当前位置:Home > 药品天地 > 专业药学 > 实验技术 > 色谱技术 > 色谱论文 > 吴茱萸汤不同配伍情况下生物碱含量的RP-HPLC测定

吴茱萸汤不同配伍情况下生物碱含量的RP-HPLC测定

来源:中国色谱网 作者:赵冬梅张英毕开顺* 2007-5-18
336*280 ads

摘要: 摘要目的:采用反相高效液相色谱法测定吴茱萸汤不同配伍情况下的各处方中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。 结果:吴茱萸单味药中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的回收率分别为97。Key wordsWuzhuyu decoction,evodiamine,rutaecarpine,RP-HPLC吴茱萸汤始载于东汉张仲景所著《伤寒论》[1],由吴茱萸、生姜、人参、大枣四药组......


 

  摘要 目的:采用反相高效液相色谱法测定吴茱萸汤不同配伍情况下的各处方中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。
方法:ODS柱,以乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸(48∶52∶1∶0.1)为流动相,氯氟舒松为内标,紫外检测波长225nm。
结果:吴茱萸单味药中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的回收率分别为97.1%、93.7%;RSD分别为2.5%、2.6%n=。
结论:
本方法操作简单、准确、易行。

 

Determination of Evodiamine and Rutaecarpine
in DifferentCombinations
of the Wuzhuyu Decoction by RP-HPLC

Zhao DongmeiZhang Ying and Bi Kaishun

(Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110015)

Abstract ObjectiveThis paper reports an HPLC method for the determination of two alkaloids in the Wuzhuyu Decoction and its recipes with different compositions of the herbal medicines.MethodThe chromatographic conditions are listed below: ODS column, UV detector at wavelength 225 nm, and a mobile phase composed of acetonitrile-water-THF-acetic acid (485210.1).ResultsThe average recovery of evodiamine and rutaecarpine was 97.1 % and 93.7 % respectively.ConclusionThis method is simple,accurate and convenient.
Key words Wuzhuyu decoction,evodiamine,rutaecarpine,RP-HPLC

  吴茱萸汤始载于东汉张仲景所著《伤寒论》[1],由吴茱萸、生姜、人参、大枣四药组成,具有温胃止呕、温脾止泻、回阳固脱等功效[2~4],是中医临床常用方剂之一,也是历代医家所推崇的最著名方剂之一。吴茱萸碱和吴茱萸次碱为其主要成分,它们的含量测定有采用薄层扫描法[5,6]及高效液相色谱法[7~9]的报道,但汤剂中吴茱萸生物碱的测定国内未见报道。本文从吴茱萸汤君臣佐使配伍关系出发,以君药吴茱萸为核心,进行拆方设计(表1),采用反相高效液相色谱法测定了吴茱萸汤中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,方法简便、准确、可靠、易行。

表1 拆方设计表

序号

药味组成及用量

煎制方法

1

吴茱萸 9 g

单煎

2

吴茱萸 9 g+生姜 18 g

合煎

3

吴茱萸 9 g+人参 9 g

合煎

4

吴茱萸 9 g+大枣 4枚

合煎

5

吴茱萸9 g+生姜18 g+人参9 g

合煎

6

吴茱萸9 g+生姜18 g+大枣 4枚

合煎

7

吴茱萸9 g+人参9 g+大枣 4枚

合煎

8

吴茱萸9 g+生姜18 g+人参9 g+大枣 4枚

单煎后
混合

9

吴茱萸9 g+生姜18 g+人参9 g+大枣 4枚

合煎


1 仪器与试药

PE 250高效液相色谱仪;PE 235C二极管阵列检测器;PE 1022C Plus色谱工作站。
乙腈、甲醇为色谱纯;四氢呋喃、冰醋酸、无水乙醇、三氯甲烷均为分析纯;重蒸馏水。
吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品(中国药品生物制品检定所)。
吴茱萸(贵州铜仁);生姜(市售);人参(吉林集安);大枣(山东青州)。
各药材均经沈阳药科大学药用植物教研室孙启时教授鉴定。

