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胶束电动毛细管色谱法测定西洋参中人参皂苷Rb1,Re的含量

来源:本站原创 作者:佚名 2007-5-18
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摘要: [摘要] 目的:建立西洋参中人参皂苷Re,Rb1的胶束电动毛细管色谱测定方法,考察影响分离的各因素,确定最佳色谱条件。结果:线性范围Re为0。65mmol/L,Rb1为0。加样回收率Re为97。...


 
    [摘要] 目的:建立西洋参中人参皂苷Re,Rb1的胶束电动毛细管色谱测定方法,考察影响分离的各因素,确定最佳色谱条件。方法:测定缓冲液为含20m mol/L硼酸、20m mol/L硼砂、60mmol/L胆酸钠和20%乙腈的混合溶液。电压20 kV,柱温25℃,检测波长203nm,压力进样5s。结果:线性范围Re为0.38~1.65mmol/L,Rb1为0.42~1.76mmol/L。加样回收率Re为97.2%,RSD=1.6%;Rb1为97.7%,RSD=1.9%(n=5)。结论:该方法具有样品前处理简单,重现性好,所得色谱图信息丰富等特点。

    [关键词]高效毛细管电泳;西洋参;人参皂苷

    西洋参Panax quinquefolius L.为五加科人参属植物,原产北美洲加拿大的蒙特利尔、魁北克和美国东部。1975年,西洋参在我国引种成功,目前在东北、华北及华东地区均有栽培。

    西洋参中人参皂苷的含量测定方法有薄层扫描法、高效液相色谱法。高效毛细管电泳(HPCE)是一种迅速发展起来的新技术,具有分离效率高,分析时间短等特点。作者在岩上正藏报道的基础上,对色谱条件作了研究,取得了满意的色谱分离效果。

    1 仪器与试药

    Beckman P/ACE System 5500毛细管电泳仪(美国Beckman公司)GOLD色谱工作站,毛细管柱为50μm×57cm(有效长度为50cm),DAD检测器,检测波长203nm。硼酸、硼砂、胆酸钠均为分析纯;乙腈为色谱纯;[SERVA(Feibiochemica GmbH & Co.];水为2次重蒸水。

    人参皂苷Re(批号0704—20012),Rb (批号0754.20018)从中国药品生物制品检定所购买,均为含量测定用对照品。
进口西洋参药材(产地美国、加拿大)购于杭州华东医药股份有限公司,国产西洋参药材(产地吉林通化)委托吉林省药品检验所购买。由本所中药室林泉主任药师鉴定为P,quinquefolius。

    2 色谱条件的优化

    2.1 对照品溶液和供试品溶液的制备

    对照品溶液:取人参皂苷Re,Rb1各约10mg,精密称定,置10mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液:将样品粉碎过40目筛,取约1.5g,精密称定,加甲醇50mL,置水浴中加热回流1.5h,放冷 滤过,精密吸取续滤液25mL,水浴上蒸干,残渣用50%甲醇溶解并稀释至10mL,放置过夜,然后用0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液。

    2.2 缓冲盐的种类及浓度

    根据文献报道,选用20mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0),内含25%乙腈和75mmol/L胆酸钠的溶液作为运行缓冲液。结果人参皂苷Re,Rb1未能达到基线分离,且Rb1的柱效不高。

    在其他色谱条件保持不变的情况下,用pH 9.0 20mmol/L硼酸-硼砂盐缓冲液,进行分离,取得了较为满意的分离。

    缓冲盐浓度以20mmol/L为佳,此时电流强度小于100mA,浓度过高电流过大,影响分离和重现性。

    2.3 缓冲液pH值对分离的影响

    取硼酸、硼砂分别配制成浓度为40mmol/L的甲、乙2种溶液。取甲、乙溶液按不同比例混合,测定pH值,再加入胆酸钠和有机改性剂乙腈,结果表明溶液pH在9.0左右变动时,对分离影响不大,但当溶液pH 为8.0时,2组分峰形较差。

