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反相高效液相色谱法测定人参及其制剂中人参皂苷Rg1含量

来源:分析仪器网 作者: 2007-5-25
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摘要: 目的:建立用反相高效液相色谱法测定人参及其注射剂中人参皂苷Rg1含量。min-1, 203 nm为检测波长,柱温35 ℃,对人参及其注射剂进行含量测定。结果:人参皂苷Rg1的峰面积与其浓度线性关系良好(r=0。关键词人参皂苷Rg1参附冻干粉针反相高效液相色谱法人参皂苷是珍贵传统中药人参的主要活性成分,常被用来作为人参制剂中......


目的:建立用反相高效液相色谱法测定人参及其注射剂中人参皂苷Rg1含量。方法:用复合柱吸附层析法除去注射剂中干扰物质。采用LUNA C18色谱柱,乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)为流动相,流速1.2 mL.min-1, 203 nm为检测波长,柱温35 ℃,对人参及其注射剂进行含量测定。结果:人参皂苷Rg1的峰面积与其浓度线性关系良好(r=0.999 2);样品平均回收率为98.8%;精密度RSD为0.65%(n=5)。结论:该法简便、快速、专属性强,能满足制剂的质量控制要求。
关键词 人参皂苷Rg1 参附冻干粉针 反相高效液相色谱法

人参皂苷是珍贵传统中药人参的主要活性成分,常被用来作为人参制剂中定量指标。对不同的人参皂苷组分的分析,方法也各不相同,如薄层扫描法[1]、比色法[2]、分光光度法[3]。近年来高效液相色谱法以其分离效果好、准确、快速、样品制备简单等优势而广泛用于人参制品的质量标准研究[4,5]。复方参附冻干粉针由人参、附子组成,为阳厥脱急症用药。本文采用反相高效液相色谱法测定复方参附冻干粉针中人参皂苷Rg1的含量,得到较满意的结果。
1 仪器与试药
  高效液相色谱仪:GILSON 307和306 PUMP,Unipoint工作站;HP1100型检测器;7725I进样阀;Eppendorf柱恒温箱。
  人参皂苷Rg1对照品由中国药品生物制品检定所提供。人参药材为市售,经本院生药室鉴定为药典收载品种;参附冻干粉针和人参阴性对照品由本院药化室研制。
  DA201大孔树脂为天津农药厂产品;732H阳离子交换树脂为河北保定化学试剂厂产品;中性氧化铝为上海市五四农场化学试剂厂产品。
  甲醇、乙醇、乙腈、磷酸均为市售分析纯。
2 色谱条件
  LUNA C18分析柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),美国Phenomenex产品。流动相:乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40),流速1.2 mL.min-1。紫外检测器203 nm波长处检测,柱温35 ℃。

3 复合树脂-氧化铝柱制备
  树脂处理:732H阳离子树脂,用10%氯化钠溶液浸泡18 h后,用水洗20 min。然后按顺序分别用2倍于树脂量的5%盐酸、2%氢氧化钠溶液、5%盐酸、水清洗后备用;DA201树脂,用水洗后,再用5%氢氧化钠溶液清洗,最后用水洗至近无色即可。
  使用0.7 cm×7 cm玻璃柱,取已处理好的DA201大孔树脂湿重4 g放入柱底,上盖脱脂棉少许,加中性氧化铝0.4 g再盖脱脂棉,加入已处理的732H型阳离子交换树脂湿重1.0 g,盖上脱脂棉,用水平衡待用。
4 线性关系考察
  精密称取人参皂苷Rg1对照品,用乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)配成1 g.L-1的对照品溶液。
  准确吸取1 g.L-1对照品溶液2.0,6.0,10.0,14.0,16.0 μL,依次进样,按上述色谱条件测定峰面积,以平均峰面积的积分值(n=2)为纵坐标,对照品进样量(μg)为横坐标,进行线性回归,得回归方程(n=5)为:
Y=-3.163×106+4.716×106X r=0.999 2
5 精密度试验
  取1 g.L-1对照品溶液,重复进样5次,每次10 μL,求得峰面积的RSD为0.65%。
6 加样回收试验
  精密称取人参皂苷Rg1对照品用水溶解配成2 g.L-1和4 g.L-1的对照品溶液。取20支参附冻干粉针分为2组,每组10支,一组中每支分别加2 g.L-1对照品溶液1 mL溶解,再加水1 mL洗出合并,精密量取5 mL按“7.2”方法处理后,取10 μL进样测定,计算平均回收率为98.6%, RSD为1.5% (n=3)。另一组中每支分别加4 g.L-1对照品溶液1 mL溶解,再加水1 mL洗出合并,重复上述方法,进样量为10 μL,测得平均回收率为98.8%, RSD为1.7% (n=3)。
7 样品测定
7.1 人参药材 将人参药材粉碎,于80 ℃干燥至恒重,称取1.0 g置于索氏提取器中,加入甲醇100 mL提取5 h,浓缩回收甲醇至20 mL,挥干甲醇,用乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)溶解于50 mL量瓶中并稀释至刻度。精密吸取10 μL测定含量,结果人参中人参皂苷Rg1的含量为1.38 mg.g-1,RSD为1.9%(n=3)。
7.2 参附冻干粉针 取参附冻干粉针10支,每支用2 mL水溶解后洗出合并。精密量取5 mL加至上述复合树脂-氧化铝柱上,用水洗脱,弃去流出液。再用乙醇洗脱,流出液置水浴上蒸发干燥后,用乙腈-水-0.1%磷酸溶液(20∶40∶40)溶解,移入10 mL量瓶中,稀释至刻度。精密吸取10 μL进样,结果2批样品中人参皂苷Rg1含量分别为0.181 g.L-1和0.179 g.L-1,RSD分别为1.8%和2.6%(n=3)。色谱图见图1-B。
7.3 缺人参对照品 取缺人参对照品10支,按“7.2”方法处理后,吸取10 μL进样。结果见图1-C。在人参皂苷Rg1的保留时间处未见明显干扰峰出现。
8 讨论
  采用高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1的含量,所得的色谱峰型比较宽,对精确积分有一定影响。因此选择适当的柱温及合适的流动相非常重要。
  实验中使用甲醇或乙醇溶解样品常常干扰结果,稳定性也比较差。改用流动相直接溶解样品后,得到了较好的实验结果。

于超(重庆市中药研究院 重庆 400065)
刁长发(重庆市中药研究院 重庆 400065)
夏文娟(重庆市中药研究院 重庆 400065)
周碧珍(重庆市中药研究院 重庆 400065)

参考文献


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