主题：表达

    研究人员已经发明了一种在活的生物体中开启某些基因的遥控形式的方法。尽管该方法可能会在将来具有某些临床上的意义，但就目前而言，它主要是为人们提供了一种有趣的研究工具，用以在某个动物的组织中无需用药或其他侵入性的方法即可操纵基因的表达。该Rube-Goldberg样的技术包括了将无线电波送入组织，使得埋置于细胞内的金属纳米颗粒被加热。对温度敏感的离子通道通过开放通道让离子流入细胞而作出反应，从而发送出一种引导标靶基因表达的化学信号。在其原理验证的研究中，Sarah Stanley及其同事们展示，这种方法可被用来产生一种细胞内的钙信号，它刺激某个经过设计的胰岛素基因的表达，从而带来培养细胞中的胰岛素的产生和释放。在表达有该经过设计的胰岛素基因的肿瘤的小鼠试验中，接触无线电波会引起小鼠体内的肿瘤分泌胰岛素并降低其血糖浓度。

　　情侣出行、活动或者居家穿衣的搭配也在向对方倾诉无尽的爱意，“我爱你，从头到脚”。如果说真爱的情人是一体的，那么我们大可把一对情侣的着装搭配看成一个人去设计，今天你们要穿套装还是混搭？穿同色系还是玩撞色？这就是情侣装的搭配诀窍：你们是一体的，你们是一个人。

　　文艺风情

　　《晚秋》中的文艺范儿搭配，男女两人无太大差异和对比，可视为“套装”穿上“套装”就像双胞胎，走到哪别人都看得出你们是情侣，两个人心情也会如这搭配一样一致起来。

　　快乐出游

　　出去踏青郊游？是不是想穿点带元素的衣服呢？条纹应该是最适合这个季节的。《春娇与志明》中二人出游时的搭配是非常不错的参考！

　　情侣撞色

　　无论你走到何方，我都能感受到你的火热的心，《春娇与志明》中结尾两人服装的大撞色也深深地表达了这一情感，没有不协调，怎么看他们都像是命中注定的“冤家”，撞色也是那样的精彩动人！

　　熟男熟女

　　《一天》中如此的德克斯特与艾玛俨然一副热恋的情侣，从笑容到着装，这样的搭配如果放弃掉电影本身的情结会让人误以为是二人订婚的样子。

　　蓝色的改良短旗袍搭配裸色高跟鞋端庄复古，德克斯特一身浅色的正装搭配多了一份悠闲和惬意。

　　法式优雅

　　《一天》中穿上德克斯特的蓝色，艾玛更艳丽动人，让这蓝色也增色不少！纵使此刻两人境遇差距很大，但是冥冥之中的默契谁都无法言说。穿上纯色的T，让你的她穿上你的颜色，这样的搭配不会错！

　　恋上小清新

　　《一天》中脱掉德克斯特的颜色，换上复古小清新的裙装，艾玛与德克斯特走在一起依旧如此和谐，重点在于颜色的选择，低饱和度的颜色，增添了一份清新和复古感，与德克斯特的文艺范儿相符，两人的搭配放在一起又多了一份愉悦感。

