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高效液相色谱法测定喘平滴丸中东莨菪碱的含量

来源:中国论文下载中心 作者:未知 2009-9-19
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摘要: 【摘要】目的建立测定喘平滴丸中东莨菪碱含量的高效液相色谱法。结果东莨菪碱在0。结论此法简便、准确,重复性好,可用于喘平滴丸中东莨菪碱含量测定。【关键词】 高效液相色谱法 喘平滴丸 东莨菪碱喘平滴丸由麻黄、洋金花等中药组成的中药复方制剂。...


  【摘要】目的建立测定喘平滴丸中东莨菪碱含量的高效液相色谱法。方法采用ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)为色谱柱,以甲醇-0.001 mol·L-1磷酸(70∶30)(流动相含0.02 mol· L-1十二烷基硫酸钠)为流动相,检测波长:216 nm,流速:1.0 ml·min-1,外标法定量。结果东莨菪碱在0.028 5~0.285 μg范围内呈线性关系,方法回收率为98.86%(n=6),RSD为2.54%。结论此法简便、准确,重复性好,可用于喘平滴丸中东莨菪碱含量测定。

  【关键词】  高效液相色谱法 喘平滴丸 东莨菪碱

  喘平滴丸由麻黄、洋金花等中药组成的中药复方制剂。其中洋金花的主要化学成分东莨菪碱,有显著的中枢抑制、麻醉作用,一般剂量就能消除情绪激动,使人产生倦意,进入无梦的睡眠状态,产生“健忘”等症,严重者嗜睡、昏迷,最后死于呼吸中枢抑制或麻痹,呼吸和循环衰竭。方中洋金花处方量虽然比例小,为了该复方制剂的用药安全,本课题组对该复方制剂中微量的东莨菪碱进行含量监控,为该药的安全使用提供数据参考。

  1  仪器与试药

  1.1  仪器

  Agilent1100高效液相色谱仪系列(G1311A四元泵、G1313A自动进样器、G1314A-VWD检测器);色谱柱:ZORBAX  SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),SN: USCL017850, BP211D电子分析天平(Sartorius)。

  1.2 试药

  甲醇为色谱纯试剂,水为三蒸水,其它试剂均为分析纯。氢溴酸东莨菪碱对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号:100049-200308),喘平滴丸3批(本所研制,批号:20070516,20070518,20070520)。

  2 方法与结果

  2.1  溶液的制备

  2.1.1  对照品溶液的制备取氢溴酸东莨菪碱对照品约10 mg,精密称定,置50 ml容量瓶,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,得对照品贮备液。精密量取对照品贮备液1.0 ml ,置10.0 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。即得(0.021 4 mg·ml-1)。

  2.1.2  供试品溶液的制备取本品20丸,精密称定,置具塞锥形瓶中,加10 ml 0.01%盐酸超声溶解,用浓氨水调pH值至9,转移入梨形分液漏斗中,用氯仿(15,15,10,10 ml)分次萃取,取氯仿层至蒸发皿中,用甲醇溶解转入10 ml量瓶中,滤过(0.22 μm),取续滤液即得。

  2.1.3  阴性样品溶液的制备按处方工艺制备缺洋金花的浸膏,依供试品溶液制备方法制备。

  2.2  色谱条件及系统适用性试验色谱柱为ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相甲醇-0.001 mol·L-1磷酸(流动相含0.02 mol·L-1十二烷基硫酸钠)(70:30),检测波长216 nm,流速1.0 ml·min-1。在上述色谱条件下,分别吸取对照品溶液12 μl,供试品溶液和阴性对照溶液各3 μl,注入液相色谱仪,色谱图见图1~3。

  供试品与氢溴酸东莨菪碱对照品相同的保留时间有一对应色谱峰,阴性对照溶液在对应位置无干扰;以氢溴酸东莨菪碱计算,理论塔板数在3 000以上。分离度>1.5,故此色谱条件满足测定要求。

  2.3  线性关系考察精密吸取上述对照品溶液(0.021 4 mg·ml-1)1,2,4,8,12,16,20 μl进样,测定其峰面积积分值,以进样量X(μg)为横坐标,峰面积积分值Y为纵坐标,绘制标准曲线,氢溴酸东莨菪碱回归方程为:Y=743.95X+3.478 67,r=0.999 9。结果表明氢溴酸东莨菪碱在0.028 5~0.285 μg范围内线性关系良好。

