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陆英的GC指纹谱研究

来源:中国色谱技术网 作者: 2010-10-21

摘要: 来源:中国色谱技术网[摘要]目的:建立陆英气相色谱(GC)指纹图谱的研究方法。方法:采用GC法,以HP-5石英毛细管色谱柱,FID检测器,研究陆英的GC指纹图谱。结果:陆英的GC指纹图有11个共有峰,精密度和稳定性等均符合要求。[关键词]GC。...


来源:中国色谱技术网

  [摘要]目的:建立陆英气相色谱(GC)指纹图谱的研究方法。方法:采用GC法,以HP-5石英毛细管色谱柱,FID检测器,研究陆英的GC指纹图谱。结果:陆英的GC指纹图有11个共有峰,精密度和稳定性等均符合要求。结论:该方法准确、简单,为陆英的鉴别和质量检测提供了依据。

  [关键词]GC;陆英;指纹图谱

  陆英SambucuschinensisLindl.为忍冬科接骨木属植物,又名八棱麻、接骨木、八里麻等,多年生草本,产于我国南北各地,以根、茎、叶入药,是我国民间常用草药,有活血散瘀,祛风活络,发汗利尿之功效。用于治疗跌打损伤、风湿痛、脱臼、肾炎水肿、脚气水肿、荨麻疹。江西宜春应用陆英及其制剂治疗肝炎取得了显著效果。

  由于中药材的药效不是来自任何单一的活性成分,而基本上是多种活性成分,甚至与“非活性成分”的协同作用或“生克作用”。天然药物质量评价方法是对某一化学成分进行定性或定量分析,而对大多数中药来说,任何单一活性成分或指标成分都难以准确地评价中药的真伪和优劣,因而提出了指纹图谱检测标准。本文采用GC法建立陆英药材的指纹图谱,可作为其内在质量控制的标准。

  1、仪器与试剂

  Agilent6890N气相色谱仪(配有FID检测器、自动进样器),ChemStation工作站(Agilent科技有限公司),R-205型旋转蒸发仪(BUCHI公司),Sarturius-BS110S分析天平(北京赛多利斯天平有限公司),KQ-250DB型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。甲醇(色谱纯,TEDIA)。β-谷甾醇对照品β-sitosterol[DELTA

  (甙尔塔)天然有机化合物(中药有效成分标准品和对照品)研究中心]。10个批次的陆英药材(来源:1贵州,2湖南Ⅰ,3江西抚州Ⅰ,4江西抚州Ⅱ,5江西万载,6江苏Ⅰ,7湖南Ⅱ,8江苏Ⅱ,9江苏,10云南,经沈阳药科大学孙启时教授、江泽荣教授鉴定)。

  2、方法与结果

  2.1溶液的制备对照品溶液的制备:取β-谷甾醇对照品约10mg,精密称定,置50mL量瓶中,加甲醇适量使溶解并定容至刻度,摇匀,精密量取5mL置50mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,得20μg/mL的β-谷甾醇对照品溶液。

  样品供试液的制备:精密称取于60℃干燥40min的陆英药材2.00g,加95%乙醇100mL,索氏提取3h,乙醇提取液置旋转蒸发仪上减压蒸干后,残渣加甲醇适量溶解并转移至50mL量瓶中,最后加甲醇至刻度,摇匀,作供试液,进样前用0.45μm滤膜滤过,取续滤液,即得。

  2.2指纹图谱检测条件色谱柱:HP-5(3m×0.32mm,0.25mm膜厚);进样口温度:280℃;检测器温度:280℃;进样体积:1.0μL;炉温:200~280℃,程序升温保持5min,以10℃/min的速度升至250℃,保持5min,再

  以3℃/min的速度升至280℃保持15min;载气:纯氦;柱压3.5PSI;分流比20:1;氢气流速45mL/min;空气流速450mL/min。

  2.3参照物峰的选择将对照品溶液和样品供试液分别进样1μL,记录色谱图,对比保留时间可知S峰为β-谷甾醇(tR为min)。在样品供试液中加入对照品溶液,色谱峰增益结果也证明了上述推断的正确性。测得β-谷甾醇理论塔板数为165495。由于β-谷甾醇峰与其他峰分离较好,保留时间适中,而且在样品色谱图中相对稳定,所以,选定β-谷甾醇为参照峰建立指纹图谱。

  2.4精密度试验以湖南Ⅰ药材制备的样品为供试品,1d内连续进样5次,记录色谱图。记录各色谱峰的保留时间和积分面积。以β-谷甾醇的保留时间和积分面积为参照,换算出各共有峰的相对保留时间和相对积分面积,结果显示,样品供试液的分析结果稳定,共有峰的相对保留时间和相对积分面积相当一致,RSD均小于3%,表明仪器等整个检测系统的精密度良好。

  2.5溶液稳定性试验取湖南Ⅱ样品,按2.1中方法制备供试液,分别在制备样品后的0,2,4,6,12h进样测定,记录色谱图。计算各峰的相对保留时间和相对峰面积,各峰的相对保留时间的RSD小于1.0%,相对峰面积的RSD均小于5%。结果证明样品在12h内基本稳定。

  2.6重复性试验精密称取湖南Ⅱ样品,按2.1中方法制备供试液5份,并进行检测,记录色谱图,计算相对保留时间和相对峰面积的RSD,各峰相对保留时间的RSD均小于1.5%,相对峰面积的RSD均小于5%,结果表明方法重复性较好。

  2.7陆英对照指纹图谱的建立

  按照指纹图谱的建立方法,取已收集到的10个不同产地的陆英药材制备供试液,将供试液在气相色谱仪上进样分析,记录色谱图,将各色谱文件以*.AIA格式的文件导出,在《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》(国家药典委员会)软件中导入,得到陆英对照指纹图谱,共有11个共有峰,以β-谷甾醇的保留时间和峰面积为参照,得到11个峰的保留时间(T)、相对保留时间(RT)、峰面积(A)和相对峰面积(RA)。

  2.8不同产地陆英GCFP与对照指纹图谱的相似度

  将“2.7”项下测得的各产地的陆英的GCFP导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件,计算出各批次的陆英与对照指纹图谱的相似度,分别为0.93,0.95,0.74,0.97,0.98,0.98,0.96,0.97,0.92,0.85。其中3号样品和10号样品与标准CEFP相似度较低(相似度为0.85和0.74)。

  3、讨论

  3.1色谱柱的选择分别试验了DB-1,HP-5,HP-35等不同极性的毛细管色谱柱。DB-1,HP-35色谱柱在不同的温度下均出现较大的宽峰,色谱峰分离不理想,而HP-5柱的分离效果理想,所以选择HP-5柱。

  3.2柱温的选择由于陆英成分复杂,各组分难于分离,恒定柱温达不到理想的分离,因此,选择程序升温。实验中共选择了6种升温程序,最终确定本实验条件。

  3.3药材提取溶剂的选择分别以95%,75%,50%,25%乙醇为溶剂,按“2.1”项下方法制备陆英供试液,进样分析。发现以95%乙醇为溶剂制备样品所得的色谱图的峰数较多,各峰的分离情况较好,因此选择95%乙醇作提取溶剂。


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