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研究者探讨半胱天冬氨酸蛋白酶-12小干扰RNA对小鼠肝细胞凋亡的阻抑作用

来源:医学空间 作者: 2009-5-12
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摘要: 《中华传染病杂志》2007年第25卷第6期 中国研究者观察了小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)基因特异性小干扰RNA(siRNA)构建的表达载体pRNAT-casp12对caspase-12基因的抑制及其对内质网应激介导的小鼠肝细胞凋亡的影响。研......


《中华传染病杂志》2007年第25卷第6期 中国研究者观察了小鼠半胱天冬氨酸蛋白酶-12(caspase-12)基因特异性小干扰RNA(siRNA)构建的表达载体pRNAT-casp12对caspase-12基因的抑制及其对内质网应激介导的小鼠肝细胞凋亡的影响。研究者以小鼠肝细胞株Hepa1-6为靶细胞,利用脂质体与重组质粒pRNAT-casp-2共转染,分别在转染24、48和72h后收集细胞,采用实时荧光定量PCR分析和Western印迹检测caspase-12的表达;利用毒胡萝b素(TG)诱导细胞,建立内质网应激介导的细胞凋亡模型,通过DNA梯带凝胶电泳检测,选出适合的诱导时间;TG诱导已转染了pRNAT—casp12的干扰组细胞后,以空质粒转染组为对照,利用Western印迹检测caspase-12蛋白表达水平的变化,通过DNA梯带凝胶电泳、流式细胞仪、Hoechst33258染色等方法检测细胞凋亡,观察caspase-12siRNA对细胞凋亡的影响。结果发现pRNAT—casp12转染细胞24、48和72h后,caspase-12mRNA的水平分别下降了45.6%、72.5%和59.5%;caspase-12蛋白表达下降了17.1%、37.3%和60.1%;2μmol/L TG处理细胞30h后,成功诱导细胞凋亡;与对照组相比,干扰组细胞经TG诱导后,caspase-12蛋白表达水平下降了54.6%,流式细胞仪检测发现早期调亡率下调了51.4%(P〈0.01)。由此,研究者得出结论,小鼠caspase-12siRNA对Hepa1—6细胞caspase-12基因的表达具有显著的抑制作用,能够明显阻抑内质网应激介导的凋亡,有望发展成为新一代抗凋亡药物。

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