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高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参水溶性成分的含量

来源:中国论文下载中心 作者:王书梅 2008-6-4
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摘要: 摘要:目的建立反相高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B等水溶性成分的含量。方法以标准品丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B为内标,色谱柱: KromasilC18柱(4。结果丹参素加样回收率为97。丹参酚酸B加样回收率为100。...


    摘要:目的建立反相高效液相色谱法测定丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B等水溶性成分的含量。方法以标准品丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B为内标,色谱柱: KromasilC18柱(4.6×20 mm,5 μm);流动相:流动相A:水-二甲基甲酰胺-冰醋酸(90∶4∶2),流动相 B:甲醇。梯度洗脱;流速:1.0 ml/min;检测波长:281 nm。结果丹参素加样回收率为97.59%~101.66%,RSD为1.50%(n=6);原儿茶醛加样回收率为97.19%~101.25%,RSD为1.90%,(n=6);丹参酚酸B加样回收率为100.39%~102.11%,RSD为0.6%,(n=6)。结论实验结果表明,该方法操作简便,重现性好,可作为样品的检测方法。

  关键词:丹参素;    原儿茶醛;    丹参酚酸B  ;  高效液相色谱法 ;   含量测定

  Determination of Water-solubility Component in Danhong Injection by HPLC

  Abstract:ObjectiveAn HPLC method was developed to separate and determine salvianic acid , protocatechuic aldhyde and salvianolic acid B in Injection Danhong。MethodsSeparation was performed on an Kromasil C18(5 μm,4.6 mm×20 mm) with water-dimethylformanide -glacial acetic acid (90∶4∶2)as mobile phase and determination at 281nm . ResultsThe recoveries were between 97.59 and 104%. And RSD was not more than 2.0%。Conclusion The method is simple,rapid and reproducible for determination of salvianic acid and protocatechuic aldhyde in Injection Danhong.

  Key words:Salvianic acid ;  Protocatechuic aldhyde ;   Salvianolic acid B ;   HPLC ;  Determination
   
   我医院常用的丹红注射液,已临床使用多年,具有活血化瘀、理气止痛的功效。用于胸中憋闷,心绞痛等症,疗效显著。丹红注射液的君药丹参的主要有效成分为丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸B等水溶性成分,但目前注射液还没有对此3个成分同时进行含量测定。为了更好的控制本品的质量,本实验采用高效液相色谱 HPLC法分别测定了丹红注射液中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B的含量。

  1  器材

   高效液相色谱仪(日本岛津Agellen;SPD-10AVP紫外检测器;N2000数据处理系统);KromasilC18柱(4.6 mm×20 mm,5 μm);丹参素对照品(含测用,上海医科大学药学院);原儿茶醛对照品(中国药品生物制品检定所,110810-200205);丹参酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所,111562-200302);甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,二甲基甲酰胺、冰醋酸等其它试剂均为分析纯。

  2  方法与结果

  2.1  色谱条件与系统适用性实验[1]用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相A:水-二甲基甲酰胺-冰醋酸(90∶4∶2),流动相B:甲醇。梯度洗脱的时间和流动相的比例见表1。表1  丹参水溶性成分的流动相(略)

  2.2  供试品溶液及对照品溶液的制备丹参素对照品溶液的制备:精密称取丹参素对照品10.80 mg于25 ml容量瓶中,加甲醇定容成25 ml,制成每毫升含0.432 mg的丹参素对照品溶液。

  原儿茶醛对照品溶液的制备:精密称取原儿茶醛对照品7.10 mg于10 ml容量瓶中,加甲醇定容成10 ml,制成每毫升含0.71 mg的原儿茶醛标准溶液。

  丹参酚酸 B对照品溶液的制备:精密称取丹参酚酸 B对照品9.95 mg于25 ml容量瓶中,加甲醇定容成25 ml,制成每毫升含0.398  mg的丹参酚酸 B对照品溶液。

