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反相高效液相色谱法测定三七花中人参皂苷Rb1的含量

来源:中国论文下载中心 作者:未知 2009-9-19
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摘要: 【摘要】 目的为三七花质量标准研究打下基础。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对三七花中人参皂苷Rb1含量进行测定。结果人参皂苷Rb1含量在8 h内基本稳定。结论方法学考察结果符合质量分析的要求,可用于三七花中人参皂苷Rb1含量测定。...


  【摘要】    目的为三七花质量标准研究打下基础。方法采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对三七花中人参皂苷Rb1含量进行测定。结果人参皂苷Rb1含量在8 h内基本稳定;精密度RSD为0.55%,重复性RSD为4.12%,高、中、低浓度组的回收率分别为102.88%,97.87%,103.57%。结论方法学考察结果符合质量分析的要求,可用于三七花中人参皂苷Rb1含量测定。

  【关键词】  三七花 人参皂苷Rb1 反相高效液相色谱法

  Abstract:ObjectiveTo give the foundation of quality standard of Notoginseng bud. MethodsRP-HPLC was established to determine Rb1 of Notoginseng bud. ResultsThe stability time was 8h. Linearity, precision and reproducibility of the method were good. ConclusionThis method accords with the analysis requirement. It can be used in determining the content of  Rb1 in Notoginseng bud.

  Key words:Notoginseng bud;  Rb1;  RP-HPLC

  三七花是传统名贵中药五加科植物三七的花蕾,盛产于我国西部云南、广西、西藏等地,作为药材,民间用于治疗高血压病、咽痛音哑、津伤口渴等。经前期药效研究表明,其抗高血压病的有效部位为总皂苷。有研究报道[1],从三七花中分得10种化合物,经化学和光谱方法确定为β-谷甾醇、胡萝卜苷、三七皂苷、绞股蓝皂苷-Ⅸ、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rb3等。三七花中人参皂苷含量最高,以人参二醇苷为主,其中又以人参皂苷Rb1较多[2]。对于人参皂苷Rb1的含量测定方法有高效液相色谱法、薄层扫描法、气相色谱法等[3],HPLC法中CN柱和反相柱均可得到较好的分离。目前,关于三七的研究大都集中在其块根,块根也是现阶段三七产业的基本原料药物。由于三七花使用区域受限,使其药材资源的经济价值未被充分利用,因此研究也较为薄弱。本研究采用RP-HPLC方法作为三七花药材中人参皂苷Rb1的含量测定方法,以期为其质量标准的建立打下基础。

  1  仪器与试剂

  高效液相色谱仪(1100化学工作站,美国安捷仑科技公司);色谱柱Alltech Platinum C18 100A 5μm 250 mm×4.6 mm;试剂均为色谱纯。人参皂苷Rb1对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用)。

  2 方法与结果

  2.1  色谱条件色谱柱Alltech Platinum C18 100A 5μm 250 mm×4.6 mm;流动相为乙腈-水(30∶70);检测波长为203 nm。色谱图见图1~2。

  2.2  供试品制备条件的考察

  2.2.1 甲醇回流时间的考察考察了甲醇回流时间对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表1。依据结果,确定甲醇提取时间为4 h。表1  不同甲醇提取时间对含量测定的影响(略)

  2.2.2 石油醚提取次数考察样品用甲醇提取后,提取液用石油醚(30~60℃)萃取除杂,10 ml/次,考察不同提取次数对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表2。依据结果,为缩短样品处理时间,确定石油醚提取次数为2次。

  2.2.3 水淋洗用量的考察

  考察不同水淋洗用量对糖类成分淋洗程度的影响。结果见表3。依据结果,确定水淋洗用量为70 ml。表2  不同提取次数的比较(略)表3  不同水用量的比较(略)

  2.2.4   20%乙醇淋洗用量的考察考察不同20%乙醇淋洗用量对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表4。依据结果,确定20%乙醇淋洗用量为50 ml。表4  不同20%乙醇用量的比较(略)

  2.2.5  80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量的考察考察不同80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表5。依据结果,确定80%乙醇洗脱用量为80 ml,收集洗脱液70 ml。表5  不同80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量的比较(略)

  2.3 供试品溶液的制备取三七花药材粉末(过3号筛)10 g,精密称定0.2 g,置索氏提取器中,加氯仿60 ml,加热回流1 h,弃去氯仿液,药析挥去氯仿,加甲醇55 ml,加热回流4 h,提取液挥干,加水10 ml溶解,加石油醚(30~60℃)提取2次,10 ml/次,弃取醚液,水液通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm,长15 cm),以水70 ml洗脱,弃去水液,再用20%乙醇50 ml洗脱,弃去20%乙醇洗脱液,继用80%乙醇80 ml洗脱,收集洗脱液70 ml,蒸干,残渣加甲醇溶解并定量转移至10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。

  2.4 标准曲线的建立取人参皂苷Rb1对照品约11 mg,精密称定,用甲醇定容至10 ml容量瓶中,配制成浓度为1.16 mg·ml-1的对照品溶液。用甲醇逐级稀释成一系列浓度的标准液。按上述色谱条件进样HPLC分析,以峰面积(A)对含量(Y)进行线性回归,得标准曲线回归方程为Y=0.004 6A+0.112 9  r=0.999 9,线性范围为0.58~11.6 μg。

  2.5 精密度实验取同一人参皂苷Rb1对照品溶液,连续进样6次,精密度为0.55%。

  2.6  稳定性实验取同一供试品溶液,于0,2,4,6,8h分别进样,精密度为0.83%。

  2.7 重复性实验取相同制法制备的同一批次5份样品进行测定,结果RSD为4.12%,表明重复性良好。

  2.8 回收率实验于三七花粉末中加入适量人参皂苷Rb1对照品标准液形成高、中、低3个浓度的样品,按“2.3”处理后进行HPLC分析,计算人参皂苷Rb1的方法回收率,得回收率分别为102.88%,97.87%,103.57%。结果见表6。表6  回收率实验结果(略)

  2.9 三七花药材含量测定取三七花药材粉末10 g,精密称定0.2 g,按上述测定方法进行HPLC测定。结果见表7。 表7  三七花药材含量测定结果(略)

  3 讨论

  本文曾以三七块根研究中常用的人参皂苷Rg1作为测定指标建立含量测定方法,但在实验中发现三七花中Rg1含量远少于Rb1,以其作为测定指标有所不妥,与文献报道相符。

  由于三七花中所含组分较多,包括黄酮类、挥发油类、多糖类、氨基酸类等,且含有块根所没有的大量叶绿素,极易对测定造成干扰,故在供试品制备中选用D101型大孔吸附树脂,先用水洗去多糖,再用20%乙醇洗去黄酮类物质,最后收集80%乙醇洗脱液,结果表明可起到较好的纯化作用。

  从研究结果看,云南文山的三七花总皂苷含量高于广西靖西,表明不同产地的药材有一定差异,选材时必须加以考虑。

  【参考文献】

  [1]刘刚,鲍建材,郑友兰,等.三七化学成分研究进展[J].人参研究,2004,2:10.

  [2]田国才.三七花治疗心律失常的探讨[J].中国民族民间医药杂志,2000,44:147.

  [3]周迎春,赵怀清,梁宁,等.高效液相色谱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1含量[J].沈阳药科大学学报,2003,20(1):27.

 


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