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高效液相色谱法同时测定益津降糖口服液中人参皂苷Rg1及Re总皂苷的含量

来源:中国论文下载中心 作者:未知 2009-9-19
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摘要: 【摘要】目的测定了益津降糖口服液中人参皂苷Rg1及Re的含量。方法用高效液相色谱法,以ODS C18柱(150 mm×4。结果人参皂苷Rg1在0。4 μg范围内,人参皂苷Re在1。...


  【摘要】目的测定了益津降糖口服液中人参皂苷Rg1及Re的含量。方法用高效液相色谱法,以ODS C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)为固定相,乙腈-0.05%磷酸溶液(99∶400)为流动相,检测波长为203 nm,流速为1.0 ml·min-1。结果人参皂苷Rg1在0.16~6.4 μg范围内,人参皂苷Re在1.225~4.9 μg范围内呈现良好线性关系,相关系数Rg1:r = 0.999 9;r=0.999 6。平均加样回收率Rg1=96.63%;Re=95.20%,Rg1的RSD为1.34%(n=6);Re的RSD为1.14%(n = 6)。结论 方法简便、准确、重复性好。

  【关键词】  益津降糖 人参皂苷Rg1 人参皂苷Re 高效液相色谱法 含量测定

  益津降糖口服液是吉林敖东药业集团延吉股份有限公司生产,处方由人参、白术、茯苓、仙人掌、甘草与几种辅料组成。具有健脾益气,生津止渴。用于气阴两虚引起的消渴病等症。方中人参含有多种皂苷类,生物碱类化合物,其中人参皂苷为该制剂的主要活性成分,参照2005年版《中国药典》(Ⅰ部)“人参叶”项下条件[1]及相关文献[2]。采用高效液相色谱法,以乙腈、磷酸为流动相,测定其含量,该法简便、准确、精密度高、重现性好,为控制质量标准提供了可靠的依据。

  1  器材

  1.1  仪器

  日本岛津LC10Avp系列高效液相色谱仪,包括DAD检测器,Chem Station色谱工作站(美国Agilent公司);AE163型十万分之一电子分析天平(瑞士Mettler公司)。

  1.2 试药

  益津降糖口服液由吉林敖东药业集团延吉股份有限公司提供(批号060601,060602,060603,061201,061202,061203,070501,070502,070503,070504),对照品,人参皂苷Re(0754200216),人参皂苷Rg1(0703-200322)均由中国药品生物制品检定所提供;甲醇,乙腈为色谱纯,水为纯净水,其它试剂均为分析纯。

  2  方法与结果

  2.1  色谱条件

  色谱柱:Kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈0.05%磷酸溶液(99∶400);检测波长203 nm;柱温40℃;流速1.0 ml/min;灵敏度0.08AUFS。

  检测波长的选择:用UV2401PC型紫外分光光度仪,对人参皂苷Re对照品,在 200~400 nm波长下进行紫外扫描,结果在 20 3nm波长处有最大吸收,因此选择 203 nm为检测波长。理论塔板数按人参皂苷Rg1,人参皂苷Re峰计算均不低于2 000。

  2.2 对照品溶液的制备

  精密称取经110℃干燥至恒重人参皂苷Rg1及Re对照品各10.1 mg,加甲醇溶解,并稀释至刻度,制成每毫升中各含0.3 mg的人参皂苷Rg1及Re混合溶液,即得。

  2.3 供试品溶液的制备

  精密量取供试品5 ml,加水15 ml摇匀,加氯仿萃取2次,20 ml/次,弃去氯仿层,水层用水饱和正丁醇萃取4次,20 ml/次,合并正丁醇液,正丁醇层用氨试液洗涤2次,20 ml/次,洗涤液层再用水饱和正丁醇20 ml振摇提取1次,合并前后两次正丁醇液,蒸干,残渣用甲醇溶解并移至 5 ml 量瓶中 ,加甲醇至刻度,摇匀,用 0.45μm 微孔滤膜过滤,即得。

  2.4 阴性供试品溶液的制备

  按处方比例制备不含人参皂苷的阴性样品,按“2.3”项下方法制备成阴性供试品溶液。

  2.5 系统适应性实验

  分别精密吸取“2.2”,“2.3”,“2.4”项下溶液各10 μl,按“2.1”项下色谱条件进样。结果,阴性供试品溶液摘在与人参皂苷Rg1及人参皂苷Re对照品相同保留时间处未见明显色谱峰,故认为辅料等对主药的测定无干扰。色谱见图1。

