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HLA、STR基因座在祖孙血缘关系鉴定中应用1例报告

来源:中华医药杂志 作者:杨剑豪,冯明亮,季芸,杨颖,陆 琼 2006-8-19
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摘要: 亲子鉴定是法医物证学检验的主要项目,近年来随着短串联重复序列分析技术(STR)的日趋完善,该技术在亲子鉴定领域的应用越来越广泛。人类基因组中约有50万个串联重复序列位点,其核心序列,一般为2~5bp,片段长度为100~500bp,由于分布广泛,扩增片段短小,且近一半STR位点具有遗传多态性,现在,通过PCR检测STR基因座......


     亲子鉴定是法医物证学检验的主要项目,近年来随着短串联重复序列分析技术(STR)的日趋完善,该技术在亲子鉴定领域的应用越来越广泛。人类基因组中约有50万个串联重复序列位点,其核心序列,一般为2~5bp,片段长度为100~500bp,由于分布广泛,扩增片段短小,且近一半STR位点具有遗传多态性,现在,通过PCR检测STR基因座基因型的技术已逐渐取代传统的法医血清学技术,成为法医物证学鉴定的主要方法。

    HLA位于人类第6号染色体短臂6p21.3区域,具有高度的遗传多态性,是人类基因组中的一个重要标记,符合孟德尔遗传规律,属共显性遗传。在法医学中,HLA多用于亲子鉴定,HLA-A、B位点累计非父排除率可达90%以上[1]。笔者利用HLA和STR基因座进行祖孙血缘关系鉴定,现报告如下。

    1  案例

    两年前,王某怀疑其妻子与第三者有染,发生争执,不幸被其妻子伙同他人杀害,但王某妻子当时怀孕在身,未处极刑,后产下一子。王某的家属怀疑男孩不是王某亲生,因此,需对男孩的生父进行确认。由于王某已死,对男孩及其祖父、祖母分别进行13个STR位点的检测,同时对男孩及其祖父、祖母和伯父进行HLA鉴定。根据其中HLA-B位点的结果,得出小孩非王某所生的结论。

    2  材料与方法

    2.1  血样采集  对4名当事人各抽静脉血5ml,取其中的玻璃珠脱纤维抗凝血4ml用于HLA-A、B分型(血清学);ACD-B抗凝血1ml用于STR、HLA-B(RELI-SSO)、HLA-DR(SSP)等项目检查。

    2.2  HLA检测  HLA血清学按NIH标准进行微量淋巴细胞毒试验[2];进行HLA-B(RELI-SSO)检测[3];HLA-DR(SSP)检测[4]。

    2.3  STR基因座检测  Profiler Plus和Cofiler体系对13个STR位点进行基因型检测[5]。

    3  结果

    3.1  Profiler Plus体系和Cofiler体系的13个STR基因座的检测  结果见表1、2,不能排除男孩与其祖父、祖母有血缘关系。表1  Profiler Plus体系的9个STR位点检测结果表2  Cofiler体系的6个STR位点检测结果

    3.2  HLA-A、B、DR基因座的检测结果  见表3。表3  HLA-A、B(血清学)、HLA-B(RELI-SSO)及HLA-DR(SSP)的检测结果注:B*4001即为B60,B*4006即为B61,B*1558即为B75

    根据祖父、母表型分析出男孩可能的单倍型没有一条可以来自祖父、祖母,可以排除男孩与祖父、祖母有血缘关系。由于在血清学分型方法中,B40组的B60,61之间会发生交叉反应,造成抗原分辨困难[6],为了明确区分这两个抗原,笔者加做了HLA-B(RELI-SSO)DNA分型,以确认血清学结果的准确性。

    4  讨论

    短串连重复序列(STR)作为人类血型遗传系统的一个高度多态的遗传标记,非父排除能力强,在亲子鉴定中极具有使用价值。常规采用 Profiler Plus和Cofiler系统进行个13个STR位点的检测均能取得满意结果,但本案的情况较为特殊,由于孩子的父亲王某已故,其血型未知,而祖-孙只有1/4基因是相同的,其亲缘系数为1/4,称为二级亲属。通过男孩祖父、祖母的13个STR位点与男孩的13个STR位点的检测结果分析,不能排除王某与男孩有亲子关系。可见STR在祖-孙亲子鉴定中存在某些局限性。

    通过HLA-A、B、DR位点的鉴定及王某家系的分析,同时为了确定家系的单倍型,又增检男孩伯父的HLA-A、B位点,可以推出王某的单倍型由(1)A24B61;A2B55和(2)A24B13;A24B61中各取1条组成。由于男孩母亲正在狱中服刑,其血型无法检测,根据结果3.2,男孩单倍型的可能性有以下4种:(1)A2B60,(2)A2B75,(3)A11B60,(4)A11B75,而没有一条单倍型来自王某的遗传,则可以判断王某与男孩无亲子关系。

    应用HLA位点的检测,可提高祖-孙关系在亲子鉴定中非父的排除能力,弥补STR方法鉴定亲子关系的不足,多了一种判断亲子关系的依据,所以在当今亲子鉴定中广泛采用STR检测技术的同时,不能放弃一些传统的经典方法,如HLA系统、红细胞血型、血小板血型等。

    综上所述,HLA分型技术是一种实用、有效的技术,具有很好的实用性,不仅能够应用于亲子鉴定,而且还可以应用于临床器官移植和HLA疾病相关性的研究。可以相信,HLA这一具有极高多态性的遗传标记系统,仍将在法医学个人识别和亲子鉴定中发挥较大的作用。

    【参考文献】

    1  冯明亮,冯哲,王健莲,等.中国汉族人群中5种血型系统在亲子鉴定应用中的探讨.中国输血杂志,1997,10(1):21-22.

    2  Lee  J. The  HLA  system.  New York: Springer Verlay,1990,108-114.

    3  冯明亮,季芸,马俊,等.反向PCR-SSOP技术行HLA-AB分型与临床应用.中国实验血液学杂志,2001,9(4):63.

    4  Olerup O,Zetterquist H. HLA-DR typing by PCR amplification with sequence-specific primers(PCR-SSP) in 2 hours: An alternative to serological DR typing in clinical practice including donor-recipient matching in cadaver trandplantations. Tissue Antigens,1992,39(22):5-235.

    5  杜志淳,李莉,林源,等.“中国犯罪DNA数据库”模式库-13个STR位点基因在中国人群中的分布.法医学杂志,2002,16(1):1-5.

    6  冯明亮,马俊,季芸,等.HLA-B40组等位基因多态性和血清学分型不明确标本分析.免疫学杂志,2002,18(3):215-217.

   作者单位:200051 上海,上海市血液中心免疫遗传室

    (编辑:汪  洋)


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