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超声波提取大蒜总黄酮及鉴别

来源:《时珍国医国药》 作者:黄锁义 2008-10-28

摘要: 大蒜,百合科多年生草本植物大蒜Auium sativum。《名医别录》中指出,大蒜具有“散痛肿匿疮”,“除风邪,杀毒气”等功用。《新修本草》中说大蒜可“下气、消谷、化肉”。《本草纲目》称大蒜有“化腐朽为神奇”的作用,“能辟邪恶,消痈肿”。...


大蒜,百合科多年生草本植物大蒜Auium  sativum.L.的鳞茎。《名医别录》中指出,大蒜具有“散痛肿匿疮”,“除风邪,杀毒气”等功用;《新修本草》中说大蒜可“下气、消谷、化肉”;《本草纲目》称大蒜有“化腐朽为神奇”的作用,“能辟邪恶,消痈肿”。现代医学研究结果表明,大蒜中含有的氨基酸、维生素、大蒜素、黄酮类化合物等,对多种致病菌都有抑制或杀灭作用,可用于恢复疲劳、预防高血压病、预防动脉硬化、预防寒疟、预防感冒、预防高血脂症,其中所含的微量元素硒和硫,能够增强人体的免疫功能。同时可治疗痈疖肿胀、钩虫、蛲虫病、顿咳、痢疾、泄泻等。因大蒜含黄酮类等,有多种药用价值。

    近年来,超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道,表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明,利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速植物材料中的有效成分进入溶剂,从而增加有效成分的提取率,缩短提取时间,并且还可避免高温对提取成分的影响。超声技术应用于提取大蒜中黄酮类物质的研究尚未见报道,本文报道用超声波提取大蒜总黄酮及鉴别。

1  仪器与试剂

11  仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)UV-755B紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂)ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)

12  试剂95%乙醇AR;亚硝酸钠AR;硝酸铝AR;正丁醇AR氧化钠AR;三氯化铝AR;盐酸AR;氨水AR;镁粉AR;乙酸镁粉AR;冰醋酸AR;醋酸乙酯AR;芦丁标准品(中国药品生物制品检定所);广西百色市人民菜市市售大蒜。

2方法与结果

21  总黄酮成分提取取大蒜辦,烘干,粉碎。称取大蒜粉末约6 g,加80 m1 95%乙醇,超声波提取25 h,抽滤。滤渣再加80 m195%乙醇,超声波提取25 h,抽滤,合并两次滤液,减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml左右为止,放置250 ml容量瓶中,用60%乙醇稀释至刻度,得样品液。

22  测定方法依据以芦丁为对照品测定大蒜中总黄酮的含量,加入铝离子试剂,同时控制适宜pH值,使黄酮化合物与铝盐形成络合物,在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

23  定量实验一总黄酮的含量测定

231  波长的选择取样品液适量,在030 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下,经硝酸铝显色后,以试剂为空白参比液在420~700 nm波长范围测定络合物的吸光度,络合物于510 nm波长处有最大吸收,故测定时选用此波长。

232  标准曲线的绘制  分别精密吸取芦丁对照液(010 mg/m1)000050100200300400500 ml10OO m1容量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液o30 ml,摇匀,静置6 min;再加10%硝酸铝溶液030 m1,摇匀,静置6 min;再加4%氢氧钠溶液400 m1,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12 min,以试剂作空白参比液,于510 nm处测定吸光度。结果见表l

    根据上表得回归方程:A=0031 l+13518 4Cr=O999 9

233  提取物含量的测定精密吸取样品液500 ml,置1000m1容量瓶,按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0228,根据回归方程:A=-0031 1+13518 4C,计算样品中总黄酮的含量C=3833%,提取率远远高于醇提法。

234  回收率实验精密量取样品液2OO ml,加入标准芦丁对照品200 m1(010 mg/m1),同前样品测定方法操作测定吸光度,求出回收率为1019%。

24  定性实验一总黄酮的鉴別

241  颜色反应

    紫外光下呈色反应:取该样品溶液点在滤纸上,在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。

    浓氨水反应:取该样品溶液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏30 s,立即在紫外光下观察,呈极明显的黄褐色荧光斑点。

    三氯化铝反应:取样品溶液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液,吹干。在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄色荧光斑点。

    乙酸镁反应:取样品溶液点在滤纸上,滴加1%乙酸镁甲醇溶液,吹干,紫外光下呈黄色斑点。

    盐酸.镁粉反应:取乙醇提取液lml于试管中加镁粉,再加入浓盐酸数滴(1次加入),在泡沫处呈紫红色。

242  纸层析取样品溶液10txl点在滤纸上。用正丁醇:醋酸:水:415(体积比)为展开剂,上行展开5 h,取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹于后于紫外光下,可见荧光斑点。

3  讨论

    实验结果表明,本实验方法工艺简单,回收率为1019%,利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法,达到省时、高效、节能的目的,此方法采用全物理过程,无任何污染,是一条理想的提取黄酮类物质的途径,具有广阔的应用前景。

    黄酮类化合物是一大类天然产物,广泛存在于植物界,是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇,其它包括双氢黄()、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能进入脂肪组织,进而体现出如下功能:消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。

    黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫凋节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目,大蒜分布广泛,本文实验结果表明,大蒜中含有较为丰富的黄酮。因此,大蒜具有广泛开发和利用价值,值得综合利用加强资源开发。


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