2 实验方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil ODS 4.6 mm×200 mm (5 μm),带有前置保护柱;流动相:乙腈-水-四氢呋喃-冰醋酸(48∶52∶1∶0.1);流速:0.8 mL.min-1;检测波长:225 nm;柱温:20℃;内标物:氯氟舒松(经精制)。
2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备
内标溶液的配制:称取氯氟舒松约100 mg,精密称定,置100 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度。
对照品溶液的配制:精密称取吴茱萸碱、吴茱萸次碱对照品各10 mg,置100 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度。精密量取该溶液25 mL,置50 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,移取此液0.10~4.00 mL置10 mL量瓶中,加入内标溶液1.0 mL,用甲醇稀释并定容至刻度,微孔滤膜过滤,取续滤液,备用。
供试品溶液的制备:按表1中各处方药味用量的1/10精密称取所需各药材,置于圆底烧瓶中,加入10倍量的水,浸泡30 min,急火煎沸后改用小火保持微沸1 h,纱布过滤。滤渣再加10倍量的水,同前法煎制,过滤。合并2次滤液,并用水洗涤纱布。滤液、洗涤液一并移入100 mL量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。精密量取20 mL,加无水乙醇沉淀,使含醇量达75 %,冰箱静置18 h后取出,抽滤,量取续滤液50 mL,旋转蒸发挥去醇,浓缩液用氯仿萃取3次(20、20、10 mL),合并氯仿层,挥干氯仿,残渣用甲醇溶解,加入氯氟舒松内标液0.5 mL,定容至5 mL,微孔滤膜过滤,取续滤液备用。
2.3 线性范围 取上述各对照品溶液20 μL进样(见图1),以对照品峰面积和内标峰面积比值Y对浓度C(μg.mL-1)进行回归处理,绘制工作曲线。吴茱萸碱、吴茱萸次碱在0.5~20 μg.mL-1范围内,Y呈良好的线性关系。所得回归方程分别为:
Y=1.422×10-3+7.472×10-2Cr=0.9999
Y=1.315×10-3+4.308×10-2Cr=0.9999

图1 对照品与内标物的HPLC谱图
1.吴茱萸碱 2.吴茱萸次碱 3.氯氟舒松(内标)

2.4 精密度与回收率
精密称取表1中处方“1”用量的1/10的药材1份,同法煎制后取其水煎液20.0 mL 6份,同供试品溶液制备后进样分析,计算吴茱萸碱、吴茱萸次碱的色谱峰面积与内标峰面积的比值,求得
RSD分别为3.4 %和3.5 %。
精密称取表1中处方“1”用量的1/10的药材1份,同法煎制后取其水煎醇沉液50.0 mL 6份,分别加入适量的吴茱萸碱和吴茱萸次碱对照品,按样品溶液的制备方法进行制备、测定,测得吴茱萸碱和吴茱萸次碱的回收率分别为97.1 %和93.7 %(
n=6),RSD分别为2.5 %和2.6 %。
2.5 样品测定 取各处方样品溶液20 μL进样,记录色谱图(见图2、3)。计算吴茱萸碱、吴茱萸次碱的色谱峰面积与内标峰面积的比值,求出相应浓度,并计算其含量。样品测定结果见表2。

图2 吴茱萸的HPLC谱图
1.吴茱萸碱 2.吴茱萸次碱 3.氯氟舒松(内标)

图3 吴茱萸汤的HPLC谱图
1.吴茱萸碱 2.吴茱萸次碱 3.氯氟舒松(内标)

