甲胎蛋白在卵黄囊中的定位

摘要：【摘要】目的观察卵黄囊癌的临床病理特点及甲胎蛋白（AFP）在该肿瘤中的定位特点。方法对29例卵黄囊癌进行了回顾性分析及ABC法免疫组化观察。结果癌组织均由圆形、柱形或鞋钉状细胞构成实体状、迷路状、乳头状或血管周围套状结构。ATP棕黄色阳性表达颗粒是位于癌细胞之胞浆内，阳性表达强度与肿瘤细胞的排列结构视蜡......

　　【摘要】目的观察卵黄囊癌的临床病理特点及甲胎蛋白（AFP）在该肿瘤中的定位特点。方法对29例卵黄囊癌进行了回顾性分析及ABC法免疫组化观察。结果癌组织均由圆形、柱形或鞋钉状细胞构成实体状、迷路状、乳头状或血管周围套状结构。部分病例可见微囊状或腺泡状结构;ATP棕黄色阳性表达颗粒是位于癌细胞之胞浆内，阳性表达强度与肿瘤细胞的排列结构视蜡块保留时间长短有一定差异。结论 AFP作为卵黄囊癌的肿瘤标记物，有助于诊断和鉴别诊断某些生殖细胞来源的肿瘤。

　　　卵黄囊癌是较为少见的恶性生殖细胞肿瘤，主要位于性腺内，但亦可发生在骶尾部、纵隔、腹膜后及松果等性腺外部位。因为该肿瘤可产生甲胎蛋白（AFP），应用免疫组化技术，观察AFP在瘤组织中的分布情况，对研究该肿瘤的形态与功能关系有重要意义。本文在回顾临床病理基础上，对29例卵黄囊癌用ABC染色法进行AFP免疫组化定位观察。

　　1 资料和方法

　　1.1 一般资料

　　29例卵黄囊癌系本院30年来临床活检资料，其中原发于卵巢10例;睾丸8例;性腺外11例;男17例，女12例，年龄9月～39岁;10例卵巢肿瘤年龄为7～39岁，平均20岁，左侧3例，右侧6例，双侧1例。8例术后1年内死亡，1例术后仅活了8个月，1例术后至今已8年，近期复查无复发;8例睾丸肿瘤病人年龄均在4岁以下，左侧2例，右侧6例。2例术后10个月
内因肿瘤复发死亡，1例术后生存5年，余者不详;性腺外11例中，纵隔4例，平均年龄25岁，松果体2例，年龄均为14岁，骶尾部3例及腹膜后2例均在2岁以下，除骶尾部及腹膜后各1例为女性外，余9例均为男性，11例病人均在术后4个月内死亡。1.2 方法 29例中，有2例病人进行了血清AFP分析，（火箭电泳法）。送检标本均经10%甲醛或酒精固定，石蜡包埋、HE和PAS染色观察，在综合临床和病理资料基础上，重点用ABC法，观察AFP在肿瘤中的免疫组化特点。阳性对照选择AFP阳性的肝细胞癌蜡块，阴性对照用PBS液代替一抗，所用试剂购于美国DaKo公司。

　　2 结果

　　2.1 血清AFP分析

　　2例病人结果是术前最高值95000ng/ml和42000ng/ml，术后第3天～2个月，AFP值分别下降到4000ng/ml～250ng/ml和3000ng/ml～45ng/ml。

　　2.2 病理所见

　　10例卵巢肿瘤最大直径由8.5～35cm，平均18cm，2例手术时肿瘤已自发破裂，腹腔转移，余者包膜完整，卵圆形，表面凹凸不平，切面呈多囊性睾丸。8例直径多在3～4cm，完整，光滑，卵圆形，实质性，富粘液。纵隔和骶骨处等肿瘤直径为6～14cm，多呈球形或哑铃形、多囊性，富粘液。镜下:29例肿瘤均可见到圆形、柱状或鞋钉状细胞构成的实体状、迷路状或乳头状结构及血管周围套状结构，部分病例可见微囊状或多泡状结构。瘤细胞浆内、外和囊状结构的囊腔内可见PAS染色阳性的透明小滴。7例合并畸胎瘤，1例合并精原细胞瘤，1例合并胚胎瘤。

