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高效液相色谱法测定氯法拉滨注射液中氯法拉滨的含量

来源:中国论文下载中心 作者:未知 2009-9-12
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摘要: 【摘要】 目的:建立高效液相色谱法测定氯法拉滨注射液中主药氯法拉滨的含量。结果:氯法拉滨在进样量0。【关键词】 高效液相色谱法。氯法拉滨。...


  【摘要】  目的:建立高效液相色谱法测定氯法拉滨注射液中主药氯法拉滨的含量。方法:采用Shimpack VPODS(5 μm,4.6 mm×150 mm)色谱柱,流动相为乙腈乙酸铵溶液(取乙酸铵0.31 g,加水溶解并稀释至1 000 mL,再加甲酸1.0 mL)(10∶90),流速1.0 mL/min,进样量20 μL,检测波长262 nm。结果:氯法拉滨在进样量0.4~242.5 μg/mL范围内线性关系良好,回归方程为A=23156C+12378(r=0.9999,n=5),平均加样回收率为99.97%,RSD为0.40%。结论:本方法快速、简便、结果准确,可用于控制该制剂的质量。

  【关键词】  高效液相色谱法;氯法拉滨;含量测定

  [Abstract]Objective:To establish a high performance liquid chromatograph (HPLC) method to assay the concentration of clofarabine in clofarabine injection. Methods: Shimpack VPODS (5 μm, 4.6 mm×150 mm) column and a mobile phase of acetonitrileammonium acetate solution (water containing 4 mmol/L ammonium acetate and 0.1% of formic acid) (10∶90) were used with the flow  rate of 1.0 mL/min. The detection wave length was 262 nm. Results: There was a linear relationship within the range of 0.4~242.5 μg/mL and the regression equation was A=23156C+12378 (r=0.9999, n=5). The average relative recovery rate was 99.97% and RSD was 0.40%. Conclusions: This method is simple, accurate and able to control the quality of the preparation.

  [Key words]High performance liquid chromatograph; Clofarabine; Determination

  氯法拉滨由美国Genzyme公司研发,并由美国FDA通过快速审批程序于2005年1月11日上市,作为近十年来首个获准专门用于治疗儿童白血病的新药,主要用于治疗儿童难治性或复发性急性淋巴细胞性白血病(ALL),患儿此前至少已接受过两种疗法治疗而无效者[14]。目前,氯法拉滨国内无上市产品,为更好地控制本品质量,本实验建立了氯法拉滨的含量测定方法,并经方法学考察,认为本法简便快捷,结果准确,可用于氯法拉滨注射液的质量控制。

  1 仪器与试药

  岛津LC10ATvp高效液相色谱仪,SPD10A紫外可见光检测器;氯法拉滨对照品(第三军医大学新桥医院药学部合成并精制,纯度为99.85%),氯法拉滨注射液(第三军医大学新桥医院药学部制备;规格:20 mL∶20 mg;批号080505、080506、080507);乙腈为色谱纯,乙酸铵、甲酸为分析纯,水为纯化水。

  2 方法与结果

  2.1 色谱条件

  色谱柱:Shimpack VPODS(C18,5 μm,4.6 mm×150 mm);流动相:乙腈乙酸铵溶液(取乙酸铵0.31 g,加水溶解并稀释至1 000 mL后,再加甲酸1.0 mL)(10∶90);流速1.0 mL/min;检测波长262 nm;进样量20 μL。理论板数按氯法拉滨计算为8 966,拖尾因子为1.136。此条件下,氯法拉滨主峰与各杂质峰达到基线分离。

  2.2 对照品储备液的配制

  精密称取氯法拉滨对照品121.25 mg,置100 mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,制成约含氯法拉滨1.2125 mg/mL的对照品贮备液,备用。