表2 样品测定结果(mg.g-1

样品序号

吴茱萸碱

吴茱萸次碱

1

0.2207

0.2307

2

0.3780

0.3703

3

0.2410

0.2158

4

0.2556

0.2343

5

0.4251

0.3665

6

0.3350

0.2942

7

0.2985

0.2831

8

0.2267

0.2599

9

0.3637

0.2910


3 讨论

3.1 HPLC分析结果表明,配伍生姜、人参、大枣均可不同程度地影响吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量,说明不同配伍情况下处方中所含化学成分在发生变化。
3.2 
比较君药吴茱萸、单煎混合液和吴茱萸汤的实验结果可见,在吴茱萸汤中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量显著升高,表明不同的煎制方法对处方中化学成分的溶出有显著影响,这种影响在临床与药理实验中即表现为药效与毒性的不同,说明古人将吴茱萸汤处方中四药配伍合煎是科学而合理的。
3.3 本文采用水煎醇沉法对不同配伍条件下的吴茱萸汤处方进行提取,提取出的化学成分较其它提取方法为多,因而在HPLC条件的选择上也更加困难。吴茱萸中生物碱含量的HPLC测定所采用的流动相多为乙腈-水系统。本文在参考了其他文献的基础上,选择合适的乙腈-水的配比,不仅对处方中的吴茱萸碱、吴茱萸次碱进行了定性、定量分析,而且实现了对处方中多种组分的分离,取得了令人满意的结果。
3.4 由于吴茱萸碱、吴茱萸次碱的水溶性较差,采用传统的水煎醇沉法所提取出的此2种成分的含量很低,因而给准确的含量测定带来了更大的困难。尽管吴茱萸碱、吴茱萸次碱在280、290 nm等较长波长处处于吸收值的平坦处,但吸收系数小,不适于含量过低时的准确测定。本文通过对吴茱萸碱对照品进行紫外光谱扫描,找到其最大吸收波长为225 nm,在此波长下吴茱萸碱的吸收系数很大;吴茱萸次碱在此波长下的吸收系数亦较大,而且处于吸收值较为平坦之处。因此,本文选择检测波长为225 nm,从而实现了对吴茱萸汤的水煎醇沉法提取物中吴茱萸碱、吴茱萸次碱含量的准确测定。
3.5 本文依据《伤寒论》中所载,采用汤洗七遍法对吴茱萸进行炮制。其具体加工方法为:将吴茱萸在30倍量、70℃水中,缓慢搅拌15 min,以4层纱布滤出,弃去滤液。重复操作7次,将最终所得吴茱萸于60℃烘干,备用。

* 联系人
作者单位:沈阳药科大学药分研究室 沈阳 110015

参考文献

 [1] 李培生主编,汉.张仲景(). 伤寒论. 北京:人民卫生出版社,1987.449
 [2] 邱赛红.吴茱萸汤温胃止呕作用的实验研究. 中药药理与临床,19884(3):9
 [3] 唐映红.吴茱萸汤温脾止泻作用的实验研究. 中药药理与临床,19906(1):6
 [4] 黄如栋.吴茱萸汤回阳固脱作用的实验研究. 中药药理与临床,19917(2):1
 [5] 张 韬.吴茱萸及其炮制品中生物碱的含量测定. 中国中药杂志,199419(7):409
 [6] 林 玲.薄层扫描法测定吴茱萸中三种生物碱的含量. 中国药科大学学报,199425(4):255
 [7] 王易实.吴茱萸及其炮制品中主要生物碱的HPLC分析. 中药材,199316(9):28
 [8] 王天勇.反相高效液相色谱法测定吴茱萸及制剂中吴茱萸碱和吴茱萸次碱. 分析测试学报,199615(3):60
 [9] 庄燕黎,晁若冰.高效液相色谱法测定吴茱萸药材及其制剂中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量. 药物分析杂志,199717(3):174

本文于1997年9月24日收到

 


医学百科App—医学基础知识学习工具


页:
返回顶部】【打印本文】【放入收藏夹】【收藏到新浪】【发布评论



察看关于《吴茱萸汤不同配伍情况下生物碱含量的RP-HPLC测定》的讨论


关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容
联系Email: