以上4种成分的薄层色谱法和高效液相色谱法检出方法，并对实际药品进行了检测。
1 仪器与试药
Sartorius R200D电子分析天平，硅胶GF254薄层板，岛津LC-20AT型高效液相色谱仪。对照品：茶碱、盐酸麻黄碱、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松均由中国药品生物制品检定所提供。供试品A：清肺消咳颗粒(来源：某军队医院自制制剂，批号：081012)。供试品B：利肺片(来源：长春某药业有限公司，批号：20080902)。所用试剂：甲醇、三氯甲烷、乙醇、醋酸乙酯、浓氨均为分析纯，乙腈为色谱醇，水为纯化水。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱法
2.1.1 对照品溶液和供试品溶液的制备
对照品溶液的制备：称取茶碱、盐酸麻黄碱、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松对照品各适量，分别加甲醇使溶解，制成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备:称取供试品A一日口服量3袋，供试品B一日口服量6片，置乳钵中研细，分别加甲醇适量，超声10min使溶解，过滤，取续滤液作为供试品A溶液和供试品B溶液。
2.1.2 薄层分析
分别用定量毛细管吸取茶碱对照品溶液、盐酸麻黄碱对照品溶液、醋酸泼尼松对照品溶液、醋酸地塞米松对照品溶液，供试品A溶液、供试品B溶液、四种对照品(1：1：1：1)混合溶液5μl，在距GF254薄层板底边1cm处点样，以三氯甲烷-水饱和的醋酸乙酯-乙醇-浓氨(30：10：6：0.5)为展开剂，当展开距为7cm时，取出薄层板，在空气中挥干后，置254nm紫外灯下检视，检视后立即喷茚三酮溶液进行显色。
2.1.3 结果
见图1。供试品A溶液和供试品B溶液均未有斑点出现。图1 薄层色谱法1.茶碱对照品溶液;2.盐酸麻黄碱对照品溶液;3.醋酸地塞米松对照品溶液;4.醋酸泼尼松对照品溶液;5.供试品A溶液;6.供试品B溶液;7.四种对照品(1：1：1：1)混合溶液
2.2 高效液相色谱法
2.2.1 茶碱-盐酸麻黄碱
2.2.1.1 色谱条件
色谱柱ZORBAX C18 (4.6mm×250mm,5μm);流动相：乙腈-水(0.02mol/L NH3 H2O)=10：90;流速为1ml/min;检测波长为215nm;进样量为5μl。
2.2.1.2 对照品溶液的制备
称取茶碱、盐酸麻黄碱对照品各适量，分别加甲醇使溶解，然后混合制成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.1.3 供试品溶液的制备
同薄层色谱法“2.1.1”制备方法。
2.2.1.4 混合溶液的制备
将对照品溶液与供试品溶液以1:1混合后,作为混合溶液。
2.2.1.5 高效液相色谱法分析
对照品溶液中,茶碱的出峰时间为6.3min,盐酸麻黄碱的出峰时间为8.7min,混合溶液中同样发现在相同时间出峰的色谱峰，并且此峰与其他杂质峰也能得到较好分离，而供试品溶液中未发现相同时间出峰的色谱峰。其中供试品A溶液的高效液相色谱图，见图2。
2.2.2 醋酸地塞米松-醋酸泼尼松
2.2.2.1 色谱条件
色谱柱ZORBAX C18 (4.6mm×250mm,5μm);流动相：乙腈-水=45：55;流速为1ml/min;检测波长为250nm;进样量为5μl。
2.2.2.2 对照品溶液的制备
称取醋酸地塞米松、醋酸泼尼松对照品各适量，分别加甲醇使溶解，混合后制成每1ml中约含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2.3 供试品溶液的制备
同薄层色谱法“2.1.1”制备方法。
2.2.2.4 混合溶液的制备
同高效液相色谱法“2.2.1.4”制备方法。
2.2.2.5 高效液相色谱法分析
对照品溶液中,醋酸地塞米松的出峰时间为4.2min,醋酸泼尼松的出峰时间为7.1min,混合溶液中同样发现在相同时间出峰的色谱峰，并且此峰与其他杂质峰也能得到较好分离，而供试品溶液中未发现相同时间出峰的色谱峰。其中供试品A溶液高效液相的色谱图，见图3。 图2 高效液相色谱图图3 高效液相色谱图3 讨论薄层分析中，先将硅胶GF254薄层板置于254nm紫外灯下检视，是因为茶碱、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松可以在紫外灯下观察到荧光斑点;检视后立即喷茚三酮溶液,是让盐酸麻黄碱进行显色,盐酸麻黄碱在紫外灯下无法观察到荧光斑点。薄层色谱法试验通过比较供试品和对照品的荧光斑点，确保了定性结果的准确性，整个分析方法具有简便的特点，并且斑点清晰，专属性及重现性好;高效液相色谱法比薄层色谱法更加灵敏、准确、可靠，因此，在使用薄层色谱法检测出某成分的存在后，可进一步使用高效液相色谱法进行确认。利用薄层色谱法快速检验出假劣药品方法简便、快速、实用性强，所用的薄层板可以市购，也可以自己制备，比较适用于基层单位对药品的快速检验。薄层色谱法和高效液相色谱法都可作为哮喘类中药制剂中擅自添加茶碱、盐酸麻黄碱、醋酸地塞米松、醋酸泼尼松的有效鉴别方法，能为此类假药的查处提供有力的技术参考依据。
