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LC-MS/MS方法检测水产品中孔雀石绿和隐形孔雀石绿

来源:月旭材料科技(上海)有限公司 作者: 2011-5-27

摘要: 卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》,上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现,包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂,同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障,上海月旭公司迅速组织相关人员研制......


  卫生部近日汇总公布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单》,上海月旭公司从公布的黑名单中统计发现,包括三聚氰胺、苏丹红、孔雀石绿、人工合成色素等都在内。针对这些令人触目惊心的食品添加剂,同时也为食品安全检查和监管工作提供有力的技术支持和保障,上海月旭公司迅速组织相关人员研制出了方便、快速、准确的检测方法,现将LC-MS/MS检测水产品中孔雀石绿和隐形孔雀石绿的方法公布如下:


1. 适用范围
适用于水产品(鱼、蟹、虾、甲鱼等)中孔雀石绿和隐形孔雀石绿的检测。


2. 提取
称取相当于原始样品5 g样品(精确至0.01g)制备好的试样,置于50mL塑料具塞离心管中,加入10µL 1μg/mL的混合内标标准溶液,依次加入1 mL 0.25 g/mL盐酸羟胺溶液、2 mL 1.0 mol/mL对甲苯磺酸溶液、2 mL 0.1 mol/L pH=4.5乙酸铵缓冲溶液,摇匀后,加入30mL乙腈,剧烈振摇2min,离心5 min(4000r/min)。将上清液转移到250mL分液漏斗中,用30mL乙腈重复提取残渣一次,合并上清液。于分液漏斗中加入50mL二氯甲烷,30 mL水,振摇2分钟,静置分层,收集下层有机层于250mL旋蒸瓶中。45 ℃旋转蒸发近干。
在旋蒸残渣中加入5mL 乙腈,漩涡振荡器,溶解残渣,待净化。

 
3. 净化
活化/平衡:将Welchrom® PRS 500mg/3mL (P/N:WSS46PR0305)安装在固相萃取装置上,上端连接Welchrom® Alumina-N 1g/6mL(P/N:WSAN010610),用5 mL乙腈活化小柱,流出液弃去;
上样:将上述待净化液加入柱中,流出液弃去;
淋洗:用5 mL乙腈淋洗小柱后,弃去中性 Welchrom® Alumina-N小柱,然后将PRS抽干;
洗脱:5 mL乙酸乙酯:甲醇:氨水(50:45:5)混合溶液洗脱,收集洗脱液
40℃氮气吹干,1 mL流动相溶解,0.22μm针孔滤膜过滤后,待分析;


4. 色谱质谱条件
4.1 色谱条件
色谱柱: Xtimate C18 液相色谱柱(2.1mm*50 mm, 3 μm)
流动相:
A: 0.1%甲酸+2 mM乙酸铵水溶液
B:乙腈
梯度洗脱
流速: 0.4 mL/min
进样量: 10 μL
柱温: 40°C
运行时间:12 min
4.2 质谱条件
扫描模式:MRM
离子源:ESI+
毛细管电离电压:3000v
干燥气温度:350 ℃
干燥气流速:11 L/min
雾化器压力:50 psi

名称

母离子

子离子

碎裂电压(Fragment)


驻留时间

(ms)

碰撞能量

(V)

定量离

子对

定性离

子对

孔雀石绿(MG)

329.2

313.1

140

30

40

+

-

208.1

140

30

38

-

+

隐性孔雀石绿(LMG)

331.2

316.1

140

30

20

+

-

239.1

140

30

36

-

+

MG-D5

334.2

334.2

140

30

318.2

-

-

LMG-D6

337.3

337.2

140

30

322.2

-

-

5. 结果
5.1 回收率和重现性实验
将猪肌肉空白样品经过液液萃取初步处理后,分别添加一定量的标准溶液,添加浓度分别为0.5μg/kg、1μg/kg、5μg/ kg、每批次内同一浓度做3次平行实验,共3个批次(样品典型回收率色谱图见附图)。

添加水平(μg/kg)


分析物

0.5

2

10

Recovery (%)
RSD (%)
Recovery (%)
RSD (%)
Recovery (%)
RSD (%)
孔雀石绿

110.8

7.53

98.1

6.56

96.1

4.71

隐性孔雀石绿

95.3

7.43

103.5

3.42

97.4

4.55


本方法中使用到得耗材:
1. 固相萃取小柱 Welchrom® PRS 500mg/3mL (P/N: WSS46PR0305);Welchrom® Alumina-N 1g/6mL(P/N:WSAN010610)
2. 色谱柱:Xtimate C18, 2.1*50 mm,3μm(P/N:Xt3B18205)
3. 13mm,孔径0.22μm尼龙针孔滤膜(P/N: WEL-SFNY213022)
4. 12孔固相萃取装置(WEL-Vac-12)


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