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人绒毛膜促性腺激素检查方法

来源:医源世界 作者:佚名 2005-4-7

摘要: 人绒毛膜促性腺激素检查方法 成熟女性因受精的卵子移动到子宫腔内着床后,形成胚胎,在发育成长为胎儿过程中,胎盘合体滋养层细胞产生大量的人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG),可通过孕妇血液循环而排泄到尿中。-HCG单克隆抗体进持特异的HCG检查,近年来还有报道采用抗&beta。从1960年开始,国外的......




人绒毛膜促性腺激素检查方法


  成熟女性因受精的卵子移动到子宫腔内着床后,形成胚胎,在发育成长为胎儿过程中,胎盘合体滋养层细胞产生大量的人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG),可通过孕妇血液循环而排泄到尿中。当妊娠1-2.5周时,血清和尿中的HCG水平即可迅速升高,第8孕周达到高峰,至孕期第4个月始降至中等水平,并一直维持到妊娠末期。

正常妊娠妇女血清中HCG平均值。HCG是由两个非共价键相连的肽链组成的糖蛋白激素。其单个亚基不具有生物活性,当连接成完整化合物时始具活性,分子量约为4.7万。其主要功能就是刺激黄体,有利于雌激素和黄体酮持续分泌,以促进了宫蜕膜的形成,使胎盘生长成熟。HCG-α亚单位的氨基酸排列与黄体生长激素(LH)α亚单位相似,故用完整的抗HCG分子的抗体测定HCG时与LH间有免疫交叉反应。但它们的β亚单位各不相同。因此为避免交叉反应,目前均采用高将近的抗β-HCG单克隆抗体进持特异的HCG检查,近年来还有报道采用抗β-HCG羧基末端肽单克隆抗体以进一步提高检测的敏感性和特异性。

  胶乳凝集抑制试验和血凝抑制试验。从1960年开始,国外的Wide及Gemzell,开始采用胶乳凝集抑制的试验方法(latex agglutination inhibitiontest,LAIT)技术测定尿中HCG,即将尿液与抗 HCG血清作用后,加入已吸附抗原的胶乳,如尿中含HCG较多,则先与抗 HCG结合,不再有多余的抗HCG与胶乳产生凝集而仍呈均匀的乳胶状,是为阳性。相反,不含HCG尿不与抗血清作用,当加入吸附抗原的胶乳之后,抗血清可与胶乳抗原反应,出现明显的“特”特性凝集颗粒,即为阴性。

之外,也可利用血细胞的血凝抑制试验(hemoagglutination inhibition test,HAIT),其原理与胶乳法一致只是载体由胶乳改成羊红细胞。这两种试验方便简便,灵敏度为100-500Mu/ML,适合大批标本检查,但因特异性差,不能定量,已逐渐被单克隆抗体法所取代。

  放射免疫试验(RIA)。利用放射标记的HCG与被检测尿中的HCG竞争性地结合抗-HCG抗体,当被检尿中HCG增加时,结合物的放射性减低,与不同含量标准品对比可测尿中HCG的含量。使定量检测成为可能。由于RIA需一定设备,试验手续繁杂,且有核素污染问题,不适用于临床常规应用。

  酶联免疫吸附试验(ELISA)。该方法目前已广泛应用于临床,其基本原理是运用夹心免疫酶分析技术。即采用HCG单克隆抗体包被于固相表面,样品中的HCG都将与支持物表面的抗体相结合。与样品一孵育后,冲洗耳恭听表面,然后加入特异性酶标抗β-HCG亚基的单克隆抗体,最后加入酶作用的基质,即产生颜色。该法可目测,灵感度为20-50Mu/ml,采用抗β-HCG单克隆抗体二点酶免疫法进行定量,灵敏度可达2-10mU/ml。目前免疫酶法进一步发展为更简便、适于病人自检的一步法,即免疫酶渗透试验。

  单克隆抗体胶体金试验。免疫胶体金法是将羊抗人HCG抗血清(多抗)、羊鼠IGG分别固定特制的纤维素试带上并呈两条线上下排列,羊抗鼠IGG线在试带知上方为阴性对照,羊抗人HCG多抗在下方为测定。试带条中含均匀分布的胶体金标记鼠抗人β-HCG单克隆抗体和无关的金标记鼠IGG。检测时将试带浸入被检尿液中(液面低于固定的两条抗体线)后迅速取出。尿液沿试带上行,尿中的β-HCG在上行过程中与胶体金标记单克隆抗体结合,待行至羊抗人HCG抗体线时,形成金标记的β-HCG单元抗尿HCG羊抗人HCG复合物而在试带上呈兹红色区带,为HCG阳性反应,试带上无关的金标记鼠IGG随尿液继续上行至羊抗鼠IGG处时与之形成紫红色的金标记的抗原体复合物是为阴性对照。判断结果时,含HCG的尿液试带可显示上、下两条紫红色线条,而阴性标本则只显出上边一条紫红色线。

  方法学评价。纵观HCG检查方法,有生物激动、化学法、免疫法等。免疫法的检测手段,不断更新、向特异简便、快速、普及方向发展,现已有胶乳或血凝抑制试剂、放射免疫、酶免疫、胶体金纸片法等。HCG检查对病理妊娠子宫外孕及胎盘滋养层疾病的诊断、鉴别、治疗及追踪观察等均有意义。



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