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高效液相色谱法测定顽痹通胶囊中士的宁的含量

来源:中国色谱网 作者:曹红李凯刘云 2007-5-18
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摘要: 摘要目的:建立测定顽痹通胶囊中士的宁含量的高效液相色谱法。方法:采用高效液相色谱法。6mm 5μm)为色谱柱。关键词顽痹通胶囊。...


 

  摘 要 目的:建立测定顽痹通胶囊中士的宁含量的高效液相色谱法。方法:采用高效液相色谱法。以ZORBAX RX-SIL(150mm×4.6mm 5μm)为色谱柱;流动相:正已烷-二氯甲烷-甲醇-浓氨水(270∶270∶20∶1.7);检测波长:254nm;流速:1.0ml.min-1结果:士的宁的加样回收率为97.82%,RSD为1.85%(n=5)。结论:该方法准确、灵敏度高,重现性好。
关键词 顽痹通胶囊;士的宁;高效液相色谱法
中图分类号 R927.2

DETERMINATION OF STRYCHNINE IN WANBITONG CAPSULES BY HPLC

Cao HongLi KaiLiu Yun
(Institute for Drug and Instrument Control of PLA,Beijing
 100071)

  Abstract AIM To establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method for determination of strychnine in wanbitong capsules.METHODS Silica gel was used as the stationary phase,n-hexane-dichloromethane-methanol-ammonia(270270201.7)as the mobile phase,with detection wavelength at 254nm and the flow rate of 1.0ml per minute.RESULTS The mean recovery of strychnine in wanbitong capsules was 97.82% and RSD was 1.85%.CONCLUSION This method was reliable and accurate.
  Key words Wanbitong capsules;Strychnine;HPLC

  顽痹通胶囊是由马钱子、白芍等十多味中药组成的复方制剂。具有活血化瘀,补气养血之功效。临床上用于风湿、类风湿性关节炎等的治疗。君药马钱子中的有效成分士的宁、马钱子碱均有剧毒,必须严格控制其含量。本文采用正相高效液相色谱法,测定复方制剂中士的宁(Strychnine)的含量,以控制成药的质量,效果良好,定量准确,快速。

1.仪器与试药
1.1 仪器 高效液相色谱仪:惠普HP-1050四元梯度泵;HP-1050 DAD检测器;HP化学工作站(美国惠普公司);HP DeskJet 500Q打印机。
1.2 试药 士的宁对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号 0705-9304)。顽痹通胶囊(空军类风湿病专科中心提供,批号 981202,981217,981230)。正已烷、甲醇为色谱纯;二氯甲烷、浓氨水等其它试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 ZORBAX RX-SIL分析柱(150mm×4.6mm 5μm);流动相:正已烷-二氯甲烷-甲醇-浓氨水(270∶270∶20∶1.7);检测波长:254nm(带宽2nm);参比波长:550nm(带宽100nm);流速:1.0ml.min-1;柱温:40℃。
按以上色谱条件得到样品、对照品、阴性对照液分离色谱图,见图1。

图1 顽痹通胶囊HPLC色谱图
A 阴性对照液 B 士的宁对照品 C 样品

2.2 方法学考察
2.2.1 色谱峰纯度检测 将士的宁对照品溶液和样品溶液注入高效液相色谱仪,应用二级管阵列检测器和色谱工作站,测得样品色谱中士的宁的色谱峰峰纯度系数大于995。
2.2.2 色谱峰光谱一致性检测 应用二级管阵列检测器和色谱工作站,对样品中士的宁色谱峰和对照品中士的宁色谱峰进行光谱扫描,结果两者光谱吸收图谱基本一致,见图2。

图2 士的宁色谱峰的光谱吸收图

2.2.3 样品溶液稳定性试验 取供试品溶液,分别于配制后0、0.5、1、2、3、5、8h,依样品测定法测定,结果表明,供试品溶液基本稳定。见表1。

表1 供试品溶液稳定性试验结果

时间(h)

峰面积

RSD(%)

0

918

 

 

0.5

929

 

 

1

923

 

 

2

934

924

0.81

3

931

 

 

5

922

 

 

8

913

 

 

2.2.4 精密度试验 精密吸取士的宁对照品溶液10μl,重复进样6次,测量峰面积,结果见表2。

表2 士的宁对照品溶液的精密度试验结果

次数

峰面积

RSD(%)

1

1000

 

 

2

992

 

 

3

998

997

0.58

4

998

 

 

5

990

 

 

6

1006

 

 