　　学院情怀　

　　《一天》中失去艾玛的德克斯特，如果可以回到初识的这个时候，那便是最美！德克斯特的休闲西装搭配复古皮鞋的随性之感与艾玛的复古裙装站在一起俨然一对初恋的情人。

　　若情侣尝试这种搭配，男生要注意西装的选择，选择休闲西装，松垮一点，才能配上这种懵懂的感觉。

来自第二军医大学东方肝胆外科医院的研究人员历时5年，发现肝癌AAH高表达与术后复发关系密切，这一研究成果对肝癌AAH高表达的手术患者具有重要意义，医生可根据患者手术后AAH的表达水平预测肝癌复发的危险度，进而筛选出复发的高危人群。这一研究成果公布在国际肝脏病研究权威期刊《Hepatology》上。
文章的通讯作者是第二军医大学东方肝胆外科医院沈锋教授，沈锋教授从医多年，曾获国家，军队和上海市科技进步和医疗成果奖6项，为首批解放军总后勤部“科技新星”，上海市“曙光学者”等。
肝癌仍是目前临床上治疗效果最不理想的肿瘤之一。中国是肝癌高发国家，每年新发病例30万，占全球肝癌新发病例的半数以上。在这篇文章中，研究人员发表了一项有关肝癌不典型腺瘤样增生（AAH）高表达预示肝切除术预后关系的最新成果：肝癌AAH高表达预示肝切除术预后更差，且极易引起复发。  
研究人员首先利用8名肝癌术后患者功能基因的表达谱cDNA芯片进行杂交实验，筛选出AAH在肝癌组织中的异常高表达，随后通过专门实验，在40名肝癌患者身上验证AAH的高表达，最后再对一组233例施行过根治性肝癌切除术、且表达不同水平AAH的病人进行长期的观察性研究。
多因素结果分析表明，AAH表达是生存和复发的独立危险因素，其高表达病人的生存时间明显短于低表达患者。根据国际上采用的肝癌巴塞罗分期标准，在肝癌A期，特别是其中肿瘤直径不大于5cm的患者是外科手术的较好对象，对这类病人的预后预测具有更大意义。沈锋课题组的实验结果表明，对于这类病人，AAH高、低表达者的术后复发时间分别是26.7±1.6个月vs51.9±2.8个月，1到3年的生存率分别是97%和52%vs100%和90%。因此，这个分子极可能是早期肝癌病人的一个更准确的预后标志物。  
这一研究成果对肝癌AAH高表达的手术患者具有重要意义，医生可根据患者手术后AAH的表达水平预测肝癌复发的危险度，进而筛选出复发的高危人群。同时，这种分子也可能是肝癌治疗的一种新靶点，为下一步的药物研发和有针对性的预防治疗提供依据，可提高肝癌治疗的总体疗效，延长病人的生命。
近期解放军军事医学科学院的研究人员也在人类染色体的特殊位置发现了一个容易导致肝癌的易感基因区域。这一重大发现不但有助于科学家们深入解析肝癌的发病机制，而且为肝癌的风险预测、早期预防和个体化治疗以及新型高效药物的筛选提供了理论依据和生物靶标。
研究人员通过全基因组关联分析，从整体基因组水平进行系统研究。经过近两年“大海捞针”式的艰辛搜寻，终于在全基因组30亿碱基中发现一个长度为24万碱基的肝癌易感基因新区域染色体1p36.22，包含UBE4B、KIF1B和PGD三个基因，提示这些基因的相关通路参与了肝癌的发病机制。研究同时表明，如果该基因组区域发生变异，会使人更容易患肝癌。
（生物通：万纹）

