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高效液相色谱法测定寒痹停片中士的宁含量

来源:分析仪器网 作者: 2007-5-25
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摘要: 目的:建立用HPLC测定寒痹停片中士的宁含量的方法。结果:在4~20μg/ml范围内,标准曲线回归方程为:Y=-2803+8967x(r=0。寒痹停片寒痹停片用于治疗风湿和类风湿性关节炎。对马钱子及其制剂中士的宁的测定,国外曾用ODS柱离子对色谱法测定了酊剂中的含量,国内亦有用硅胶柱吸附色谱法测定了九分散中的含量,对寒痹停片中......


目的:建立用HPLC测定寒痹停片中士的宁含量的方法。方法:氰基柱;流动相-甲醇-水-三乙胺-乙酸(9800∶155∶15∶30);紫外检测波长254nm。结果:在4~20μg/ml范围内,标准曲线回归方程为:Y=-2803+8967x(r=0.9997),RSD=1.65%,加样回收率的平均值为99.82%。结论:实验表明,这是一个适用于生产控制和产品质量检验的简单、快速、准确的方法。
关键词 HPLC;士的宁;寒痹停片

  寒痹停片用于治疗风湿和类风湿性关节炎。主要成分由马钱子等7味中药组成。其中,马钱子中含有剧毒生物碱士的宁,故对本药中士的宁的定量是控制其质量的重要环节。对马钱子及其制剂中士的宁的测定,国外曾用ODS柱离子对色谱法测定了酊剂中的含量,国内亦有用硅胶柱吸附色谱法测定了九分散中的含量,对寒痹停片中士的宁的测定尚未见报道。我们使用了Spherisob-CN柱,甲醇-水-三乙胺-乙酸(9800∶155∶15∶30)的流动相,成功地将样品中的士的宁与其它复杂组份分离,使用外标法定量。RSD=1.65%。回收率的平均值为99.82%。

1 实验部分
1.1 仪器、试剂和药品
  美国Beckman公司334M型高效液相色谱仪(421控制器,114型泵,165紫外可见检测器,427积分仪),Spherisob-CN柱(5μm,4.6×150mm),大连化物所国家色谱中心填装,加同种予柱,在此条件下理论塔板数n=9000。CQF-Ⅰ-6型超声波清洗器(300W,25KHZ,上海船舶电子设备研究所)。
  甲醇、三乙胺、乙酸(分析试剂),水为重蒸馏。甲醇和水经0.5μm滤膜过滤,士的宁对照品(中国药品生物制品检定所)。寒痹停片(河南中医学院制药厂,批号:9611224)。
1.2 标准曲线绘制
  用士的宁对照品配制成200μg/ml浓度的甲醇溶液做储备液。精密吸取储备液0.2,0.4,0.6,0.8和1.0ml于5只10ml量瓶中,甲醇定容,每个浓度进样3次,取峰面积均值,以x代表士的宁浓度,y代表峰面积得回归方程为:y=-2803+8967x(r=0.9997)。
1.3 样品测定及测定精密度
  取样品10片,称定为4.7810g,得平均片重0.478g/片。放入研钵中研细,每份0.19g左右,取5份(剩余样品用于回收率测定)精密称定,放入5只25ml量瓶中,加入甲醇-氨试液(20ml甲醇、3ml氨水)20ml,超声处理50min,加入乙酸3ml,甲醇定容,过滤,取续滤液通过0.45μm滤膜后进样,所得色谱图见图1,阴性色谱图见图2。由每份进样3次所得峰面积的平均值代入回归方程,求样品中士的宁含量,所得数值见表1。

图1 样品色谱图

图2 不含马钱子的阴性样品色谱

表1 寒痹停中士的宁含量及测定精密度

序 号

含量

含量均值/%

RSD/%

%

mg/片

1

0.186

0.89

 

 

2

0.189

0.90

 

 

3

0.183

0.87

0.185

1.65

4

0.181

0.86

 

 

5

0.184

0.88

 

 

1.4 回收率测定
  取样品测定后剩余的样品5分,每份0.1g左右,精密称定,分别于5只25ml量瓶中,各加200μg/ml之标准储备液1.00ml,加入甲醇-氨试液20ml……以下操作与样品测定相同,利用上节样品平均含量值求回收量,所计算回收率见表2。

表2 回收率测定

序号

加入量/μg

测得量/μg

回收率/%

平均回收率/%

1

200

200.08

 

100.04

2

200

200.01

 

100.00

3

200

199.47

99.74

99.82

4

200

199.38

 

99.69

5

200

199.25

 

99.63

2 讨 论
2.1 提取样品中的士的宁所用溶剂为甲醇-氨(20∶3,v/v),氨水的比例不能减少,否则不能定量提取。为促使样品中士的宁溶出,超声处理时间不能少于50min(300W,25KHZ),否则也不能定量溶出。
2.2 随流动相中胺的比例减少,士的宁和马钱子碱的保留时间延长;而其它组分保留时间的变化不太大,故可借流动相中胺的比例变化而将士的宁分离。

作者单位:郭淑丽 开封 475001 开封医学高等专科学校一附院
     孙茂峰 牛家萍 开封 475001 开封医学高等专科学校


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