人参皂苷正相薄层色谱二维分离的优化

    摘要:在薄层色谱分离人参皂苷的两种互补性的流动相组分比例与皂苷比移值呈相关关系的基础上,以薄层色谱分离中距离最小的两点之间的距离Dmin为优化标准,对人参皂苷的二维分离结果进行预测和优化。通过计算机扫描不同流动相组成下的Dmin值得到的三维网络图显示出的最大Dmin下的二维流动相的组成,即为达到最佳二维分离结果的流动相组成。以优化的流动相对皂苷进行二维展开,分离结果与预测结果吻合,且比一维展开分离出了多的新的皂苷组分。

    关键词:人参皂苷;二维薄层色谱法; Dmin

    实验部分

    仪器与试剂

    CAMAG Ⅱ型薄层色谱扫描仪/ 计算机/ CATS3.17 (CAMAG公司,瑞士) , PBQ 型自动薄层铺板器(重庆南土岸新力电器厂) ,超声波发生器(CSF-1A型,上海超声波仪器厂) ,XY双底展开缸(上海信谊仪器厂) ,Linomat Ⅳ点样仪(CAMAG公司,瑞士) ,硅胶H(青岛海洋化工厂) 。

    人参的有效成分提取物人参总皂苷(大连化物所凯飞公司) ,单体人参皂苷标准样品(大连药检所) 。有机溶剂均为分析纯。

    色谱条件

    制板：配体积分数为1.0 %的CMC-Na 溶液,静置3 d～4 d ,直到溶液中的短纤维沉降完全(与上层清液有一明显分界线) ,取上层清液同硅胶H 混合配制硅胶溶液,搅拌至粘度合适时置于超声波发生器中约0.5 h 以除气泡。涂板的厚度为0.3mm ,静置2 d 使板阴干后于110 ℃下活化0.5 h～1h ,放入干燥器中备用。

    点样、展开与显色：人参皂苷溶液由人参皂苷溶于甲醇中而得,质量浓度为5 g/ L 。薄层板的大小为100 mm ×100 mm。将板平放于桌上,令左下方顶点为原点,在X , Y 轴均为15 mm 处点样,先沿Y 轴方向以不同比例的氯仿2甲醇为流动相进行展开,展距为95 mm ,展开后吹干,将板置于密闭容器中抽真空以除去残留在板上的展开剂,然后沿X 轴向以不同比例的正丁醇-乙酸乙酯为流动相展开,展距亦为95 mm ,待板干后用碘蒸气显色。

    结果与讨论

    薄层色谱二维分离的优化,关键是要选择具有不同选择性的流动相对,且要求二维流动相下的人参皂苷薄层色谱保留值与流动相的组成呈相关关系。通过实验发现,展开剂正丁醇-乙酸乙酯-水(S1 )与氯仿-甲醇-水(S2) 是通过不同作用机理来实现对人参皂苷的分离的,它们对人参皂苷的分离有着明显的互补作用;而S1 与S2 虽为三元溶剂,但它们实际上仅是水饱和混合溶剂,其中水的作用主要是调节薄层板极性以减少拖尾现象而促进分离。若不考虑水的影响,而只是改变S1 中正丁醇与乙酸乙酯的比例或S2 中氯仿与甲醇的比例,则两种展开剂一维展开所得的保留值分别与展开剂中的组分的体积分数呈较好的二次相关关系。
令V 正丁醇/ ( V 正丁醇+ V 乙酸乙酯) 为Xs , V 氯仿/( V 氯仿+ V 甲醇) 为Ys , 不同Xs (1.0 ～ 0.3) 与Ys(0.75～0.5) 下几种常见皂苷的保留值见表1 。人参皂苷的薄层色谱保留值与其二维流动相组分比例的二元相关关系可由方程(1) , (2) 描述并可求出任意Xs , Ys 下的各皂苷的保留值。