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克拉霉素片微生物限度检查方法的验证

来源:《中华医药杂志》 作者: 2009-8-24
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摘要: 【摘要】 目的 对克拉霉素片微生物限度检查方法进行方法学验证。方法 采用薄膜过滤法对克拉霉素片进行处理后,分别进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证。结论 采用薄膜过滤法可以进行克拉霉素片的微生物限度检查。 【关键词】 克拉霉素片。...


【摘要】  目的 对克拉霉素片微生物限度检查方法进行方法学验证。方法 采用薄膜过滤法对克拉霉素片进行处理后,分别进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证。结果 各实验菌的回收率均高于70%。结论 采用薄膜过滤法可以进行克拉霉素片的微生物限度检查。

【关键词】  克拉霉素片;微生物限度检查;薄膜过滤法

【Abstract】 Objective To verify the microbial limit test for clarithromycin tablet by methodology.Methods The membrane filtration method was used to deal with clarithromycin tablet.The counting methods for the bacteria, moulds and yeasts were verified respectively.Results The recovery rate of each experimental group was higher than 70%.Conclusion This method can be used for the microbial limit test of clarithromycin tablet.

  【Key words】 clarithromycin tablet; microbial limit tests; membrane filtration method

  克拉霉素为14员环新的大环内酯类药物,作用于细菌细胞核糖体50S亚单位,阻碍细菌蛋白质合成,为生长期抑菌药,其代谢产物14羟克拉霉素更具广谱抗菌活性。因此,若按常规法检验微生物限度检查,药品中污染的微生物生长可能被抑制,就会影响实验结果的可靠性,必须采取一定措施对药品进行处理,以消除或减弱药物的抑菌活性,使微生物正常生长,所以我们确立薄膜过滤法对克拉霉素片进行微生物限度检查并进行验证,现报告如下。

  1 实验材料

  1.1 试剂 营养琼脂培养基;胆盐乳糖增菌培养基;玫瑰红钠琼脂培养基;MUG培养基;甘露醇氯化钠琼脂培养基,以上均由中国药品生物制品检定所提供。

  1.2 仪器 BSP-400(上海博迅实业有限公司);HTY22000集菌仪(杭州泰林医疗器械厂);孔径0.45μm、直径50mm过滤膜;康氏振荡器。

  1.3 菌种 金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26 003〕;白色念珠菌〔CMCC(F)98 001〕;大肠埃希菌〔CMCC(B)44 102〕,由中国药品生物制品检定所提供。

  1.4 稀释剂及冲洗剂 pH为7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。

  1.5 样品 克拉霉素缓释片,批号:20090201,生产厂家:河南福森药业有限公司。

  2 实验方法及结果

  2.1 供试液制备 称取样品10g,加入pH值为7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,置于康氏振荡器振摇,使其充分溶解,制成1:10供试液。

  2.2 菌液制备 均按《中国药典》2005年版二部方法制备,浓度为50~100cfu/ml[1]。

  2.3 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证

  2.3.1 实验组 取混匀后1:10供试液10ml,500转/min离心5min,取上清液1ml进行薄膜过滤,用pH为7.0的无菌氯化钠-蛋白胨冲洗液冲洗滤膜2次,每次100ml,第3次的冲洗液中加入0.5 ml实验菌菌悬液,取下滤膜,正贴于营养琼脂培养基上,细菌置培养箱中35℃培养48h,霉菌及酵母菌置培养箱中24℃培养72h,观察结果并计数。

  2.3.2 供试液对照组 取混匀后1:10供试液10ml,加入100ml稀释剂中过滤,冲洗液冲洗3次,每次100ml,取膜,正贴于营养琼脂培养基上,按实验组方法置培养箱中,观察结果并计数。

  2.3.3 稀释液组 取稀释液10ml过滤, 冲洗液冲洗2次, 每次100ml, 第三次的冲洗液中加入0.5 ml实验菌菌悬液,取下滤膜,正贴于营养琼脂培养基上,按实验组方法置培养箱中,观察结果并计数。

  2.3.4 以上实验重复3次, 观察每次结果并计数,见表1。表1 实验结果

  2.3.5 回收率结果 〔回收率(%)=(实验组-供试液对照组)/菌液组×100%。见表2。 表2 回收率结果

  2.4 大肠埃希菌检测方法验证

  2.4.1 实验组 取混匀后1:10供试液10ml,500转/min离心5min,取上清液1ml进行薄膜过滤,用pH为7.0的无菌氯化钠-蛋白胨冲洗液冲洗滤膜2次,每次100ml然后,加入0.2ml大肠埃希菌菌悬液冲洗一次,取膜,放入100ml胆盐乳糖增菌培养基中,置培养箱中35℃培养24h,取0.2ml上述培养物加入5ml MUG培养基中,24h后加入靛基质试液5滴,观察液面呈玫瑰红环。

  2.4.2 阴性菌对照组 依照上述方法操作,最后一次冲洗时加入2ml金黄色葡萄球菌菌液进冲洗液,过滤,取膜,放入100ml胆盐乳糖增菌培养基中,置培养箱中35℃培养24h,取培养物划线接种于甘露醇氯化钠琼脂培养基上,置培养箱中35℃培养24h,观察结果:未发现金黄色葡萄球菌菌落。

  3 讨论

  在细菌、霉菌及酵母菌检查计数方法验证的三次平行实验中,回收率均高于70%,大肠埃希菌检查过程中,实验组可检出大肠埃希菌,而阴性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌。以上验证均可说明薄膜过滤法可以对克拉霉素片进行微生物限度检查。

【参考文献】
   1 国家药典委员会.中国药典,二部.北京:化学工业出版社,2005,附录93.

  (编辑:黄 杰)


作者单位:441300 湖北随州,随州市药品检验所


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