2007年11月07日 中华消化杂志 2007年 27卷 3期158-161 医学空间（MEDcyber.com）11月7日消息，CpG岛甲基子表型阳性的散发性大肠癌中K—ras蛋白呈高表达，提示多基因同时甲基化与K—ras蛋白的激活表达密切相关，两者的关系表明表遗传学机制可以间接引起遗传学改变。
自大肠粘膜上皮起源的恶性肿瘤称为大肠癌。是最常见的消化道恶性肿瘤之一。临床常见血便或粘液脓血便，大便形状或习惯发生改变，腹痛，腹部包块等。
中华消化杂志3月第3期刊登一项研究，研究者对71例散发性大肠癌采用甲基化特异性PCR法行p14^ARF、人类mut-s同系物1（hMLH1）、p16^INK4a、6-氧-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）和肿瘤甲基化位点1（MINT1）共5个基因启动子甲基化的检测，确定CpG岛甲基子表型；进行K-ras、APC、P53、Bax和转化生长因子βⅡ受体（TGFβRⅡ）共5个基因的免疫组化检测。分析散发性大肠癌CpG岛甲基子表型和基因表达之间的关系。探讨CpG岛甲基子表型阳性的散发性大肠癌的基因表达特征。
复旦大学附属肿瘤医院腹部外科蔡国响等研究人员研究显示71例散发性大肠癌中，CpG岛甲基子表型阳性率为21．1％（15／71）；K-ras、APC、P53、Bax和TGFβRⅡ蛋白阳性表达率分别为43．7%（31／71）、42．3％（30／71）、47．9％（34／71）、71．4%（50／70）和59．2％（42／71）。CpG岛甲基子表型和APC、P53、Bax、TGFβRⅡ蛋白表达均无显著相关性，但与K-ras蛋白表达显著相关，CpG岛甲基子表型阳性者K—ras蛋白阳性表达率显著高于CpG岛甲基子表型阴性者（66．7%比37．5％，P=0．043）。
因此可见CpG岛甲基子表型阳性的散发性大肠癌中K—ras蛋白呈高表达，提示多基因同时甲基化与K—ras蛋白的激活表达密切相关，两者的关系表明表遗传学机制可以间接引起遗传学改变。

2007年11月06日 中华肿瘤杂志2007年 29卷 2期 96-100 医学空间（MEDcyber.com）11月6日消息，低氧能降低A2780细胞对泰素的敏感性，其机制可能是通过HIF-1α调控mdr-1α调控P-gp的表达而实现的。
卵巢癌是发生于卵巢组织的恶性肿瘤。临床上可出现下腹不适、腹痛、腹部肿块、月经紊乱、压迫等症状。
中华肿瘤杂志2月第2期刊登一项研究，研究者对常氧（21％O2）和低氧（1％O2、5％O2）培养的A2780细胞，应用免疫细胞化学、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）和四氮唑蓝（MTT）法等，检测HIF—lα mRNA、蛋白以及mdr-1、P-gP的表达水平和对泰素的敏感性。利用RNA干扰（RNAi）技术，构建针对HIF-1α的短发夹状干扰RNA真核表达载体pSiHIF-1α，并转染A2780细胞，检测转染后HIF-1α的基因沉默效果、对mdr-1和P-gP表达的影响及其对泰素敏感性的改变。研究低氧、低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对卵巢癌细胞多药耐药基因（mdr-1）及其编码P-糖蛋白（P-gp）表达的调控，探讨低氧影响卵巢癌细胞对泰素的敏感性及其机制。
武汉市中心医院妇产科黄磊等研究人员研究显示低氧能显著诱导A2780细胞HIF-lα mRNA和蛋白表达水平的上调，HIF-1α mRNA的表达水平与低氧浓度无关，而HIF-1α蛋白表达呈低氧浓度依赖性；低氧能诱导A2780细胞的表达上调，且呈低氧浓度依赖性；低氧A2780细胞对泰素的敏感性较常氧明显降低（P＜0．05）。pSiHIF-1α转染后，低氧A2780细胞能显著下调HIF-1α的表达，明显抑制mdr-1和P-gp的表达，其对泰素的敏感性显著增加。
因此可见低氧能降低A2780细胞对泰素的敏感性，其机制可能是通过HIF-1α调控mdr-1α调控P-gp的表达而实现的。

