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群反应性抗体检测的临床应用

来源:INTERNET 作者:陈继中 2005-6-29
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摘要: 【摘要】 目的 建立群反应性抗体(PRA)的检测方法,探究PRA的产生与异体输血及非溶血性输血反应(NHFTR)的关系。 方法 以60例健康成人外周血淋巴细胞作为群体淋巴细胞的来源,按照微量补体依赖淋巴细胞毒实验检测122例患者的PRA。 结果 (1)从未接受输血组PRA阳性百分率,男性为6。(2)接受多次输血组PRA阳性百分率,......


  【摘要】 目的  建立群反应性抗体(PRA)的检测方法,探究PRA的产生与异体输血及非溶血性输血反应(NHFTR)的关系。 方法  以60例健康成人外周血淋巴细胞作为群体淋巴细胞的来源,按照微量补体依赖淋巴细胞毒实验检测122例患者的PRA。 结果  (1)从未接受输血组PRA阳性百分率,男性为6.5%(3/46);女性为29%(9/31)。(2)接受多次输血组PRA阳性百分率,男性为36.8%(7/19);女性为61.5%(16/26)。(3)NHFTR发生率为12.3%(15/122),其中PRA阳性组为31.4%(12/35);PRA阴性组为3.4%(3/87)。(4)12例PRA阳性患者接受去白细胞过滤血NHFTR发生率为0(0/12)。 结论  接受异体输血是产生PRA的致敏因数;NHFTR与PRA有直接关系;输去白细胞过滤血是预防NHFTR的有效方法。

      
  群反应性抗体(PRA)是一组抗人类白细胞抗原的抗体,主要是由于妊娠、器官移植、异体输血、感染等引起 [1] ,在临床除引起器官移植急性排斥反应,导致移植物失功外,常可以引起非溶血性输血反应(NHFTR)。随着输血技术的发展,对NHFTR的研究日益受到重视。为进一步了解NHFTR与PRA的关系,为临床预防NHFTR提供依据,本文对122例受血者的血清PRA进行回顾性检测,报告如下。

  1 材料与方法

  1.1 材料
   
  1.1.1 研究对象 122例患者为本院住院及肾透析病人。其中77例从未接受输血,男46例,女31例,45例接受5次以上输血,其中男性19例,女性26例。所有女性妊娠胎次大于1次。空腹采集静脉血3ml,分离血清保存于-40℃。

  1.1.2 试剂 淋巴细胞分离液(上试二厂),RPMI-1640培养液(Gibco公司),Terasaki溶液(自配),小牛血清(杭州四季青生物工程技术研究所),5%曙红(上试三厂),12%甲醛,兔补体(上海市血站)。
   
  1.1.3 仪器 倒置相差显微镜(OLYMPUSCK-2b),水平离心机(KUBOTA-2100),恒温箱,72孔Terasaki反应盒,重复分配器,六联重复定量加样器(The Robbins multiple syringe dyspenser)250/5μl,六联喷射式可调定量加样器(York instru-ments)0~25μl。
   
  1.1.4 群体淋巴细胞 采集60例健康成人外周血,用肝素钠抗凝,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,用Terasaki溶液稀释至2000个/μl。

  1.2 方法
   
  1.2.1 淋巴细胞活性用台盼兰做活体染色,加入甲醛固定,镜下观察着色细胞小于5%。
   
  1.2.2 PRA检测 参照文献中微量补体依赖淋巴细胞毒实验方法 [2] 。首先建立群体淋巴细胞反应板,将60份淋巴细胞加到Terasak板中,每孔分别加1μl淋巴细胞悬液,5μl灭菌石蜡油,使之成为PRA检测细胞板。实验时,在每孔中加入1μl被检血清,22℃孵育30min,每孔加入兔补体5μl,22℃孵育60min,每孔加入3μl曙红,室温放置4~6min,再加入8μl甲醛,4℃静置2h,盖上盖玻片倒置相差显微镜下观察。
   