　　2.3 AFP免疫组化定位观察

　　AFP免疫组化阳性反应细胞在胞浆内出现棕黄色颗粒（DAB呈色）。本组29例中均有阳性反应细胞，但在不同肿瘤或同一肿瘤的不同组织结构中阳性细胞的数量和反应程度不尽相同，其特点是:腺管状或多泡状、囊状排列的立方细胞及扁平细胞多数呈阳性反应，棕黄色颗粒分布在胞浆内，密度不均。血管周围套状结构之内胚窦细胞多数为阳性反应，少数为阴性反应。分布在细胞浆内或细胞浆外PAS染色阳性的透明小滴多为阳性反应，但反映强弱有所差异，强者为深棕色，弱者为棕黄色。少数为阴性反应。实体状细胞团多数为阴性反应，但部分细胞浆透明者可为阳性。畸胎瘤、精原细胞瘤、胚胎癌成分、瘤细胞周围的间质及纤维血管束等则为阴性反应。阳性反应细胞与肿瘤发生部位无关。但与蜡块保存时间长短及固定液种类有关。固定液为酒精者，阳性反应效果较明显，蜡块保留时间较短者亦较显著，20年前的蜡块染色结果多为弱阳性反应。29例卵黄囊癌镜下特点及免疫组化反应结果见表1。讨论甲胎蛋白是由早期胚胎的卵黄囊及胎儿肝脏产生的特异蛋白［1，2］，胚胎血清中可测出极高量AFP，约3mg/ml。随着胚胎发育的成熟，卵黄囊的退化及肝细胞渐趋成熟而逐渐减少，至生后5周没消失。测定血清AFP含量已成为对该类肿瘤早期诊断和判定复发的重要方法。Tcilum等人用免疫荧光技术，首先在性腺卵黄囊癌的组织切片中观察到AFP，其分布特点主要在排列成腺管状或多泡性囊状结构的扁平细胞及立方形细胞中，以及血管周围套状结构的内胚窦细胞中。位于细胞内、外PAS染色阳性的透明滴AFP免疫酶标及免疫组化染色亦呈阳性反应从而证实上述细胞AFP，PAS染色阳性的透明滴则为瘤细胞所分泌的含有AFP的分泌物［3］。Toshimitsu ［4］等对14例卵黄囊癌和27例妊娠4～11周的卵黄囊进行观察比较发现:胚胎时期的卵黄囊内胚层和卵黄囊癌相似，在光镜下，两者经酶消化后，PAS染色及AFP免疫组化染色均阳性;妊娠4周卵黄囊内胚管和细胞内管与卵黄囊癌的网状结构相似;连续切片所见到的中心含有血细胞的乳头状内胚层和突入到内胚层的管状或球状结构非常类似于Schiller-Duvol小体。此外，电镜下比较，卵黄囊癌和卵黄囊内胚层均显示相似的形态学结构，例如:细胞联合的方式、微绒毛，显示核仁网的核仁，与线粒体紧密粘连的粗面内织网，椭圆形或无定形颗粒，基底膜和基底膜样物质等。

　从本组29例组织切片的常规染色及免疫组化观察看出，发生在性腺内或性腺外的卵黄囊癌，其组织形态与功能均相似，各部位肿瘤AFP阳性结果强弱取决于肿瘤本身含AFP含量多少，及蜡块保留时间的长短和组织固定液种类。卵黄囊癌中的畸胎瘤成分，如呼吸道上皮，鳞状上皮等其它结构AFP阴性。然而，Thrasa ［5］等观察了12例纯卵巢畸胎瘤AFP免疫组化特点发现:在3例非成熟性畸胎瘤中见到AFP免疫反应孤立巢，其部位在卵黄样囊，肠型上皮或类似肝脏的组织内，因此对术前血清AFP含量增高，而组织切片未见明显卵黄囊癌结构者，则可能由于实性畸胎瘤中含有极少量的内胚窦瘤成分或由于未成熟畸胎瘤中层内胚层的瘤组织成分也可含微量AFP所致。而成熟性畸胎瘤无一例染有AFP成分，说明成熟性畸胎瘤不产生AFP。因为在生殖细胞肿瘤中，只有卵黄囊癌能产生AFP，因此AFP作为卵黄囊癌的吸瘤标记物，对某些生殖细胞来源的形态结构不典型的疑难病理，通过免疫组化定位观察有助于诊断和鉴别诊断。

　　参考文献

　　1 连利娟.血清甲胎蛋白的测定对卵巢内胚窦瘤的诊断及治疗的指导意义.中华妇产科杂志，1979，14（1）:22.

　　2 Talerman A.Alpha-fetoprotein and germ cell tumor.A possible rsle of yolk sac tumor in production of Alpha-fetoprotcin.Cancer，1974，34:1722.

　　3 顾国.小儿骶尾部卵黄囊甲胎蛋白免疫酶标定位观察及临床病理分析.中华病理杂志，1985，14（3）:311.

　　4 Toshimitsu T，etahyolk sac tumor of the ovary and human yolksac.Am J of Obst and Gyneco，1987，156（1）:1223.

　　5 Thorasa P.Alpha-fetoprotcin localization in pure ovarian teratoma.An immunohisto chimical study of12cases.Am J Chinic Pathol，1987，88（6）:713.

　　　　作者单位:1118002辽宁省丹东市妇女儿童医院病理科 2辽宁省辽东学院医学

发布日期：2005-7-4

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