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反相高效液相色谱法测定咪唑斯汀片含量

来源:中国药房 作者: 2007-5-18
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摘要: 摘要:目的:建立咪唑斯汀片的含量测定方法 方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为C18,检测波长为285nm,流动相为0。5ml/min、结果:咪唑斯汀检测浓度在4。结论:本法可用于咪唑斯汀片的含量测定,且操作简便、结果准确。关键词:反相高效液相色谱法。...


摘要:目的:建立咪唑斯汀片的含量测定方法 方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为C18,检测波长为285nm,流动相为0.025mol/L磷酸二氢钾缓冲液-乙腈(72:28),流速为0.5ml/min、结果:咪唑斯汀检测浓度在4.16~416μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9998),平均加样回收率为99.98%(RSD=0.44%,n=3)。结论:本法可用于咪唑斯汀片的含量测定,且操作简便、结果准确。
关键词:反相高效液相色谱法;咪唑斯汀片;含量测定
咪唑斯汀主要用于治疗成人或12a以上儿童的季节性或常年性过敏鼻炎及荨麻疹等过敏性症状,具有独特的抗组胺及其它炎症介质的作用,为强效和高度选择性的H1受体拮抗剂,且在抗组胺用药剂量下没有抗胆碱、镇静以及血管方面的副作用,因此,较其它抗组胺类药物具有更大的优势。其化学名
称为2-[[[1-[(4-氟苯基)甲基]-1氢-苯并咪唑-2-基]-4-哌啶基]甲基-氨基]-4(3氢)-嘧啶酮。目前,其质量标准在国内、外药典中均未收载,国内也尚未见有以高效液相色谱(HPLC)法测定该药含量的报道,故笔者根据国外有关文献报道,建立了其片剂的含量测定方法。
l 仪器与试药
1.1 仪器
LC900高效液相色谱系统,包括PU一980型智能泵UV-975型紫外检测器、7725手动进样阈(日本Jasco公司);L-200SM 十万分之一光电天平(日本Jasco公司);TDx高速离心机(美国雅培公司);pHS-3C型pH仪(上海雷磁仪器厂)。
1.2 试药
咪唑斯汀对照品(北京万全德众有限公司,批号:03021011,纯度:99.95%);咪唑斯汀片(法国圣德拉堡公司,批号:030818587、030818687、031129994);乙腈、乙醚、甲醇均为色谱纯;磷酸二氢钾、磷酸为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:HiQ sil Cl8(150mm×4.6mm,5μm);流动相:0.025mol/L磷酸二氢钾缓冲液-乙腈(72:28),磷酸调pH至2.58,并经0.22μm微孔滤膜滤过后使用; 检测波长:285nm;柱温:室温;流速:0.5ml/min;进样量:2μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备:准确称取咪唑斯汀对照品10mg,置于100ml容量瓶中,加甲醇适量溶解并稀释至刻度,即得。
2.2.2 样品溶液的制备:取本品20片(批号:030818687),准确称定,研细。再准确称取适量(约相当于咪唑斯汀10mg),置于100ml容量瓶中,加甲醇适量溶解并稀释至刻度,即得。
2.3 方法专属性考察
对咪唑斯汀、溶剂及辅料进行HPLC分离检测。采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定咪唑斯汀含量的方法专属性好。
2.4 线性关系考察
采用加重法准确称取咪唑斯汀对照品适量(0.00416g),置于10ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为416μg/ml咪唑斯汀标准贮备液。精密吸取上述溶液各0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5、10.0ml,分别置于1Oml容量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。按“2.1”项下色谱条件,分别进样20μl,记录峰面积。结果表明,咪唑斯汀保留时间为13.4min,理论塔板数为2392,均符合《中国药典》2000年版的规定,以峰面积积分值(Y)为纵坐标,咪唑斯汀浓度(X)为横坐标进行线性回归,得回归方程为Y=8.2 343×10000X-9.2599×1000(r=0.9998) 表明咪唑斯汀对照品溶液检测浓发4.16-416μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 最低检测限
按“2.1”项下色谱条件,以信噪比为3作指标,测定最低检测限。结果表明,浓度为13.87ng/ml的咪唑斯汀对照品溶液进样20μl,其信号约为噪占的3倍,即最低检测限为0.2774ng。
2.6 精密度试验
精密吸取“2.2.2”项下溶液20μl,按一2.1”项下色谱条件连续进样5次,结果样品含量的相对标准为0.56%(n=5)。
2.7 重现性试验
收同一批样品(批号:030818687.约相当咪唑斯汀5mg)6份,准确称定,并按“2.10”项下方法测定眯唑斯汀的含量。结果样品含量的相对标准差为0.68%,表明本法 现性较好
2.8 稳定性试验
取“2.2.2”项下溶液,于室温下放置0、2、4、6、12、24、48h,分别按“2.1”项下色谱条件进样测定, 峰面积值基本不变,其积分值的卡甘列标准差为1.22%,表明样品在48h内可保持稳定。
2.9 加样回收率试验
称取已知含量的样品适量(批 :030818687,约相当于咪唑斯汀5mg)共9份,准确称定,置于1O0ml容量瓶中,分别加入咪唑斯汀对照品4、5、6mg(各3份)。用甲醇溶解并稀释至客刻度,摇匀后按“2.10”项下方法分别测定含量,并计算回收率。
2.10 样品含量测定
分别取3批咪唑斯汀片(各3份)。按“2.2.2”项方法制备样品溶液,并按“2.1”项色谱条件各进样20μl,记录峰面积,按外标法以峰面积计算样品中咪唑斯汀的含量。
3 讨论
笔者曾号察流动卡u pH值分别为2.5、2.58、3.2时对色谱行为的影响.结果发现当pH值为2.5时,主峰保留时间缩短,似邻杂质峰对主峰影响较大;当pH值为3.2时,主峰保留时间延长但峰形不好;而选择pH值为2.58(±0.02)时,保留时间和峰形较为适宜。
笔者曾配制乙腈比例分别为35% 、28%、20%的流动相以号察乙腈比例对色谱峰的影响。结果表明,流动相中乙腈比例时,峰及栩邻杂质峰的保留时间影响较大;当乙腈比例为35%时,主峰保留时间缩短且相邻杂质峰对主峰影响较大;当乙腈比例为20%时,木出现主峰;而采用乙腈比例为28%的流动相则较为适宜。
按紫外分光光度法在200nm~400nm波长范围对咪唑斯汀进行扫描.结果表明,其在288nm处有最大吸收。但笔者最终选择285nm 为测定波长.是因其在此波长处灵敏度较好,不仅如此,测定时其基线噪声低且稳定。
由于不清楚详细的处方及有关辅料,故本试验没有没空白试验,回收率试验则采用加样回收的方法。
参考文献
1.国家药典委员会编,中华人民共和国药典(二部)【s】,2000年版,北京:化学工业出版社,2000:附录32.

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