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高效液相色谱测定丹参滴注液中丹酚酸B含量

来源:中国论文下载中心 作者:未知 2009-9-26
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摘要: 【摘要】 目的建立一种用高效液相色谱(HPLC)法测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量的方法。方法色谱柱Dikma Kromasil C18 (5 μm, 100A 250 mm×4。结论该方法简便可靠,结果稳定,重复性好,该方法可用于测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量。【关键词】 丹酚酸B 含量测定 高效液相色谱法 丹参滴注液丹参滴注液收载于国家中成药......


  【摘要】  目的建立一种用高效液相色谱(HPLC)法测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量的方法。方法色谱柱Dikma Kromasil C18 (5 μm, 100A 250 mm×4.6 mm);流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59);流量为0.8 ml·min-1;检测波长286 nm;柱温30℃;进样量20 μl。结果丹酚酸B的加样提取平均回收率为99.03%,RSD为1.02%,重复性实验的RSD为1.8l%。结论该方法简便可靠,结果稳定,重复性好,该方法可用于测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量。

  【关键词】  丹酚酸B 含量测定 高效液相色谱法 丹参滴注液

  丹参滴注液收载于国家中成药标准汇编内科心系分册,由丹参中提取的水溶性化合物总丹酚酸制得。总丹酚酸具有抗肝纤维化、抗动脉粥样硬化和改善记忆功能障碍等作用[1],由丹参素、丹酚酸A、B、E,原儿茶醛等各种芳香酚酸类化合物组成。丹参滴注液标准中对丹参素钠、原儿茶醛进行了高效液相色谱含量测定,对其中含量高、活性强的丹酚酸B未进行含量测定。我们参照有关文献[2,3],用高效液相色谱柱测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量,取得满意效果。

  1    器材

  1.1   仪器与试药  戴安高效液相色谱仪(P680A四元泵,PDA-100二极管阵列检测器,TCC-100柱温箱,Chromeleon色谱工作站)。丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所提供。批号:111562-200302),丹参滴注液(安徽华源生物药业有限公司生产。规格:250 ml,16 g。批号:061112,061115,061118,061120,061201)。甲醇、乙腈为色谱纯(天津四友公司),水为重蒸馏水,甲酸为分析纯。

  1.2    色谱条件Dikma Kromasil C18 (5 μm, 100A 250 mm×4.6 mm);流动相:甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59);流量:0.8 ml·min-1;检测波长286 nm;进样量20 μl。

  2    方法与结果

  2.1   溶液的配制

  2.1.1   对照品溶液的配制  取丹酚酸B对照品约5 mg,精密称定,置50 ml量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5 ml,置50 ml量瓶中,加水至刻度,摇匀,得10 mg·L-1 的对照品溶液。

  2.1.2    供试品溶液的配制  精密量取丹参滴注液(批号061112)10 ml,置50 ml量瓶中, 加水至刻度,摇匀,即得。

  2.1.3    阴性样品溶液的制备按丹参滴注液制备方法和“2.1.2”项制得不含丹参的阴性对照品溶液,备用。

  2.2    测定方法  精密吸取上述供试品溶液与对照品溶液各20 μl,分别注入高效液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算样品的含量。

  2.3    方法学验证

  2.3.1   标准曲线的制备  精密称取丹酚酸B对照品适量,配成1 g·L-1的标准储备液;分别吸取10,20,40,80,100 μl分别置于5个1 ml量瓶中,以水稀释至刻度,混匀后分别进样20 μl,记录色谱图见图1。以色谱峰面积(A)对成分浓度(C)作回归统计,回归方程为:A=-9 863.5+13 282.6C,r=0.989 6,线性范围12.56~142.40 mg·L-1。

  2.3.2   稳定性考察与精密度实验 取浓度为812.64 mg·L-1的供试品溶液分别在0,2,4,6,8 h进样,测得丹酚酸B供试品的峰面积RSD为1.06%,表明供试品溶液在8 h内稳定。取某一浓度(812.64 mg·L-1)供试品溶液,连续进样5次,测得进样精密度RSD为0.97%。

  2.3.3    重复性实验取同一批号的丹参滴注液6份,按上述方法操作,测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量,RSD为1.81%。结果表明重复性良好。

  a2对照品  b2空白  c2丹参滴注液  1.丹酚酸B

  图1  HPLC图(略)

  2.3.4    加样回收率实验 取同一批号丹参滴注液(含量为812.6 mg·L-1)6份,每份约10 ml,精密量取,分别加入丹酚酸B对照品适量,精密称定,按含量测定方法测定,计算回收率(见表1)。可见,丹酚酸B的平均回收率为99.03%(RSD=1.02%),符合分析方法的要求。

  表1  加样回收率实验结果(略)

  2.4    样品含量测定  取批号分别为061112,061115,061118,061120,061201的丹参滴注液适量,按“2. 2”项下操作,测得丹酚酸B的含量见表2。

  表2  样品含量测定(略)

  3    讨论

  3.1  溶剂的选择本实验比较了丹酚酸B在50%甲醇与水中的稳定性,结果均在8 h内稳定,而因水价廉易得,故选用水为溶剂。

  3.2  色谱条件的选择《中国药典》2005版,丹参片质量标准提供的色谱条件中,色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。根据单位实际情况,采用不同比例的甲醇-水、甲醇-水-甲酸、乙腈-水-甲酸为流动相进行测试,发现乙腈的洗脱效果优于甲醇,流动相中存有甲酸时的柱峰形明显优于流动相中存有乙酸时的峰形,故选择甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)为流动相。

  【参考文献】

  [1] 戈升荣,俞一心, 谢更新.丹酚酸的药理作用研究进展[J].中药材,2002,25 (9):683.

  [2] 曹 枫,马长华,乔延江.HPLC法测定丹参三七配伍水煎液中丹酚酸B的含量[J].北京中医药大学学报,2003,26(6):45.

  [3] 李红磊,张忠义,胡玉佳,等.香丹注射液中丹酚酸B的HPLC法测定[J].分析测试学报,2005,24(11):128

 


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