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人端粒酶逆转录酶启动子-二步转录增强系统调控下的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的构建及其对卵巢上皮性癌有治疗作用

来源:医学空间 作者: 2009-7-6
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摘要: 《中华妇产科杂志》2007年第42卷第9期 中国研究者构建了含人端粒酶逆转录酶启动子.二步转录增强系统(hTERTp.TSTA)调控下的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(rev-caspase-3)的重组腺病毒AdHTVP2G5-rev-casp3,并检测其对卵巢上皮......


《中华妇产科杂志》2007年第42卷第9期 中国研究者构建了含人端粒酶逆转录酶启动子.二步转录增强系统(hTERTp.TSTA)调控下的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(rev-caspase-3)的重组腺病毒AdHTVP2G5-rev-casp3,并检测其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)的治疗作用。研究者采用基因重组法构建AdHTVP2G5-rev-casp3,经DNA测序鉴定并证实其序列正确。实验分为4组:分别以AdHTVP2G5-rev-casp3(AdHTVP2G5-rev-casp3组)、含hTERTp调控下的rev—caspase-3的重组腺病毒AdHT-rev-casp3(AdHT-rev-casp3组)和含人巨细胞病毒启动子(CMVp)调控下的rev—caspase-3的重组腺病毒Ad—rev—casp3(Ad-rev-casp3组)转染人卵巢癌细胞系AO细胞及正常人脐静脉内皮细胞系HUVEC细胞,以含hTERTp-TSTA调控下的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的重组腺病毒AdHTVP2G5-EGFP(AdHTVP2G5-EGFP组)为阴性对照。采用蛋白印迹法(westernblot)、细胞计数法(CCK-8)、流式细胞术分别检测各组AO和HUVEC细胞中caspase-3的活性单位p17蛋白及其底物聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶的裂解片段p85蛋白的表达强度、细胞存活率、细胞凋亡率和细胞周期的变化;westernblot法检测各组裸鼠移植瘤及肝脏组织中p17蛋白的表达强度,检测各组裸鼠生存率、肿瘤体积、体内肝酶水平及各器官组织的病理检查结果。结果发现AO细胞中p17蛋白表达强度,AdHTVP2G5-rev—casp3组明显高于Ad-rev-casp3和AdHT-rev-casp3组;而HUVEC细胞中AdHTVP2G5-rev-casp3组则明显低于Ad—rev—casp3,与AdHT-rev-casp3组相似。当病毒感染复数(UOI)为70时,AO细胞的存活率和凋亡率,AdHTVP2G5.rev—casp3组(分别为17.8%和40.2%)与AdHT—rev—casp3组(分别为75.2%和16.1%)比较,差异有统计学意义(P〈0.01);而HUVEC细胞的存活率和凋亡率,AdHTVP2G5.rev—casp3组(分别为97.7%和2.1%)与AdHT-rev-casp3组(分别为98.5%和1.7%)比较,差异则无统计学意义(P〉0.05)。荷瘤裸鼠肿瘤组织中p17蛋白的表达强度,AdHTVP2G5-rev—casp3组最高,Ad-rev-casp3组次之,AdHT—rev-casp3组最弱;而其肝脏组织中p17蛋白的表达强度,Ad-rev—casp3组最高(与其在肿瘤组织中相似),其他各组几乎无p17蛋白表达。荷瘤裸鼠的生存时间,AdHTVP2G5-rev-casp3和Ad-rev-casp3组分别为(259±14)和(213±16)d,明显长于AdHT—rev—casp3和AdHTVP2G5-EGFP组的(177±12)和(109±7)d(P〈0.01)。荷瘤裸鼠的肿瘤体积,用药53d后AdHTVP2G5-rev-casp3组(为406mm^3)明显小于AdHT-rev-casp3、Ad—rev—casp3和AdHTVP2G5-EGFP组(分别为990、645、1728mm^3;P〈0.01)。荷瘤裸鼠体内的肝酶水平,Ad—rev—CaS.p3组明显高于其他各组(P〈0.01)。各组荷瘤裸鼠的肝脏及其他器官组织经HE染色显示均无明显变化。由此,研究者结论,hTERTp-TSTA系统调控下的rev—caspase-3致细胞凋亡的能力明显强于hTERTp,并同时保证了被作用肿瘤的靶向性,在明显抑制卵巢癌移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠生存时间的同时降低了凋亡基因对肝脏的毒性作用。

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