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浅谈细菌内毒素检查法中有关事项

来源:中华医药杂志 作者:李小品 2006-8-19
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摘要: 为了保证药品注射剂的使用安全,传统的方法是采用家兔热原试验检查热原质(一般认为热原质就是细菌内毒素), 1968 年美国 Levin 和 Bang 创建了微量细菌内毒素的鲎试验法,因方便简易,许多学者致力于以鲎试验代替家兔热原试验的尝试。 1991 年美国药典二十二版公布了 185 种药品用细菌内毒素检查法代替家兔热原试验。 ......


  为了保证药品注射剂的使用安全,传统的方法是采用家兔热原试验检查热原质(一般认为热原质就是细菌内毒素), 1968 年美国 Levin 和 Bang 创建了微量细菌内毒素的鲎试验法,因方便简易,许多学者致力于以鲎试验代替家兔热原试验的尝试。 1991 年美国药典二十二版公布了 185 种药品用细菌内毒素检查法代替家兔热原试验。 1995 年,我国药典规定了 20 余种药品的家兔热原试验以细菌内毒素检查法代替,至今已有10余年,品种也增大到了2005版的 112 种。其试验原理是内毒素与鲎试剂反应形成易于分辩的凝胶,其方法简便、经济,故被广泛应用于半成品、原材料及药品、医疗器械等产品的检查。

  10年来,笔者做过几十个品种和几千个批次的药品细菌内毒素检验,以及对辖区医院制剂室、药厂的质量监管工作,以下体会应提请注意。

    1  试剂灵敏度的复核

  细菌内毒素检查法至药典收载以来,每版都有明确规定:每使用新批量的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果改变时,应进行鲎试剂灵敏度的复核试验。在例行的药品制剂检查验收中发现,有些单位的检验人员在常规进行的细菌内毒素检查时,对所使用的鲎试剂从未进行过灵敏度复核,部分检验人员对此项工作不甚明了,完全忽视了复核鲎试剂灵敏度的重要性。

  鲎试剂的灵敏度,即鲎试剂在本试验法规定的条件下能检测出的细菌内毒素标准液或供试品溶液中的最低内毒素浓度(用 Eu/ml 表示),而灵敏度的测定即为鲎试剂在制备过程中受到各种因素影响,各批鲎试剂与内毒素形成凝胶反应的活力不一样,必须规定一种标准的内毒素按规定的方法测定。鲎试剂灵敏度复核的意义在于:(1)考查操作技能;(2)考查实验条件;(3)验证鲎试剂灵敏度是否准确,鲎试剂在生产、销售、运输、储存过程中易受诸如温度、光线、时间等外界因素的影响,使促凝活力降低;(4)验证细菌内毒素标准品的效价是否准确。因此为了保证细菌内毒素检查法的准确可靠性,检验者应对每批新购入的鲎试剂进行灵敏度的复核。

    2  干扰试验

  干扰试验目的是要确定出供试品在什么样的有效浓度内进行细菌内毒素检查时即可以克服的干扰因素,又能客观反映其所含内毒素是否符合根值。如氧氟沙星氯化钠注射液的细菌内毒素检查(2005版新收载,其限值为 1ml 中含内毒素量应小于 0.5Eu )初次接触,笔者用不同灵敏度鲎试剂对该样品进行了干扰抑制试验,见表1。表1  氧氟沙星氯化钠注射液的浓度干扰试验 结果说明,干扰抑制作用与药物浓度有关。药物原液或药物稀释两倍均存在干扰, PPC 不产生凝集,需再换更高灵敏度鲎试剂,对供试品进行 4 倍稀释,这样才能有效地排除氧氟沙星的干扰作用。所以当初次接触到一个样品时,必须对其做干扰试验,制定其检测方法。

    3  检查法中的供试品阳性对照

  在进行常规细菌内毒素检查时,规定了阳性对照(PC)、阴性对照(NC)及样品阳性对照( PPC )等必备项目,阳性对照的目的是证明在实验条件下所用鲎试剂灵敏度符合规定,阴性对照的目的是证明所用的超纯水( BET )中不存在可被检验到的内毒素,供试品阳性对照的目的是证明在试验条件下被检验的供试品溶液不存在抑制因素。这就是通常所说的干扰试验。进行干扰试验所用鲎试剂的批次及供试品的批量必定是有限的,在进行该药品常规细菌内毒素检验时鲎试剂的批量及供试品的批量和进行干扰试验时的情况不可能完全相同,这就不能保证此时的供试品对检查结果不出现异常。为此,我国药典从2000版起增定了供试品阳性对照是非常必要的。

    4  其他事项

  还应注意:(1)检查法整个过程应防止用移液管吸取溶液时禁用口吸。(2)保温防止震动,观察结果应该缓慢倒转。(3)在进行鲎试剂灵敏度的复核、供试品的干扰试验和细菌内毒素检查时,各试验所要求的对照管应同时进行,在认可试验有效的条件下才能进行计算和制定检验方法。(4)不同批号不同厂家生产的鲎试剂,灵敏度标示值一样,但有时同一批号的供试品得出不同的试验结果,不能只选用让供试品符合规定的鲎试剂,需进一步考察这种现象的原因,一切以用药安全来从严要求。

     作者单位: 433100 湖北潜江,潜江市药品检验所

    (编辑:汪  洋)


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