  混合标准溶液的制备:精密吸取以上各对照品溶液各5 ml,混匀,作为混合对照品溶液。

  丹参供试品溶液制备:取丹红注射液适量,加水稀释后,即得丹参药材供试品溶液。

  2.3  专属性考察在选定条件下,供试品中丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B可与其它组分基线分离,与邻近色谱峰的分离度 R>1.5,按丹参素峰计算理论板数 n为3 000。将丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B对照品溶液、丹参药材供试液在上述条件下进样,图谱见图1~2。

2.4  线性范围的考察精密吸取混合对照品溶液(丹参素0.432 mg/ml,原儿茶醛0.71 mg/ml,丹参酚酸 B0.398 mg/ml)2 ,4 ,6 ,8 ,10 ,12 ,14 μl依次进样,在上述色谱条件下进行测定。记录色谱图,分别以各标准品的峰面积为纵坐标,对照品的含量为横坐标,回归方程得:丹参素线性方程为:y=636x-6.466,r=0.999 9,丹参素在0.864 ~6.048 μg范围,峰面积值与进样量有良好线性关系。原儿茶醛的标准曲线 y=3345.4x+4.65,r=1,原儿茶醛的进样量在0.071 ~0.497μg范围内,峰面积值与进样量有良好线性关系。丹参酚酸B的标准曲线为 y=234.34x-26.2,r=0.9 999,丹参酚酸 B的进样量在0.796~5.572 μg范围内,峰面积值与进样量有良好线性关系。

  2.5  精密度实验取同一份丹参水溶性对照品溶液,重复进样5次,测得峰面积值,丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B三者的 RSD分别为0.12%,0.18%,0.26%。因此可知三者的精密度均良好。

  2.6  重现性实验取同一批号(051201)丹红注射液5份,适量,分别精密称定,同前述方法制备供试液,进样,测定结果丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B的 RSD分别为0.13%,0.36%和0.92%结果表明,该方法重现性良好。

  2.7  稳定性实验对同一份供试品和对照品溶液,按上述方法每隔2 h测定1次,结果 RSD在0.12%~0.86%之间,说明丹参对照品与丹红注射液供试液在8 h内较为稳定,可以满足测定的需要。表2  加样回收率测定样品中含量(略)
 
  结果表明,加样回收率在97.19%~102.11%之间,丹参素、原儿茶醛、丹参酚酸 B平均回收率分别为98.18%,99.2%,101.5%,符合含量测定的要求。

  2.8  加样回收率实验精密称取已知含量的供试品(丹参素含量为8.068 7 mg/g,原儿茶醛的含量为1.386 6 mg/g,丹参酚酸B的含量为6.444 0 mg/g)1 g,共6份,加水稀释后,按上述方法制备供试液,测定峰面积,计算含量,以下式计算回收率,结果见表2。

  2 .9  样品测定取3批丹红注射液,按上述方法测定,结果见表3。表3  丹红注射液中水溶性成分的含量(略)
 
  由表3可知,丹红注射液中含丹参素约为8.317 mg/ml,含原儿茶醛约为1.343 mg/ml,含丹参酚酸B约为6.443 mg/ml。

  3  讨论

  3.1  丹参素、原儿茶醛与丹参酚酸B极性相差较大,出峰的时间相差也较大,为了能采用一种流动相同时测得3种成分,并缩短出峰时间,故采用梯度洗脱的方法进行。

  3.2  丹参酚酸B在湿热的作用下,会分解生成丹参素、原儿茶醛等[2],长时间放置,特别是在温度较高的环境中,丹参酚酸 B的峰面积下降较快,因此,丹红注射液要在阴凉干燥库保存。并建议在丹红注射液中,增加丹参酚酸B的含量测定项。

  参考文献:

  [1]张文生,李德坤,叶正良. 丹参提取物丹参素、原儿茶醛和丹酚酸 B的含量测定[J].药物分析杂志,2003,23(6):475..

  [2]毛声俊,侯世祥,唐昌炯,等.丹参素在加温加速条件下的含量变化规律研究[J].中国中药杂志,2003,28(3):220.


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