HPLC法测定奥美拉唑的血药浓度

作者：刘丽萍魏振满贺承山来源：中国色谱网打印本文放入收藏夹收藏到新浪

摘要目的：建立人血浆中奥美拉唑(OME)浓度的HPLC测定方法。结果：OME与内标分离良好，血浆中平均回收率为106。ml－1范围内线性关系良好。HPLC法中图分类号：R917文献标识码：B文章编号：1006-0103(2000)03-0209-02 奥美拉唑(omeprazole,OME)是一种高效抑制胃酸分泌药物。...

　　摘要　目的：建立人血浆中奥美拉唑(OME)浓度的HPLC测定方法。方法：以格列哔嗪为内标，乙腈∶磷酸盐缓冲液(0.02 mol^.L^－1磷酸二氢钾，pH3.5)(30：70)为流动相，检测波长302 nm。结果：OME与内标分离良好，血浆中平均回收率为106.17%，日内、日间RSD小于10%，浓度在20～4000 ng^.ml^－1范围内线性关系良好。结论：本法灵敏度高，专一性强，血样提取简便，适于临床血药浓度监测的要求。
　　关键词　奥美拉唑；HPLC法
　　中图分类号：R917　　　文献标识码：B　　　
文章编号：1006-0103(2000)03-0209-02

　　奥美拉唑(omeprazole,OME)是高效抑制胃酸分泌药物。现建立了反相HPLC法测定人血浆中的OME浓度的方法。

1　材料与方法

1.1　仪器、药品与试剂
　　美国Waters公司HPLC系统，包括510泵，484紫外检测器，TC9300色谱数据工作站，U6K进样阀；高速离心机(北京医疗设备厂)；液体快速混合器(江西医疗器械厂)。OME对照品(扬州制药厂)；格列哔嗪对照品(GB，北京四环制药厂)；市售奥美拉唑注射剂(瑞典Astra公司，商品名洛赛克，批号199805，每支40 mg)。乙腈(色谱纯，Fisher Chemicals)；磷酸二氢钾、磷酸二氢钠、甲醇、二乙胺、叔丁基甲醚等均为分析纯；正常人空白血浆(307医院血站)。
1.2　实验方法
1.2.1 色谱条件　色谱柱为美国Waters μ Bondapak ODS柱(10 μm，3.9 mm×150 mm)。流动相为乙腈∶磷酸盐缓冲液(0.02mol^．L^－1磷酸二氢钾，pH3.5)(30∶70)。流速为1.0 ml^．min^-1，灵敏度为AUFS0.01，检测波长302 nm，柱温25℃。
1.2.2　对照溶液及内标液的配制　分别精取OME和GB标准品各5 mg，用甲醇溶解，使成浓度为1 mg^．ml^－1的标准贮备液，置-20℃冰箱冷冻备用。另取GB标准贮备液(1 mg^．ml^－1)用水稀释成40 μg^．ml^－1作为内标液，置4℃冰箱冷藏备用。
1.2.3　血浆样品的提取与测定　精取血样1 ml于10 ml试管中，加内标液100 μl，摇匀后加磷酸二氢钠缓冲液(pH=7)600 μl，摇匀，加提取液叔丁基甲醚3 ml，旋涡混合1 min，离心10 min(3 000r^．min^－1)，取有机相于尖底刻度试管中，于37℃水浴中氮气流吹干。加入50～200 μl流动相富集，进样2～10　μl。测得OME与内标峰高之比，根据标准曲线方程计算血浆中OME浓度。色谱图见图1。

图1　空白血浆(A)与样本血浆(B)色谱图
奥美拉唑t_R＝4.333min，内标t_R＝6.909min

2　结果

2.1　标准曲线的制备
　　精取OME标准贮备液(1 mg^．ml^－1)，分别加水稀释至浓度为1000 ng^．ml^－1和100 μg^．ml^－1的对照溶液A和B。另取10 ml试管，分别加入A液20、60、100、200、400 μl，B液6、10、15、20、40 μl及空白血浆1 ml，使其终浓度分别为20、60、100、200、400、600、1000、1500、2000、4000 ng^．ml^－1，按血浆样品相同方法提取与进样分析。求出OME与内标峰高比(R)对OME浓度(C)的回归方程。结果表明，OME血浆浓度在20～4000 ng^．ml^-1范围内线性关系良好，标准曲线方程为

C=203R+7.88，r=0.9987(n=10)。

2.2　回收率和精密度
2.2.1　回收率　按“2.1”法用OME对照贮备液配制成浓度为60、600、2000 ng^．ml^－1的血浆样品各5份，按样品测定方法从标准曲线求得血浆浓度，计算回收率及RSD(%)，结果见表1。

表1　OME回收率试验(n=5)

加入量 ng^．ml^－1	测得量/ng^．ml^－1	回收率/% (±s)	RSD/%
2000	2346.44	117.32±7.66	6.53
600	641.24	106.87±9.19	8.60
60	56.60	94.33±12.50	13.25

2.2.2　精密度　按上法配制浓度为60、600、2000ng^．ml^－1的血浆样品，于1日内不同时间及连续5日内测定，求得日内、日间回收率、RSD(%)，结果见表2。

表2　OME日内、日间精密度结果(n=5)

加标量 ng^．ml	日　内			日　间
加标量 ng^．ml	测定量	平均回收率/%	RSD/%	测定量	平均回收率/%	RSD/%
2000	2135.88	106.79	3.74	2128.70	106.44	8.91
600	649.28	108.21	8.90	641.24	106.87	5.60
60	54.87	91.45	9.07	55.60	92.67	9.75

页：

发布日期：2007-5-18

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3　讨论

3.1　现建立了HPLC法测定OME血浆药物浓度，方法简便、灵敏度高，最低检测浓度可达20 ng^．ml^－1，每次测定需血样0.5～1 ml，适用于药代动力学及血药浓度监测的需要。
3.2　奥美拉唑在碱性条件下稳定，在酸性环境极易分解。为避免血浆中提取的OME分解，经提取后的残渣宜在进样前再加流动相溶解。如果过早富集，则影响测定结果。
3.3　本法以叔丁基甲醚为提取溶剂，易于分离、提取率高，并可减少血浆中杂质干扰，优于文献报道的提取方法^［1］。

作者简介：刘丽萍(1963-)，女，副主任药师，从事医院药学、临床药学工作。
刘丽萍（北京解放军302医院药学部，北京 100039）　
魏振满（北京解放军302医院药学部，北京 100039）
贺承山（北京解放军302医院药学部，北京 100039）

参考文献

1，邓子煜，李雪宁，陈秋潮．HPLC测定奥美拉唑血药浓度［J］，中国药学杂志，1996，31(10)∶608

收稿日期：1999-08