2007年10月29日 中华风湿病学杂志 2007年11卷4期 262-266 医学空间（MEDcyber.com）10月29日消息，GRβ及剪接因子SRp30c在GC抵抗的发生中可能发挥重要作用，检测患者外周血PBMC中GRβ及SRp30c的表达有可能预测患者对激素治疗的反应，给临床治疗提供进一步的依据。
系统性红斑狼疮是一种较常见的累及多系统多器官的自身免疫性疾病，由于细胞和体液免疫功能障碍，产生多种自身抗体。
中华风湿病学杂志四月第四期刊登一项研究，研究者根据患者对GC反应的敏感程度分为GC抵抗组和GC敏感组，分别用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测两组患者与健康人外周血PBMC中GRα、GRβ及剪接因子SRp30c的mRNA表达量；免疫细胞化学（ICC）方法测定外周血PBMC的GRα、GRβ蛋白水平的表达，并分析GR及SRp30c变化的意义及与各临床指标之间的关系。研究系统性红斑狼疮（SLE）糖皮质激素（GC）抵抗患者外周血单个核细胞（PBMC中糖皮质激素受体（GR）α、GRβ及剪接因子SRp30c的表达及其与临床指标的相关性，以探讨GC抵抗发生的可能机制。
安徽医科大学第一附属医院风湿免疫科李居一等研究人员研究显示，①SLE患者与正常对照者PBMC均有GRα、GRβ的mRNA及蛋白的表达，以GRα占大部分；②GC抵抗组GRβ和SRp30c的mRNA表达量均明显高于GC敏感组及正常对照组（P〈0．05），GC抵抗组GRβ阳性细胞数也明显高于GC敏感组及正常对照组（P〈0．05），但三组GRctmRNA表达量及阳性细胞数比较差异无统计学意义；③两组的临床指标中肾脏受累时间、尿蛋白定量（24h）、血浆白蛋白水平及SLE疾病活动指数（SLEDAI）评分差异有统计学意义（P〈0．05），但采用多因素Logistic回归分析后，显示只有GRα和SRp30c的mRNA表达量是GC抵抗发生的独立危险因素。
因此可见GRβ及剪接因子SRp30c在GC抵抗的发生中可能发挥重要作用，检测患者外周血PBMC中GRβ及SRp30c的表达有可能预测患者对激素治疗的反应，给临床治疗提供进一步的依据。

动脉粥样硬化免疫机制 的研究进展

南华大学心血管病研究所 杨永宗
2005.8.15.
一、前   言
AS病变的炎症性质以及一系列炎性因子在AS病变形成中的关键作用几已成为共识。
但数以百计的危险因素如何启动炎症过程而促成AS病变发生发展却还是个未解的问题。
天然免疫的模式识别理论的提出将开辟AS病变发生发展机理研究的新领域。
二、天然免疫模式识别理论要点
美国免疫学家Janeway提出天然免疫的模式识别理论，强调天然免疫对获得性免疫的指导和调控作用，指出抗原递呈细胞（APC）是紧密地连接天然免疫与获得性免疫的桥梁。
天然免疫系统通过APC上的模式识别受体(PRR)识别病原相关分子模式(PAMP)，区别“自己”与“非己”及无害“非己”和病原体相关“非己”,并籍抗原递呈和共刺激信号两个环节赋予获得性免疫识别“自己”“非己”的能力。
病原相关分子模式 （pathogen-associated molecular pattern） 
PAMP是指一大组或某几大组病原体所共有的一种分子模式(molecule pattern)，而非某一特定结构。
PAMP是病原体的保守结构成分且对其生存是必要的,如发生突变,将使病原体死亡或丧失致病性。
PAMP不同于宿主机体自身成分。

Janeway提出模式识别理论，将天然免疫针对的主要靶分子信号称为病原相关分子模式（Pathogen-associated molecular pattern,PAMP），将其相应的识别受体称为模式识别受体（pattern recognition receptor,PRR）。
PAMP主要指广泛存在于病原体细胞表面的分子标志，如酵母细胞壁上的甘露糖、以及各种细菌的细胞壁成分如脂多糖、多肽糖、胞壁酸等，这些分子在进化过程中都趋于保守。
模式识别受体 (pattern recognition receptor)
与PAMP相应的识别受体称为模式识别受体（PRR）。
已克隆的PRRｓ大多属于Toll样受体(TLRs)家族, 清道夫受体特别是SR-A1也具有PRR功能。
TLRs广泛表达在各种淋巴细胞表面，包括非特异性免疫细胞巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞，和特异性免疫Ｔ淋巴细胞和Ｂ淋巴细胞。
其中单核细胞分化的树突状细胞是唯一表达所有5种TLR的细胞,也是唯一表达TLR3的细胞。 
1.病原微生物感染
相关病原体的研究包括肺炎衣原体、幽门螺旋杆菌、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、肝炎病毒等。
其中肺炎衣原体在AS斑块发生中的作用已有较多研究，但现在认为单一的病原体感染在AS中的作用可能很小，而多重感染并存则是影响心血管疾病的重要因素。
内毒素的作用
Control Group
Endotoxin Group