  2.4  精密度实验精密吸取供试品溶液3 μl,按上述色谱条件重复进样6次,测定其峰面积,RSD=0.71%,表明精密度良好。

  2.5  重复性实验对同一批样品(批号20070516)按“2.1.2”项下方法平行制备6份供试液,每份进样3次,3 μl/次,测得峰面积并计算每丸平均含量,RSD=2.31%,表明本法重复性较好。

  2.6  稳定性实验取新制备的供试品溶液(批号20070516),按上述色谱条件于0,1,2,4,8,12 h分别进样3 μl,测定其峰面积,RSD为1.73%,表明本品在12 h内稳定性较好。

  2.7  回收率实验精密称取已知含量的同一批样品(20070516,含量为0.084 95%)6份,每份8丸,分别精密加入0.8 ml的东莨菪碱对照品溶液(0.285 mg·ml-1),按供试品溶液制备项下操作,最后定容为10 ml,依法测定含量,计算回收率。结果见表1。表1  氢溴酸东莨菪碱回收率测定结果(略)

  2.8 含量测定及限度取本品3 批, 每批分别取3份样品,按“2.1.2”项下方法制备供试液,每份样品平行进样3次,按拟定的含量测定方法测定。结果见表2。表2  样品含量测定结果(略)

  3  讨论

  3.1  供试品纯化方法的筛选本品处方中洋金花比例较低,目标成分东莨菪碱含量低,且复方中相关成分干扰,所以检测东莨菪碱经过了多个实验纯化富集:首先将样品溶解后分别以氨水饱和的醋酸乙酯、氨水饱和的正丁醇、氨水饱和的氯仿作洗脱溶剂洗脱过氧化铝柱,对比发现饱和氯仿洗脱液得到的峰分离度和基线较好,但回收率低。然后又分别以氨水饱和的醋酸乙酯、氨水饱和的正丁醇、氨水饱和的氯仿进行萃取3次(15,15,10 ml),合并萃取液,比较发现饱和氯仿萃取的样品基线平稳,色谱峰分离度最好,且回收率达到检测要求。

  3.2  检测波长的选择在选定的色谱条件下,注入东莨菪碱对照品、样品和阴性样品,用DAD检测器检测,读取DAD光谱扫描图,发现东莨菪碱对照品和样品的东莨菪碱洗脱峰在210~220 nm处有较大吸收,而阴性样品在该段吸收弱,所以确定检测波长为216 nm。

  3.3  流动相的选择HPLC法测定氢溴酸东莨菪碱,已报道的流动相有0.07 mol·L-1磷酸钠溶液(用磷酸调pH 值至6.0 ,含17.5 mmol·L-1十二烷基硫酸钠) - 乙腈(2∶1)[1,2],甲醇- 水(53∶47,水中含20 mmol·L-1醋酸钠,0.02 %三乙胺,0.3 %四氢呋喃,pH 为6.86)[3] ,甲醇- 水(40∶60,水中含0.02 mol·L-1醋酸钠,0.02 %三乙胺,用冰醋酸调pH 至6.0)[4]等。本文曾分别以甲醇- 磷酸盐缓冲液、乙腈-0.03%三乙胺(以不同体积比及不同pH值)、水-乙腈(含0.1%三乙胺)-磷酸(以不同体积比)等为流动相进行测试,均未达到满意的分离效果。后改用反相离子对流动相,经多次筛选发现:甲醇-0.001 mol·L-1磷酸(70∶30)(流动相含0.02 mol·L-1十二烷基硫酸钠)改善了分离效果,使得性质相似的其它干扰成分能在反相系统中相互达到基线分离。

  【参考文献】

  [1]国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2005:188.

  [2]于立军. HPLC法测定不同产地洋金花中东莨菪碱的含量[J].中国药房,2007,18(24):1878.

  [3]陆霞,李华,阮桂平.心宝丸中硫酸阿托品与氢溴酸东莨菪碱的含量测定[J].中药材,2002 ,25(5) :353.

  [4]侯士果,谷学新,王书妍,等.HPLC测定洋金花中东莨菪碱和阿托品的含量[J].中国中药杂志,2006,31(13):1065.

 


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