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复方加味牵正合剂的鉴别方法

来源:中国色谱网 作者:熊学敏唐琼康明曹珏 2007-5-18
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摘要: 摘要目的:研究控制复方加味牵正合剂质量的鉴别方法,为制定质量标准提供依据。结果:该合剂中黄芪、川芎、当归、防风、白附子、僵蚕的薄层色谱均无干扰,6味药的综合鉴别具有很强的专属性。结论:可作为该合剂的质控方法。关键词:加味牵正合剂黄芪川芎当归防风白附子僵蚕薄层色谱、僵蚕)的基础上依据中医基础理论添加黄......


  摘要 目的:研究控制复方加味牵正合剂质量的鉴别方法,为制定质量标准提供依据。方法:采用薄层色谱法。结果:该合剂中黄芪、川芎、当归、防风、白附子、僵蚕的薄层色谱均无干扰,6味药的综合鉴别具有很强的专属性。结论:可作为该合剂的质控方法。
  关键词:加味牵正合剂 黄芪 川芎 当归 防风 白附子 僵蚕 薄层色谱

、僵蚕)的基础上依据中医基础理论添加黄芪、川芎、当归、防风、甘草等中药组成,经渗漉、水煮、醇沉等多步生产工艺精制而成。为方便服用经剂型改革成合剂,具有补气益血、祛风通络之功效,临床上多用于周围性面瘫和眼睑斜歪的患者[1]。由于本方药味较多,互相干扰严重,而且8味中药中有2味是虫类药材,又属“君药”,中国药典无对照品和标准品,所以鉴别有一定的难度。现有文献报道的相关方法难以直接采用,因此,为控制制剂的质量,我们经过反复实验,选择了黄芪、川芎、防风、当归、僵蚕、白附子作为质控的定性指标,采用一定的预处理方法进行薄层色谱鉴别研究,现报道如下。

1 材料及仪器

  加味牵正合剂(本所中药二室),对照品:黄芪甲甙、阿魏酸、乌头碱和川芎、当归、防风对照药材(中国药品生物制品检定所),硅胶G(青岛海洋化工厂),中性柱层析用氧化铝(上海化学一厂),本实验所用化学试剂均为AR级。
  超声波发生器(上海必能胜超声有限公司),三用紫外灯(上海顾材电光仪器厂),P-1层析缸(200cm×200cm),薄层板(200cm×100cm),硅胶[0.5%CMC-Na(1∶3),板厚:0.5cm,经105℃活化1h置干燥器备用],微量进样器(上海华亭微量进样器厂),PBQ-I型薄层铺板仪(重庆南岸新力电器厂)。

2 定性鉴别

2.1 黄芪
2.1.1 供试液制备 吸取本品合剂100ml,水浴蒸干,加甲醇15ml,全部转移至具塞瓶超声提取30min。静置过夜,过滤,再加入甲醇15ml,超提15min,过滤,合并滤液,浓缩甲醇定容于5ml,为供试液备用,按处方同法制备缺黄芪阴性对照液;另取黄芪药材3g,碾成粗粉,同法制成药材对照液。精称黄芪甲苷适量以甲醇溶液制成1mg/ml备用。
2.1.2 层析及定性 分别用微量进样器吸取黄芪甲甙对照液、供试液、阴性对照品液各4μl,点于同一硅胶G板上,以氯仿∶甲醇∶水∶乙酸乙酯(13∶7∶2∶1)的混合液于10℃静置过夜后的下层液为展开剂展开,展距14~15cm。取出晾干,喷10%硫酸乙醇液,于105℃烘干5min[2]。结果供试品及药材对照色谱中,在与黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上,均置相同的紫色斑点(Rf=0.9)。阴性对照液色谱中对应处无干扰。结果见图1。

 

图1 黄芪的薄层色谱图
1黄芪甲甙对照品 3供试品
2黄芪药材对照 4缺黄芪阴性对照

2.2 川芎
2.2.1 供试液制备 吸取本品合剂50ml,于水浴上浓缩蒸干。加石油醚10ml,2次超声提取30min,合并2次提取液。浓缩定容于5ml备用,按处方比例同法制备缺川芎阴性对照液;另称取川芎药材2g,碾成粗粉,加石油醚10ml,同法制成药材对照品备用。
2.2.2 层析与定性 分别吸取川芎药材对照品、供试品、阴性对照品各5μl,点于同一硅胶G-CMC-Na板上,分别以苯∶乙酸乙酯(9∶1)和氯仿∶苯∶甲醇(10∶10∶3)为展开剂,展距18~19cm,晾干后置于254nm下检测。结果供试品及药材对照相应的色谱中,显相同的斑点。见图2。其中图2b供试品与对照药材在Rf值为0.83,0.41,0.27处有3个相同的荧光斑点,阴性对照无干扰[3]

 

图2 川芎的薄层色谱图[a,b的展开剂分别为苯∶乙酸乙酯(9∶1)和氯仿∶苯∶甲醇(10∶10∶3)]
   1药材对照品  2供试品  3阴性对照品

2.3 防风
2.3.1 供试液制备 吸取本品150ml,水浴蒸干,加60%乙醇溶解(20ml,2次),转移至具塞瓶中超声提取30min,过滤,滤液加乙醚15ml萃取2次,合并萃取液,浓缩定容于1ml备用;另称取防风药材2g,剪碾成粗粉,加乙醚10ml,超提2次各30min,过滤、合并滤液,浓缩定容于1ml作为药材对照品备用,按处方同法制得缺防风阴性对照品备用。
2.3.2 层析与定性 分别吸取防风药材对照品、供试品、阴性对照品各5μl,点于硅胶G板上,以石油醚∶乙酸乙酯(8∶2)为展开剂,展距15cm,后取出晾干,置于紫外254nm处检测[4]。结果在对照药材色谱相应的位置上,对照品和供试品显相同的斑点,阴性对照品无干扰。见图3。

