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栽培和野生竹节参中人参皂苷含量比较

来源:《时珍国医国药》 作者:未知 2009-8-13
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摘要: 摘要:目的对野生和栽培竹节参中所含人参皂苷及其含量进行比较。方法参照人参的分析方法,以人参皂苷 Rg1、 Re为对照品,对野生和栽培竹节参进行 TLC鉴别比较,用发HPLC法进行定量分析。结果在选定的薄层条件下,对照品与供试品的薄层图谱清晰,分离度好,栽培和野生竹节参具有相同的斑点。结论根据测定和比较的结果,栽......


  摘要:目的对野生和栽培竹节参中所含人参皂苷及其含量进行比较。方法参照人参的分析方法,以人参皂苷 Rg1、 Re为对照品,对野生和栽培竹节参进行 TLC鉴别比较,用发HPLC法进行定量分析。结果在选定的薄层条件下,对照品与供试品的薄层图谱清晰,分离度好,栽培和野生竹节参具有相同的斑点; 对照品在0.48~2.40 μg范围内具有良好的线性关系,回归方程为:Y= 336 182X-302 41,  r=0.999 8。结论根据测定和比较的结果,栽培和野生竹节参所含人参皂苷类成分基本相似,野生竹节参根茎中人参皂苷 Rg1、 Re的含量较高。

  关键词:竹节参;  人参皂苷Rg1、 Re;  薄层色谱;  高效液相色谱

  竹节参为五加科植物竹节参 Panax japonicus C.A. Mey的干燥根茎。主产于云南、四川、贵州、陕西及湖北等省。竹节参含人参皂苷,具有滋阴补肾,散淤止痛,止血祛痰的功效[1]。其药材原来主要来自野生,但资源有限,因此在湖北恩施、建始、宣恩、鹤峰等地已开始栽培。由于栽培品与野生品生长环境不尽相同,栽培品成长较快、两者在化学成分上可能存在差异。为此,我们对栽培的竹节参与野生竹节参所含的人参总皂苷进行了比较,现报道如下。

  1  仪器与材料

  1.1   仪器Waters 510液相色谱仪;U6K进样器;Waters486紫外检测器;Waters 746数据处理仪;METTLER TOLEDO AL204型万分之一电子天平。

  1.2   试剂乙腈为光谱纯,重蒸水,磷酸及其他试剂均为分析纯。

  1.3   对照品人参皂苷 Rg1、 Re由中国药品生物制品检定所提供。

  1.4   样品野生竹节参,栽培竹节参(分别种植于海拔1 560 m和950 m),分别采自湖北恩施自治州建始县和恩施市,经湖北民族学院张万福教授鉴定为五加科植物竹节参Panax japonicus C.A. Mey的干燥根茎。

  2  方法与结果

  2.1   薄层色谱鉴别参照人参薄层色谱鉴别法[2],取以上3种药材样品,将其下部根与根茎分开,碾成粗粉,各取约1.0 g,精密称定,置50 ml圆底烧瓶中,加氯仿40 ml 加热回流1 h,弃去氯仿液,药渣挥干溶剂,加水0.5 ml拌匀湿润后,加水饱和的正丁醇10 ml,超声处理30 min,吸取上清液,加3倍量氨试液,摇匀,放置分层,取上层液蒸干,残渣加甲醇1ml溶解,作为供试品溶液。取人参皂苷Rg1、 Re对照品,加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述8种溶液各5 μl,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以正丁醇醋酸乙酯水(4∶1∶5)上层液为展开剂,展开,取出,晾干,喷10%硫酸乙醇溶液,在105℃烘数分钟。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显相同的紫红色斑点。结果见图1。

  2.2  含量测定 参照人参中人参皂苷 Re与人参皂苷Rg1的含量测定进行[2]。

  1.高海拔栽培竹节参根茎   2. 低海拔栽培竹节参根茎 3. 野生竹节参根茎   4.高海拔栽培竹节参根   5.低海拔栽培竹节参根    6. 野生竹节参根   7. 人参皂苷Rg1对照品   8.人参皂苷Re对照品