2.2.5 线性关系的考察 精密吸取士的宁对照品溶液(50μg.ml-1)0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml,分别置于10ml量瓶中,加醋酸乙酯稀释至刻度,摇匀。分别精密吸取各对照品溶液10μl,依次注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,士的宁进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,回归方程为:
Y=2168.25761X+22.9972,r=0.9995(n=5)。
结果表明,士的宁在0.1165~0.9320μg范围内呈线性关系。
2.2.6 重现性试验 按样品测定方法测定,对同一批样品(批号 981217)重复测定5次,结果见表3。

表3 顽痹通胶囊中士的宁重现性试验结果

称样量
(g)

士的宁含量
(mg/粒)

平均含量
(mg/粒)

RSD
(%)

0.4657

0.5332

 

 

0.4948

0.5566

 

 

0.5002

0.5574

0.5501

1.93

0.4992

0.5575

 

 

0.5037

0.5460

 

 

2.2.7 空白实验 按处方量制备缺马钱子药材的阴性对照液,照样品测定方法操作,结果空白溶液在与士的宁对照品相同保留时间处,未显示明显色谱峰,认为无干扰,见图1 A。
2.2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品(批号 981217)0.25g ,精确加入士的宁对照品,按样品溶液的制备方法操作,测定其含量,并计算回收率,测定结果见表4。

表4 顽痹通胶囊中士的宁的加样回收率试验结果

称样量
(g)

相当士的
宁的量(mg)

加入士的
宁的量(mg)

测得量
(mg)

回收率
(%)


(%)

RSD
(%)

0.2556

0.5638

0.5530

1.1060

98.05

 

 

0.2741

0.6046

0.5530

1.1486

98.37

 

 

0.2412

0.5320

0.5530

1.0652

96.42

97.82

1.853

0.2398

0.5289

0.5530

1.0588

95.82

 

 

0.2527

0.5574

0.5530

1.1128

100.43

 

 

3 样品测定
3.1 样品溶液的制备 取本品20粒,精密称定,取内容物约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中。加浓氨水2ml使润湿,精密加入氯仿25ml,密塞,称定重量,室温放置24h,称定重量,用氯仿补足减失的重量,充分振摇,滤过。精密量取滤液10ml,置分液漏斗中,用硫酸溶液(3→100)提取5次,每次20ml,合并硫酸液,加浓氨水使成碱性(pH 10),用氯仿提取5次,每次20ml,合并氯仿提取液,水浴蒸干。残渣用醋酸乙酯溶解至10ml量瓶中,稀释至刻度,摇匀,用0.5μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。
3.2 对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品,加醋酸乙酯制成50μg.ml-1的溶液,作为对照品溶液。
分别精密吸取对照品溶液与样品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,依上述色谱条件,以外标法计算含量。
3.3 样品测定结果 按样品测定方法测定3批成药样品,结果见表5。

表5 顽痹通胶囊中士的宁含量测定结果(n=3)

批  号

士的宁含量(mg/粒)

981202

0.5527

981217

0.5501

981230

0.5361

4 讨 论
4.1 供试品溶液提取方法的选择 曾采用浓氨水2ml润湿,25ml氯仿浸渍24h,滤过后,滤液蒸干。残渣加醋酸乙酯10ml定容,直接进样测定,结果在士的宁出峰处有干扰;直接测定马钱子碱没有干扰,且马钱子碱含量很高。经过反复萃取后,马钱子碱损失较多,已无法准确定量,可能是由于马钱子碱不易溶于硫酸溶液中,故含量测定时未列入马钱子碱。
4.2 对马钱子中士的宁的含量测定方法,文献报道有高效液相色谱法[1~3]、薄层扫描法[4]、计算分光光度法[4]等,其中以高效液相色谱法较为简便、准确。对流动相的选择:为了准确测定样品中士的宁的含量,排除干扰,减少了流动相中甲醇的比例,达到基线分离的效果。在配制流动相时,可先将甲醇与浓氨水按比例混匀,再加入二氯甲烷,最后加入正已烷。

作者简介:曹红,女,医学硕士,副主任药师。
李凯,第一军医大学中药专科96级实习学生。

作者单位:中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪器检验所 北京 100071

参考文献:
1 徐丽华,鲁静.HPLC法测定马钱子及其制剂中士的宁与马钱子碱的含量.药物分析杂志,1998;18(6):383
2 张振秋,沙明,袁昌鲁等.HPLC法测定马钱子及伤科七味片中士的宁与马钱子碱的含量.中草药,1998,29(4):236
3 梁宏.HPLC法测定九分散中麻黄碱、伪麻黄碱和士的宁的含量.药学学报,1990;(11):849
4 中国药典委员会.中华人民共和国药典.一部.北京:北京化学工业出版社,1995;372,409,39

(本文编辑 梁爱君)

收稿日期:1999-05-18
修改日期:1999-08-05

 

 


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