 

图3 防风的薄层色谱图
1防风乙醚萃取液  2供试品  3阴性对照品

2.4 当归
2.4.1 供试液制备 吸取本品50ml,水浴蒸干,加入95%乙醇(10ml,2次)超声提取2次,各30min。过滤、合并过滤液,浓缩定容于5ml,作为供试液备用;称取当归药材2g,碾成粗粉,同法制备定容于2ml作为药材对照品备用;另精称阿魏酸适量,加乙醇制成1.0mg/ml的标准品液备用;另按处方比例,同法制成缺当归阴性对照液备用。
2.4.2 层析与定性 分别吸取阿魏酸标准液、当归药材对照液、供试液、阴性对照液各5μl,点于同一硅胶G板上,分别以苯∶乙酸乙酯(9∶1)和正乙烷∶乙酸乙酯(9∶1)为展开剂展开,展距18~18.5cm,后取出晾干,置于365nm紫外下检测。结果供试品在与标准品和对照药材色谱相应的位置上显示两个相同的蓝色荧光斑点[5](Rf值分别为0.58与0.44)。阴性对照品无干扰。见图4。

 

图4 当归的薄层色谱图[a,b的展开剂分别为苯∶乙酸乙酯(9∶1)和正乙烷∶乙酸乙酯(9∶1)]
1阿魏酸标准品    3供试品
2当归药材对照液  4阴性对照品

2.5.1 供试品制备 吸取本品100ml,水浴上蒸干,加入10ml甲醇定性转至具塞瓶中,先静置过夜,过滤。药渣超声提取30min。过滤、合并浓缩,定容至2ml,作为供试品;另称取僵蚕药材1.0g,碾成粗粉,加入4ml甲醇,同法制成药材对照液。另按处方比例同法制成缺僵蚕的阴性对照液备用。
2.5.2 层析与定性 分别吸取药材对照液6μl,供试品3μl,阴性对照液3μl,点于同一硅胶G板上,以丙酮∶苯∶70%乙醇∶浓氨水(5∶4∶2∶1)为展开剂展开[6],展距18~18.5cm,取出晾干后,置于紫外254nm检测。结果供试品及药材对照色谱中,在相应的位置上(Rf值为0.18)有荧光斑点,阴性对照无干扰。结果见图5。

 

图5 僵蚕的薄层色谱图
1僵蚕药材对照品  2供试品  3阴性对照品

2.6 白附子
2.6.1 供试液制备 吸取本品200ml,水浴蒸干,加石油醚10ml,溶解转移至具塞瓶中,超声提取30min,放置过滤,残渣挥干石油醚,再加甲醇5ml,超提30min,放置过夜后过滤。滤液浓缩定容1ml备用;另称取白附子10g,同法制备药材对照液备用;按处方比例,同法制备缺附子的阴性对照液备用;另精称乌头碱3mg/ml,于1ml容量瓶中,加乙醚溶解,定容制成3mg/ml标准液备用。
2.6.2 层析与定性 吸取乌头碱标准液5μl,白附子药材对照品液、供试液、阴性对照液各10μl,点于同一块硅胶G板上,以乙醚∶氯仿∶甲醇(1∶2∶1)为展开剂,预先饱和状态15min,展开35~45min,展距8~19cm,后取出晾干,用碘蒸汽熏板显色[7]。结果药材对照品在乌头碱对照色谱相应的位置上,置相应的斑点(Rf=0.3),阴性对照无干扰,结果见图6。

 

图6 白附子的薄层色谱图
1乌头碱标准液      3供试液
2白附子药材对照液  4阴性对照液

3 讨论

3.1 由于本处方中,药味多,相互间干扰大,主药之一全蝎采用直接溶剂提取无特征物,薄层色谱结果重显性不好,许多文献报告的纸层析分析结果差,分离困难,有待进一步研究和讨论。
3.2 当归和川芎,我们经实验可在同一薄板上检定,分离鉴别预试结果尚可。我们将另作讨。
3.3 白附子中,因乌头碱含量低,为保证顺利鉴出,故供试品取药量大,为200ml,同时薄板展开后采用碘蒸气熏板,斑点清晰,结果明显,重现性好。

本项研究为江西省年度中医药科研计划资助项目(编号99A8)
作者单位:熊学敏 江西省中医药研究所,南昌330077
     唐 琼 江西中医学院
     康 明 江西省中医药研究所,南昌330077
     曹 珏 江西医学院

参考文献

1 郭润田.辩证治疗周围面瘫临床总结.北京中医,1997,16(1)∶32
2 张贵君主编.常用中药鉴定大全.哈尔滨:黑龙江科学技术出版社,1993.716~717
3 康廷国主编.中成药薄层色谱鉴别.北京:人民卫生出版社,1995.132~133
4 孟宪舒主编.中成药分析.北京:人民卫生出版社,1998.377~378
5 郑虎占,董泽宏,佘靖主编.中药现代研究与应用.北京:学苑出版社,1997.1807~1808
6 熊学敏,曹珏,康明.纯蛇粉胶囊中乌梢蛇的薄层层析鉴别.蛇志,1998,10(4)∶5
7 姚三桃,付桂兰,洪海燕,等.白附子新老制品化学成份比较.中国中药杂志,1993,18(4)∶212

中国新药杂志1999年第8卷第11期

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