    2.4 表面活性剂种类及浓度对分离的影响

    在胶束电动毛细管色谱中,十二烷基硫酸钠(SDS)是用得最多的一种阴离子表面活性剂,因此也曾选用SDS作胶束,进行试验,结果基线波动很大,分离较差。可能由于SDS在203 DITI左右波长处吸收较大造成。比较了几种不同的表面活性剂,以胆酸钠为佳。试验考察了不同浓度对迁移时间的影响,结果表明,在相同条件下随着胶束浓度的增加,迁移时间增加。

    2.5 有机改性剂对分离的影响

    常用的有机添加剂有乙腈、甲醇、异丙醇。实验表明乙腈作为添加剂使用效果最佳,有机溶剂添加剂还能显著延长迁移时间。

    通过对以上影响色谱分离诸因素的考察,确定最佳色谱条件如下:运行缓冲液为20mmol/L硼酸-硼砂缓冲溶液(pH 9.0),内含60mmol/L胆酸钠,20%乙腈,操作电压20kV,温度25℃,检测波长203nm,压力进样5s。所得对照品溶液、供试品溶液色谱图。

    3 含量测定方法的论证

    3.1 线性关系考察

    精密称取Re,Rb1对照品各适量,加50%甲醇溶解并稀释制成每1mL分别含Re0.38,0.78,0.98,1.22,1.65mg和含Rbl 0.42,0.83,0.98,1.34,1.75mg的系列混合对照品溶液,在上述色谱条件下进样5sec.后,加压分离,测得峰面积积分值。

    Re:Y=0.6073X +0.0030,r=0.9993;Rb1:Y=0.7232X一0.0098,r=0.9997。结果表明Re在0.38~1.65 g/L,Rb1在0.42~1.76g/L呈良好的线性关系。

    3.2 精密度试验

    取混合对照品溶液,上机测定5次,每次压力进样5s。测得峰面积积分值,计算RSD。Re为1.4%,Rb1为1.6%。

    3.3 重复性试验

    取同一批样品5份,按供试品溶液制备项下方法进行操作,即得同一产地的5份供试品溶液,上机测定峰面积积分值,按外标法计算含量Re,平均含量为8.75mg/g,RSD为2.4%,Rb1平均含量为21.41mg/g,RSD为1.6%。

    3.4 稳定性试验

    取同一供试品溶液,分别于配制后0,1,3,5,8,24h进样测定,结果RSD(n=5)Re为2.1%,Rb1为2.3%。结果表明样品在24h内基本稳定。

    3.5 加样回收率试验

    取已测定含量的同一批西洋参粉末约0.75g,精密称定,加入Re,Rb1对照品溶液(1.183,1.524g/L),置水浴上蒸干,然后按供试品溶液制备项下方法制成供试品液,进样测定。

    3.5 3批西洋参药材人参皂苷Re,Rb1含量的测定取西洋参粉碎成细粉,按供试液制备方法操作,在上述色谱条件下,上机测定,3批样品中人参皂苷Re,Rbl的含量。

    4 总结

    溶解样品用溶剂,经比较以50% 甲醇为佳,如用甲醇溶解,运行时易发生电流中断现象,而用水作溶剂时,残渣中的挥发油不溶解,溶液呈乳剂状。本色谱条件取得成功分离的基础是选择了合适的缓冲溶液及有机溶剂添加剂,采用硼酸.硼砂缓冲溶液,可以调节分离选择性。有机溶剂添加剂不仅能影响电渗流和电泳速率,更重要的是影响待测组分在胶束和水相之间的分配系数,实验证明乙腈是最为合适的添加剂。本法采用高达20%量的乙腈来提高分离度。胶束电动毛细管色谱法测定西洋参中人参皂苷,具有样品前处理简单,可以同时测定两种成分,所得色谱图信息丰富等优点。可以用于西洋参药材及其制剂的质量控制或品质评价。

[参考文献]

[1] 中国药典.一部.20001.1.

[2] 王旭,周富荣.HPLC法测定西洋参中人参皂苷的含量.中国中药杂志,1999,24(4):227.

[3] 孙文基,郭耀武,等.国产西洋参中总皂苷及人参皂苷的含量考察.西北药学杂志,1997,12(1):13.

来源:东方医药网


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