Group vWF(%)   tPA activity PAI activity
       (Iu/mg protein)  (Au/mg protein)
Endotoxin 0.556±0.048*   0.227±0.048*  5.36±0.28*
Control 0.100±0.050   0.643±0.080  1.25±0.40

* P<0.05 compared with control.
内毒素对内皮细胞功能的影响
Control
Coronary Artery from Patient
  肺炎衣原体
A1: Control
A2: 106 IFUs/L AR-39
B1: 10 mg/L LDL
B2: 10 mg/L LDL+ 106 IFUs/L AR-39
C1: 10 mg/L oxLDL
C2: 10 mg/L oxLDL+ 106 IFUs/L AR-39
肺炎衣原体对细胞胆固醇蓄积的影响
A1:对照组    A2:cpn
B1:LDL       B2:LDL+cpn 
C1:ox-LDL    C2: ox-LDL +cpn
肺炎衣原体对C57 BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化的影响

多重感染并存
流行病学资料显示，冠心病患病危险度与感染病原体的种类多少相关，而且存在多种感染是冠心病患者发生心肌梗死的独立危险因素。

现在认为单一的病原体感染在AS中的作用可能很小，而多重感染并存则是影响心血管疾病的重要因素。
Circulation. 2001;103:45-51. Prospective Study of Pathogen Burden and Risk of Myocardial Infarction or Death
2.氧化修饰低密度脂蛋白
   A 对照组      B 实验组
小鼠腹腔巨噬细胞
猪主动脉平滑肌细胞
人U937细胞
透射电镜照片
人外周血单核巨噬细胞

人THP-1细胞

Proc. Natl. Acad. Sci. USA Vol. 92, pp. 3893-3897, April 1995
T lymphocytes from human atherosclerotic plaques recognize oxidized low density lipoprotein

AS患者血清和斑块可检测到oxLDL抗体。
斑块中分离出的CD4+ T 细胞可识别oxLDL。
oxLDL抗体可分为IgG和IgM型。IgG抗体水平增高与AS病变程度加重相关，而IgM型oxLDL抗体与AS病变呈负相关。

用oxLDL免疫兔可减少40%～50%AS病变，在apoE和LDLR敲除小鼠的研究中也获得类似结果。
Shaw 等人用肺炎链球菌感染LDLR缺乏小鼠，诱导小鼠体内高水平IgM型oxLDL抗体产生。伴随脾脏内B淋巴细胞持续分泌IgM增高，AS病变程度降低。
用apoB-100肽链免疫apoE缺陷小鼠，可减少60%的AS病变形成，并特异性增加IgG抗体水平[7]。

Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2003;23:879-884. Inhibition of Atherosclerosis in ApoE-Null Mice by Immunization with ApoB-100 Peptide Sequences