  2.3 供试品溶液的配制

  取氯法拉滨注射液20 mL,置100 mL容量瓶中,加水稀释定容,制成每毫升含氯法拉滨200 μg的溶液,摇匀,备用。

  2.4 阴性对照溶液的制备

  氯法拉滨注射液其主要辅料是氯化钠。取氯化钠适量,按处方比例加水稀释成0.9%的溶液,滤过,备用。

  2.5 阴性对照试验

  按照上述色谱条件,吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μL,分别注入液相色谱仪,结果见图1。阴性对照溶液中的组分不干扰供试品溶液中氯法拉滨的测定。氯法拉滨的保留时间约为10.1 min。

  2.6 标准曲线

  精密量取对照品贮备液,分别稀释制成含氯法拉滨0.4、1.94、9.7、48.5、242.5 μg/mL的溶液,照上述色谱条件,分别精密吸取上述溶液20 μL进样,记录色谱图,以峰面积A为纵坐标,对照品溶液浓度C(μg/mL)为横坐标,面积归一法得氯法拉滨的线性回归方程为:A=23156C+12378(r=0.9999,n=5)。结果表明氯法拉滨浓度在(0.4~242.5)μg/mL范围内溶液浓度与峰面积线性关系良好。

  2.7 精密度试验

  精密移取对照品储备液20 mL,置100 mL容量瓶中,用水稀释至刻度,得浓度为242.5 μg/mL对照品溶液,取上述溶液20 μL,一天内重复进样6次,测得各峰面积分别为5574317、57293095、5574276、5700138、5518083、5525308,以峰面积计算精密度,结果日内RSD为1.6%。

  2.8 回收率试验

  取氯法拉滨对照品约16 mg、20 mg和24 mg各三份,精密称定,按处方比例,加入辅料氯化钠适量,按拟定方法测定含量,并做氯化钠的空白测定,计算回收率,结果见表1。本法测定氯法拉滨含量,平均回收率在99.0%~100.8%之间,RSD小于1.0%,符合含量测定要求。表1  回收率试验结果(略)

  2.9 稳定性试验

  取样品(批号080505),按“2.3”项下方法操作,室温放置,分别在0、4、8 h进样20 μL,记录色谱图,结果主峰氯法拉滨的峰面积分别为5357604、5231527、5369068,RSD为1.4%。表明供试品溶液在配制后室温8 h内稳定性较好。

  2.10 样品测定

  取3批不同批号的样品,按“2.3”项下方法制成供试品溶液,按上述色谱条件进样20 μL,测定3批样品含量,结果见表2。3批样品含量均在95.0%~105.0%范围内。表2  样品含量测定结果(略)

  3 讨论

  本试验在小鼠血浆中氯法拉滨含量测定方法[5]基础上,以文中色谱条件测定氯法拉滨注射液主药氯法拉滨的含量,供试品溶液中其他杂质峰不影响主成分峰的含量测定,试验结果准确,方法快速、简便,可用于控制氯法拉滨注射液的质量。

  【参考文献】

  [1]夏敏, 将慧. 儿童急性白血病治疗新药氯法拉滨[J]. 世界临床药物, 2007, 28(6): 356359.

  [2]聂颖兰, 傅得兴, 胡欣, 等. 新型抗白血病药氯法拉滨[J]. 中国新药杂志, 2007, 16(10): 821824.

  [3]Kantarjian HM, Gandhi V, Kozuch P, et al. Phase I Clinical and Pharmacology Study of Clofarabine in Patients With Solid and Hematologic Cancers [J]. J Clin Oncol, 2003, 21(6): 11671173.

  [4]Jeha S, Gaynon PS, Razzouk Bl, et al. Phase II Study of Clofarabine in Pediatric Patients With Refractory or Relapsed Acute Lymphoblastic Leukemia [J]. J Clin Oncol, 2003, 26(12): 19171923.

  [5]Yunsheng Hsieh, Christine J.G.Duncan, Suining Lee, et al. Comparison of fast liquid chromatography/tandem mass spectrometric methods for simultaneous determination of cladribine and clofarabine in mouse plasma [J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2007, 44(2): 492497.

 


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