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高效液相色谱法同时测定百金花中龙胆苦苷和咖啡因的含量

来源:中国论文下载中心 作者:未知 2009-10-24
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摘要: 【摘要】目的建立百金花中龙胆苦苷(gentiopicrin)和咖啡因(caffeine)的高效液相色谱测定方法。结果该法回收率龙胆苦苷为97。76%,咖啡因为102。RSD龙胆苦苷为2。...


  【摘要】目的建立百金花中龙胆苦苷(gentiopicrin)和咖啡因(caffeine)的高效液相色谱测定方法。方法采用ODS柱,流动相为甲醇-水(30∶70),检测波长273 nm。结果该法回收率龙胆苦苷为97.76%,咖啡因为102.30%;RSD龙胆苦苷为2.97%,咖啡因为1.75%(n=6)。结论该方法建立同一色谱条件下测定百金花中龙胆苦苷和咖啡因,简便、准确,为百金花蒙药植物资源的进一步开发提供了可靠的依据。

  【关键词】 百金花 龙胆苦苷 咖啡因 高效液相色谱

  Abstract:ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of gentiopicrin and caffeine in Herba Centaurii.MethodsThe separation was performed on Kromasil C18 Column(250 mm, 4.6 mm×5μm) and the mobile phase was  methanol-water(30∶70). Gentiopicrin and caffeine was detected at 273nm. ResultsThe recovery rate of gentiopicrin and caffeine was 97.70% and 102.30%, respectively. ConclusionThis method is rapid and accurate for determination of gentiopicrin and caffeine. It can be used for further exploitation of Mongolian herbal resources.

  Key words:Herba Centaurii;  Gentiopicrin;  Caffeine;  HPLC

  百金花为龙胆科植物百金花Centaurium meyeri (Bunge) Druce的干燥带花全草,蒙文名“森达日阿-其其格”,为一蒙古族习用药材,具有清热、退黄、利胆功效,民间用于治疗肝热、胆热、黄疸、头痛等症[1]。百金花为民间习用,其化学成分及分离、测定方法也未见文献报道。本研究首次采用HPLC法测定百金花中龙胆苦苷和咖啡因含量。

  1  仪器与材料

  1.1  仪器  Agilent1100液相色谱仪,Agilent1100紫外检测器,AS3120超声波清洗机,AG135电子分析天平。

  1.2  试药  龙胆苦苷对照品和咖啡因对照品均由中国药品生物制品检定所购入,水为双蒸水,甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。

  1.3  药材  百金花药材采自内蒙古自治区鄂尔多斯市,由内蒙古大学生命科学学院赵立清博士鉴定为百金花的Centaurium meyeri(Bunge) Druce的带花全草。

  2  方法与结果

  2.1  色谱条件Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5   μm, 100A);流动相为甲醇-水(30∶70); 检测波长273 nm;体积流量1.0 ml/min;柱温为室温;进样量20 μl。在此条件下供试品中龙胆苦苷成分、咖啡因成分能与其他成分达到较好分离(见图1)。

  图1  对照品(a)及样品(b)的HPLC色谱图(略)

  2.2  对照品溶液制备精密称取龙胆苦苷对照品和咖啡因对照品适量,分别加流动相制成每毫升含咖啡因100 μg和龙胆苦苷200 μg的溶液。精密量取上述对照品溶液各2.0 ml,置10 ml量瓶中,加流动相制成每毫升含咖啡因20 μg和龙胆苦苷40μg的混合对照品溶液。

  2.3  供试品溶液制备取本品粗粉约0.2 g,精密称定,置25 ml量瓶中,加入流动相适量,超声处理20 min,放冷,流动相补足至刻度,摇匀,滤过,续滤液即为供试品溶液。

  2.4  标准曲线制备取咖啡因对照品约10 mg,龙胆苦苷对照品约10 mg,精密称定,分别置100 ml和50 ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取咖啡因对照品溶液0.25,0.5,1.0,2.5,5.0 ml和龙胆苦苷对照品溶液0.5,1.0,2.0,5.0,10.0 ml,分别置于25 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,分别测定峰面积。以对照品峰面积Y为纵坐标,相应对照品的量X(μg)为横坐标,得龙胆苦苷回归方程为:Y=3E+06X-7 974.9,r=0.999 9,线性范围0.082 8~1.656 3 μg;咖啡因回归方程为Y=7E+06X-19 651,r=0.999 9,线性范围0.021 568~0.431 36 μg。

  2.5  精密度实验对照品混合溶液,重复进样5次,测定峰面积。结果龙胆苦苷峰面积RSD为1.12%,咖啡因峰面积RSD为1.27%。

  2.6   稳定性实验取同一供试品溶液,间隔一定时间进样,依法测定峰面积。结果咖啡因峰面积RSD为1.03%(n=5);龙胆苦苷峰面积RSD为0.32%(n=5)。结果供试品溶液在8 h内稳定。

  2.7  重复性实验取同一批药材5份,按供试品溶液制备方法操作,分别测定龙胆苦苷、咖啡因峰面积,计算含量。结果龙胆苦苷含量RSD为2.09%,咖啡因含量RSD为0.48%。

  2.8  加样回收实验精密称取已知含量的药材样品0.1 g,分别精密加入一定量的龙胆苦苷及咖啡因对照品,按供试品溶液制备方法进行测定并计算回收率,结果龙胆苦苷平均回收率为97.76%,RSD为2.97%(n=6),咖啡因平均回收率为102.30%,RSD为1.75%(n=6)。

  2.9  样品测定取不同批次的百金花药材粉末,按“2.3”项下方法处理,进样测定。结果见表1。

  表1  百金花中龙胆苦苷和咖啡因的含量测定结果(略)

  3  讨论

  在《中国药典》Ⅰ部2005年版收载的“龙胆”“秦艽”及“龙胆泻肝丸”中均测定龙胆苦苷[2],检测波长分别是270和254 nm,我们针对龙胆苦苷、咖啡因进行紫外光谱扫描,发现在(273±2)nm处有最大吸收,因此将273 nm作为检测波长。

  提取药材时,先后以30%甲醇为提取溶媒,分别尝试超声提取60 min、回流提取60 min,从色谱图来看,两种提取方法测定所得供试液的色谱峰基本一致,以测定的龙胆苦苷和咖啡因总量为判定指标,两种方法无显著差别。由于超声提取较回流提取方便,最终选择超声提取。同时还考察了超声提取时间,结果20 min提取完全。

  在上述色谱条件下,本实验分别选择了3种不同的流动相:甲醇-水(30∶70)、乙腈-水(12∶88)、甲醇-乙腈-水(10∶10∶80)。结果表明使用3种不同流动相对照品分离均较好,考虑到甲醇较乙腈廉价,选择甲醇-水(30∶70)作为流动相。

  百金花作为蒙古族习用药材,在本实验中建立了含量测定的方法,作为分离测定研究尚属首次。因此,本实验方法可以作为今后质量控制及其他方面研究的基础,以更好地开发这一蒙药植物资源。

  【参考文献】

  [1] 朱亚民.内蒙古植物药志[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社,1989:354.

  [2] 国家药典委员会. 中国药典,Ⅰ部[S].北京:人民卫生出版社,2005:64,190,416.

 


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