斑块内的OxLDL可影响DC的成熟和活化，氧化过程产生的溶血磷脂酰胆碱（LPC）可直接通过G蛋白偶联受体途径诱导DC成熟。
oxLDL还可以增加DC表面呈递抗原以及协同信号分子的表达。
The Journal of Immunology, 2002, 169: 1688–1695. Mature Dendritic Cell Generation Promoted by Lysophosphatidylcholine
3.热休克蛋白
HSP可与多种抗原肽结合产生免疫原性，诱导抗原特异性免疫反应。
Berberian 最先报道在人类和兔斑块中存在HSP70，而且HSP的分布与斑块中细胞坏死、脂质聚集相关。
Kleindienst 研究表明颈动脉的内皮细胞、平滑肌细胞和单核细胞HSP60表达量与AS严重程度呈正相关。
斑块中大量存在的T淋巴细胞对HSP60/65可发生特异性反应。
临床研究也表明HSP60抗体与冠状动脉疾病严重程度相关，是冠脉临床事件发生的重要危险因素。]
Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2002;22:1547-1559. Role of Heat Shock Proteins in Atherosclerosis
微生物HSP65/60和人HSP60的抗体之间存在交叉反应，抗微生物HSP65/60的抗体可以引发自身免疫反应。
除了广泛关注的肺炎衣原体和巨细胞病毒编码HSP60与人HSP60分子模拟作用。
除上述交叉反应引起免疫反应外，HSP可被TLR4识别通过天然免疫在AS发生中发挥关键作用。
Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2002;22:1547-1559. Role of Heat Shock Proteins in Atherosclerosis
4.β2糖蛋白I
β2糖蛋白Ⅰ是一种含326个氨基酸的血浆蛋白，主要合成部位在肝脏，一般以游离形式存在于血浆，少量与脂质结合。

β2GpI是抗磷脂综合症（APS）的主要抗原。多种炎症性疾病，包括AS、狼疮、APS血浆中都能检测到抗β2GpI抗体，人AS斑块内也检测到β2GPI。
DOMAIN STRUCTURE OF β2-GLYCOPROTEIN I

George用人β2GpI免疫LDLR-/-鼠，抗β2GpI抗体显著增高，血管内皮下较多CD4+T细胞浸润，AS斑块形成明显加快。

用β2GpI免疫apoE-/-鼠也同样显示斑块形成速度加快，抗β2GpI抗体水平增高。

Circulation. 1998;98:1108-1115. Induction of Early Atherosclerosis in LDL-Receptor–Deficient Mice Immunized With b2-Glycoprotein I
     用β2GpI免疫普通小鼠，再将其淋巴结和脾脏处的淋巴细胞注入LDLR-/-小鼠的腹腔，发现LDLR-/-小鼠早期AS斑块增加。说明β2GpI通过淋巴细胞在动脉粥样硬化的形成中发挥作用。
                                        Circulation. 2000;102:1822-1827. Adoptive Transfer of b2-Glycoprotein I–Reactive Lymphocytes Enhances Early Atherosclerosis in LDL Receptor–Deficient Mice
四、AS与天然免疫
天然免疫是机体的第一道防线，它通过天然免疫效应细胞和效应分子发挥作用。
天然免疫效应细胞包括单核/巨噬细胞、NK细胞，树突状细胞、肥大细胞、B1细胞等；
天然免疫效应分子则有炎症介质、补体等。
单核/巨噬细胞在AS发病中具有重要地位，其他效应细胞同样可能发挥一定作用。

Kristina用半定量PCR和免疫组化方法发现，人AS斑块中TLR1、TLR2、TLR4表达明显增加，同时也伴随有NF-κB的表达。

推测TLRs在斑块炎症活化过程中天然免疫机制发挥作用。
Circulation. 2002;105:1158-1161. Expression of Toll-Like Receptors in Human Atherosclerotic Lesions: A Possible Pathway for Plaque Activation
 TLR信号转导
 
TLR和PAPMs结合后形成二聚体,随后转接蛋白MyD88通过C末端的Toll/IL-1R（TIR）结构域与TLR的胞内段相互作用，介导LPS诱导的单核细胞或内皮细胞NF-κB活化，激活细胞因子基因转录，介导共刺激信号B7分子表达，进而通过APC而活化Ｔ