  2.6 线性范围的考察

  精密量取人参皂苷Rg1(0.320 mg/ml),人参皂苷Re(0.245 mg/ml)对照品混合溶液5,7.5,10,15,20 μl注入高效液相色谱仪中。测定其峰面积,人参Rg1峰面积分别为590523,888 502,1 189 789,1 815 921,2 400 446。并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归,得标准曲线方程,以峰面积值(A)对进样量(C)作图,得一直线,A = 121 258.093 1C- 17 431.871,r = 0.999 9。 人参Re峰面积分别为472 305,700 232,938 757,1 418 136,1 835 231。以峰面积值(A)对进样量(C)作图,得一直线,A = 91 613.410 34C- 19 379.181 03,r=0.999 6。以上结果表明,在0.16~6.4 μg范围内,人参Rg1峰面积值与进样量有良好的线性关系;在1.225~4.9 μg范围内,人参Re峰面积值与进样量有良好的线性关系。

  2.7 精密度实验

  精密量取样品(批号060601)供试液10 μl,重复进样5次,测定其峰面积,人参皂苷Rg1的峰面积分别为914 848,916 945,905 253,927 827,913 214。人参皂苷Re峰面积分别为528 608,521 613,519 375,520 186,513 891。结果人参皂苷Rg1,人参皂苷Re的RSD分别为0.89%,1.02%,表明仪器精密度较好。

  2.8 稳定性实验

  取样品(批号060601)供试液分别于0,2,4,6及8 h,分别进样10 μl,测得样品中人参皂苷Rg1峰面积值分别为914 840,927 827,91 2315,92 118,910 423,平均值为917 105。Re峰面积值分别为528 608,520 186,516 530,518 912,520 475,平均值为520 942。RSD分别为0.76%,0.88% 。实验结果表明,样品供试液在8 h内稳定性良好。

  2.9 重复性实验

  按拟定的含量测定方法,对同一批供试品(060601)分别制备样品供试液5份,按“2.3”项下方法制备。并按“2.1”项下色谱条件进样10μl,测得峰面积值人参皂苷Rg1分别为910 852,909 816,919 572,920 545,912 256,平均值为914 608。人参皂苷Re峰面积值分别为509 402,513 273,509 341,517 554,509 373,平均值为511 789。人参皂苷Rg1的RSD =0.55%;人参皂苷Re的RSD=0.71%;人参总皂苷含量的RSD=0.69%,表明本方法重复性良好。

  2.10 回收率实验

  精密量取6份已知含量的供试品(批号060601)2.5 ml,分别加入人参皂苷Rg1(0.65 mg/ml)、人参皂苷Re(0.35 mg/ml)对照品溶液各取0.8 ml,1.0 ml,1.2 ml按上述样品制备方法和色谱条件,制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪,以下列公式计算回收率。结果见表1。结果表明,回收率在95%~100% 之间,加样回收良好。表1  回收率实验结果(略)

  2.11  空白实验

  按处方比例及工艺自制不含人参的空白供试品,按供试品溶液的制备方法制备,测定,记录色谱图,在对照品人参皂苷Rg1,人参皂苷Re的保留时间处未出现色谱峰,因此不干扰测定。

  2.12  样品含量测定

  依上述方法测定3批益津降糖口服液中人参皂苷Rg1及Re的含量。结果见表2。表2  样品含量测定结果(略)

  3 讨 论

  本法在样品提取方法中曾试用过正丁醇合并液洗涤、氨试液洗涤、1%氢氧化钠试液洗涤、以及通过D101树脂等几种方法,实验结果表明用氨试液洗涤的样品含量最高,峰形尖锐。样品回收率高。

  提取次数考察:按照“2.3”项下的测定方法,分别用水饱和正丁醇提取1,2,3,4,5,6次,依次测定。测定结果分别为0.210,0.311,0.325,0.338,0.339,0.337 mg/ml,结果表明提取4次以后,人参皂苷Rg1及Re总皂苷基本提尽。

  本法在除脂溶性杂质萃取过程中曾试用过三氯甲烷、乙醚、二氯甲烷等三种溶剂萃取,实验结果表明,用乙醚、二氯甲烷萃取时易产生乳化层,三氯甲烷萃取分层效果好,阴性无干扰。

  流动相的选择:本文分别用乙腈-0.05mol/ml磷酸二氢钾(15∶29),乙腈-水-甲酸(25∶75∶1),甲醇-0.1%甲酸水溶液(30∶70),乙腈-0.05%磷酸溶液(99∶400),这4种流动相进行试验,结果表明流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液(99∶400)时,效果最佳,柱压低,峰型尖锐,阴性无干扰。综上所述,本法操作简单、快速、准确可靠,可用于益津降糖口服液的质量控制[3]。

  【参考文献】

  [1]国家药典委员会.中国药典[S].北京:化学工业出版社,2005:8.

  [2]伍毅. 高效液相色谱测定复方田七滴丸中人参皂苷Re1含量[J].中国药房,2005,16(22):1737.

  [3]罗云,金城,李果,等.高效液相色谱法同时测定姜参胶囊中人参皂苷Rg1及Re的含量[J].中国药房,2007,6(18):451.

 


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