当前位置:首页 > 合作平台 > 在线期刊 > 中华医药杂志 > 2005年第5卷第1期 > 药物与临床 > 鲎试验法检测自制大输液热原的应用

鲎试验法检测自制大输液热原的应用

来源:INTERNET 作者:丁云 李玉龙 齐月萍 2005-7-7
336*280 ads

摘要: 近年来,国内外普遍认为并已得到证明,用鲎试剂检测大输液热原,可以部分代替家兔试验法。本文就应用鲎试验法检测大输液中热原的原理及实验材料、操作要点和我们几年来实践体会报告如下。 1 原理 鲎试验法就是利用鲎的血细胞溶解物(鲎试剂)与微量内毒素起凝胶化反应,从而检出微量内毒素(0。1~1mg/ml)的一种生物体外......


    随着医疗卫生事业的不断发展,对输液质量的要求不断提高。热原检查的方法也在不断地扩大,鲎法首先被美国药典收载,今年被我国定为部颁标准。
   
  近年来,国内外普遍认为并已得到证明,用鲎试剂检测大输液热原,可以部分代替家兔试验法。本文就应用鲎试验法检测大输液中热原的原理及实验材料、操作要点和我们几年来实践体会报告如下。
    
  1 原理
    
  鲎试验法就是利用鲎的血细胞溶解物(鲎试剂)与微量内毒素起凝胶化反应,从而检出微量内毒素(0.1~1mg/ml)的一种生物体外检测的新技术。
   
  变形细胞溶解物(Tachyples Ameboeytehysate)与内毒素的凝胶反应是一种酶催化反应,TAL含有凝固酶原(Proc-Lottingenzyme)和凝固蛋白原(CoaguLoger)。凝固酶原被微量的内毒素和Ca 2+ 激活,活化的凝固酶原催化,凝固蛋白原水解成多肽亚单元,亚单元由双硫链相互连接形成凝胶物。这种凝胶反应相当敏感又高度专一,其灵敏度为兔法的5~10倍为检测内毒素提供了快速、灵敏、简便的生化测试法。
    
  2 材料与方法
    
  我们医院是从1992年开始使用鲎试验法检测大输液热原的,4年来共开展8个品种702批次。

     2.1 实验材料 (1)试剂:福建省药检所鲎研室产品。(2)内毒素参考标准品(大肠杆菌0111PA内毒素):福建省药检所鲎研室产品。(3)无热原生理盐水(2ml/支):福建省药检所鲎研室产品。(4)家兔:本院饲养。(5)检测检品:均为本院自制大输液,逐批抽样检查。
   
  检测所用之器材:恒温水浴锅、按无热原处理的试管、注射器等。
   
  2.2 采用方法 试管凝胶法。

     2.3 操作要点 (1)试验在清洁区内进行,所用之试管、注射器等玻璃用品经清洁液浸泡处理,蒸馏水冲洗干净后,以250℃30min或180℃2h干热处理。(2)检品pH值须在4.0~7.5之间。(3)鲎试剂对大肠杆菌内毒素敏感度为0.1mg/ml所需凝胶反应,时间为37℃(±1℃)1h。(4)检品及空白对照管(阳性对照和阴性对照各1支),同时置于37℃(±1℃)恒温水浴箱保温1h,中途不可振摇。
   
  2.4 结果判断 (1)阳性:呈固态凝胶,试管倒置180℃凝胶不变形、不脱落者为阳性反应。(2)阴性:无变化或混浊絮状、粘液状或虽呈凝胶状但不能保持完整者为阴性反应。

  3 小结
    
  3.1 为确保用药安全,我们采用鲎法与兔法结合的方法,以兔法为准,一般认为:鲎法检测为阴性者,就认为热原合格,可供临床使用,鲎法检测为阳性者用兔法进行复检,以兔法为依据,如兔法为阴性者可供临床应用。4年来,在用鲎法检测中共出现阳性反应5批,采用兔法做对照,其中阴性者4批,阳性者1批。
   
  3.2 影响凝胶反应的因素 (1)反应温度低于37℃(±1℃)凝胶化时间被推迟,高于37℃时反应易被阻断。(2)被测溶液的pH值要求4.0~7.5,过高、过低都必须加以调正(可用0.1N HCl或0.1N NaOH加以调正)。(3)凝胶反应是一种酶的反应,凡能使蛋白质变性的物质都可引起抑制作用,出现假阴性。凡制剂中含有吐温-80、络合剂、枸橼酸钠、二硫基丙醇、生物碱等都会干扰此反应。
   
  3.3 根据福建省药检所鲎研室经验介绍,应用鲎试验法检测A、C、D热原时,因A、C、D中的枸椽酸钠络合Ca 2+ ,使反应受到抑制。加入钙、镁离子缓冲剂能使抑制作用逆转(其原理需进一步探讨),缓冲剂为0.02CaCl 2 、MgCl 2 混合液分装于安瓶内、高压灭菌、应用时每100ml A、C、D中可加入此缓冲液2ml即可。
   
  3.4 鲎法检热原具有一定的局限法,鲎凝胶反应是一个酶促反应,特异性高,反应对革兰阴性杆菌产生的内毒素作用,但由于热源的多源性复杂性,所以造成了它的局限性。
   
  按部颁标准利用鲎试剂可检测5%、10%葡萄糖溶液,生理盐水和注射用水,我院现在主要生产的大输液为5%、10%葡萄糖,生理盐水和注射用水及A、C、D等几种。pH值都居于4.0~7.5之间,所有制剂不含有金属及沉淀蛋白质的有机物,都没有盐析反应条件,即不至于影响凝胶反应的形成,因此用鲎试剂的凝胶反应来检测输液的热原是比较理想的。
    
  (注:参考文献主要参考福建省药所有关热原及鲎资料汇编第一、二集)    

  作者单位:157011黑龙江省牡丹江市心血管病医院 


医学百科App—医学基础知识学习工具


页:
返回顶部】【打印本文】【放入收藏夹】【收藏到新浪】【发布评论



察看关于《鲎试验法检测自制大输液热原的应用》的讨论


关闭

网站地图 | RSS订阅 | 图文 | 版权说明 | 友情链接
Copyright © 2008 39kf.com All rights reserved. 医源世界 版权所有
医源世界所刊载之内容一般仅用于教育目的。您从医源世界获取的信息不得直接用于诊断、治疗疾病或应对您的健康问题。如果您怀疑自己有健康问题,请直接咨询您的保健医生。医源世界、作者、编辑都将不负任何责任和义务。
本站内容来源于网络,转载仅为传播信息促进医药行业发展,如果我们的行为侵犯了您的权益,请及时与我们联系我们将在收到通知后妥善处理该部分内容
联系Email: