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高效液相法测定地骨降糖胶囊中腺苷的含量

来源:中国现代临床医学 作者: 2007-5-18
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摘要: 高效液相法测定地骨降糖胶囊中腺苷的含量 作者:罗兴平,杨玲霞,徐培元,陈立仁,李永民 来源:中国现代临床医学【摘要】目的测定地骨降糖胶囊中腺苷的含量。2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml。2mol/L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至lO00ml,即得)-四氢呋喃(99:1)为流动相,流速:1。结果腺苷在0。...


                    高效液相法测定地骨降糖胶囊中腺苷的含量
          作者:罗兴平,杨玲霞,徐培元,陈立仁,李永民 来源:中国现代临床医学 
【摘要】目的测定地骨降糖胶囊中腺苷的含量。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil C18柱(250mm×4.6m,5μm);磷酸盐缓冲液(pH6.8取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml。加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至lO00ml,即得)-四氢呋喃(99:1)为流动相,流速:1.Oml/min;检测波长20Onm。结果腺苷在0.05~0.5 μg范围内具有良好线性关系,平均回收率为96.87%,RSD=1.65%。结论该法可用于地骨降糖胶囊中腺苷的含量测定。

【关键词】地骨降糖胶囊;冬虫夏草;腺苷;高效液相色谱法


    降糖胶囊由郁金、地骨皮、冬虫夏草等六味药组成,具有滋阴润燥、化瘀通络的功能,用于治疗阴虚血瘀所引起的消渴、Ⅱ型糖尿病见上述证候者具有较好的疗效。方中冬虫夏草为主药,其有效成分为腺苷,我们采用HPLC法测定了降糖胶囊中腺苷的含量,该法简便、准确,灵敏度高,可很好的控制制剂的内在质量。
    1 仪器与试药
    LC-2010A高效液相色谱仪、PDA-lOAvp检测器(日本Shimazu公司),SB5200超声波清洗器(上海Branson公司);腺苷对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用);地骨降糖胶囊及阴性空白(青海省金诃藏药厂);四氢呋喃(色谱纯);水为超纯水;其余试剂均为分析纯。
    2 色谱条件
    Kromasil C18柱(250mmx4.6mm,5μm);流动相:磷酸盐缓冲液(pH6.8取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/L氢氧化钠溶液118ml,用水稀释至lO00ml,即得)-四氢呋喃(99:1),流速:1.Oml/min;检测波长26Onm。
    3 实验方法与结果
    3.1 样品溶液的制备取本品内容物(约相当于4粒),精密称定,加9O%甲醇lOml,精密称定,超声处理20min,放冷,加90%甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液。用0.45μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。另取不含冬虫夏草的阴性对照品,同法制成阴性对照溶液。
    3.2 对照品溶液的制备 精密称取腺苷对照品,加90%甲醇制成0.O15mg/ml的对照品溶液。
    3.3 系统适应性试验 取供试品,阴性空白样品及对照品溶液,照2项色谱条件,各进样lOμl,测得HPLC图谱。图谱表明阴性对照色谱没有干扰。理论塔板数按腺苷峰计算不低于3OOO。
    3.4 线性关系的考察 精密称取腺苷对照品,加90%甲醇制成0.05mg/ml的溶液,精密吸取上述溶液1、2、4、 6、8、lOml于lOml容量瓶中加90%甲醇稀释至刻度,摇匀,各进样1Oμl,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积值为纵坐标,腺苷量(μg)为横坐标绘制标准曲线,计算的回归方程为:Y=3806623X+6617 r=0.9998。
    表明腺苷在0.05~0.5μg范围内具有良好线性关系。
    3.5 精密度试验取对照品溶液,进样10μl,重复进样6次,峰面积的RSD为1.82%。
    3.6 稳定性试验取配制好的对照品溶液在0、1、2、4、6、8h分别进样1Oμl,记录峰面积,结果峰面积的RSD为1.94%。可见供试品溶液在8h内稳定。
    3.7 重现性试验取降糖胶囊(批号为20010710),平行6份样品,按样品测定法测定,结果每粒含腺苷分别为0.042mg,O.04lmg、0.04mg、0.043mg、0.042mg、0.040mg(RSD=2.52%,n=6)表明本法重现性较好。
    3.8 回收率试验采用加样回收法,取已测知含量的降糖胶囊(批号20010710含量为0.041mg/粒)样品6份,精密称定,分别精密加入腺苷适量,按样品溶液制备项下操作,依法制备、进样、记录色谱图、计算回收率。
    3.9 样品测定 分别精密吸取对照品与样品溶液各10μl,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定,记录色谱图,以外标法计算样品中腺苷的含量。
    4 讨论
    4.1 制剂中腺苷的含量测定方法主要有薄层扫描法、分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法等。本文选用HPLC法测定地骨降糖胶囊中腺苷的含量,方法简便、准确,灵敏度高,可很好的控制制剂的内在质量。
    4.2 地骨降糖胶囊为中药复方制剂,成分复杂,试验中曾试用15%四氢呋喃的磷酸盐缓冲溶液;甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(13:87)、6%乙腈、磷酸盐缓冲液(pH6.8取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol/L氢氧化钠溶液l18ml,用水稀释至1000ml,即得)-四氢呋喃(99:1)等多种溶剂系统进行分离,确定以磷酸盐缓冲液(pn6.8取O.2mol/L磷酸二氢钾溶液250ml,加0.2mol几氢氧化钠溶液l18ml,用水稀释至1000ml,即得)-四氢呋喃(99:1)为流动相,腺苷的分离良好,阴性对照没有干扰。
    4.3 样品溶液的制备,试验中曾分别用90%甲醇进行了回流、冷浸、超声波提取三种提取方法的考察.结果表明三者提取效果基本相同,因超声波提取法简便、快速,故选择超声波提取法制备样品溶液。


【参考文献】
[1] 宋玉良,陈建真,等.血灵口服液中腺苷含量的测定[J].中国中医药科技,2OO2,9(3):163
[2] 劳海燕,朱梅,等.心肌保护液中腺苷的含量测定[J].广东药学,1999,9(2):36
[3] 熊金桂,金水康.虫草膏中腺苷含量测定方法的探讨[J].中国药事,2OO0,14(1):39
[4] 戚雁飞.HPLC测定复方猴头胶囊中腺甘的含量[J].中成药,2O02,24(3):181
 


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