  图1  竹节参根茎和根人参皂苷薄层色谱图(略)

  2.2.1  色谱条件  色谱柱:250 mm×4.6 mm不锈钢柱,填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶(5 μm)。流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(25∶75)。检测波长:203 nm;柱温:30℃。流速1.0 ml?min-1。

  2.2.2  对照品溶液的制备  因人参皂苷 Re与人参皂苷 Rg1出峰时间相同。在配制对照品溶液时各精密称定1.2 mg用甲醇溶解,定容至10 ml,即得0.24 mg/ml的对照品溶液。

  2.2.3  供试品溶液制备 分别取上述野生竹节参和栽培竹节参(海拔1 560 m)的根和根茎药材粗粉1.0 g,精密称定,按《中国药典》2000年版人参含量测定法制备供试品溶液。

  2.2.4  线性关系考察  精密吸取浓度为0.24 mg/ml的人参皂苷Rg1、 Re的对照品溶液2,4,6,8,10 μl,分别注入色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标(Y),进样量为横坐标(X),计算得回归方程 Y= 336 182X-30 241,  r=0.999 8。结果表明,进样量在 0.48~2.40 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

  2.2.5  精密度实验  精密吸取同一浓度的对照品溶液,按上述色谱条件测定,重复进样5次,测定峰面积,,RSD=0.76%,表明精密度良好。

  2.2.6  稳定性实验   分别精密吸取同一份对照品溶液,分别于配制0,2,4,8,12,24 h进样,记录峰面积积分值,RSD=1.46%,结果表明,供试品溶液在24 h内基本稳定。

  2.2.7   回收率实验  精密吸取野生竹节参根茎供试品溶液,加入精密称定的人参皂苷 Re与人参皂苷 Rg1对照品,依法测定,回收率=98.47%,RSD=2.44%。

  2.2.8  样品测定  竹节参(野生)供试品溶液和人参皂苷对照品溶液的色谱图(见图2),取4种药材供试品溶液分别进行测定,其其相应位置人参皂苷的含量,结果见表1。

  a.人参皂苷对照品    b.竹节参根茎(野生)

  图2  竹节参(野生)和人参皂苷 Re+Rg1 HPLC色谱图(略)

  表1  栽培和野生竹节参中以人参皂苷(Re+Rg1)为对照品测定的含量(略)

  3  小结

  从薄层图谱可见栽培品与野生品都有对应的5个主要的薄层色谱斑点,说明其所含主要成分基本相似。从 HPLC含量测定结果来看,野生竹节参根茎中人参皂苷 Rg1、 Re的含量远高于栽培品, 但野生竹节参的根的含量仅略高于栽培品。由于野生竹节参的药用部位的根茎占绝大部分,从该结果可以看出,野生竹节参质量较优,其原因,可能与野生品生长年限较长有关。该野生样本生长期在10年以上(10年以内的苗小,一般不采),栽培品均为5年生。栽培品虽然 Rg1、 Re的含量较低,但生长时间较短,可以不受资源限制,并能保护珍贵的野生资源,同时,从薄层色谱可以看出,栽培品根茎中其它皂苷(除Rg1, Re)的含量也仅仅略低于野生品,因此,栽培竹节参仍然有较大优势,对栽培品的作用值得进一步研究和探讨。

  参考文献:

  [1]  郑宏钧,詹亚华,张荒生,等.现代中药材鉴别手册[M].北京:中国医药科技出版社,2001:182.

  [2]  国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部[S].北京:化学工业出版社,2000:6.

  基金项目:湖北省教育厅重点科研 B类项目(No.2004X090)

  (湖北中医学院,湖北 武汉  430061;  湖北民族学院附属医院,湖北 恩施  445000)

 


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