  1.2.3 PRA值计算 观察各孔,若死细胞高于阴性对照20%以上判为阳性孔,PRA%=(阳性孔数/60)×100%,PRA%>40%判为阳性。
   
  1.2.4 NHFTR的判定 [3]  输血前无发热,输血中或输血后4h体温大于38℃,较输血前升高1℃以上,可伴有恶寒、寒战、出汗、皮肤潮红等症状,不能为患者病情所解释。
   
  1.2.5 统计学处理 所得结果应用Concise statistics统计软件进行X 2 检验

  2 结果
    
  2.1 PRA检测结果 122例患者血清PRA的检测结果见表1,PRA阳性率为28.7%(35/122)。其中77例从未受血者PRA阳性率,男性为6.5%(3/46),女性为29%(9/31),平均为15.6%(12/77)。45例曾受血者PRA阳性率,男性为36.8%(7/19),女性为61.5%(16/26),平均为51.1%(23/45)。从统计结果来分析,从未输血组男性与女性比较差异有显著性(X 2 =7.133,P<0.01),男性患者中从未输血组与曾输血组比较差异有显著性(X 2 =9.469,P<0.01),女性患者中从未输血组与曾输血组比较差异有显著性(X 2 =6.086,P<0.05),曾输血组男性与女性比较差异不明显(X 2 =2.680,P<0.05)。
   
  2.2 NHFTR与PRA的关系 122例受血者NHFTR发生率为12.3%(15/122),其中PRA阳性组NHFTR发生率为31.4%(12/35),PRA阴性组NHFTR发生率为3.4%(3/87),两者相比较有显著差异(X 2 =12.036,P<0.01)。
   
  2.3 12例发生NHFTR的PRA阳性患者接受去白细胞过滤血输血,NHFTR发生率为0(0/12)。 

  表1 不同性别的两组患者PRA阳性率比较 (略)
    
  3 讨论
    
  群反应抗体(PRA)是患者体内的预存抗体,是针对群体中的人类白细胞抗原(HLA)的抗体。除少数PRA是由感染导致外,大多数是由于妊娠、异体输血、器官移植导致。受血者体内PRA的产生与输入的抗原强度、输注次数和数量、间隔时间及受血者的免疫应答的敏感性有关。目前,临床输血一般不做HLA配型,因此绝大多数供受者之间HLA血型不合,由此产生PRA的机会较多。对于从未受血者体内产生PRA的频率较低,而反复有规律的受血者产生PRA的频率在54.7%左右 [4] 。本组资料显示,除PRA的阳性率与文献报告相近外,女性PRA的阳性率保持较高水平,并且显著高于男性,这除了与输血有关外,女性患者受到外来抗原刺激的免疫因数比男性还多一种,即妊娠。并且妊娠过程中女性患者由于受到胎儿HLA抗原的刺激,当再次输血后,女性患者对该抗原的免疫应答比男性患者更敏感,更易产生PRA抗体。
   
  非溶血性输血反应(NHFTR)绝大多数为发热反应,这主要是由于供受者的HLA抗原不合引起的一种同种异体免疫反应。随着输血技术的提高,由细菌污染和血型不合而引起的输血反应已很少见,而由PRA引起的NHFTR约占输血反应的55%~57% [4] 。一般认为NHFTR大多数是抗HLA抗体引起,其次是由抗血小板抗体和抗粒细胞抗体所致 [5] 。本组资料表明,PRA阳性患者发生NHFTR与PRA阴性患者比较差异有显著性。因此,能够有效预防NHFTR的方法是自体输血和输注HLA血型相同的血液,但是自体输血仅适用择期手术的患者,而由于HLA基因的高度多态性,实际上很难找到HLA型别完全相同的供者。
   
  非溶血性输血反应发生的主要原因是一次或多次输入的供者血液中的白细胞与受者体内预存的抗HLA抗体发生免疫反应,导致供者的白细胞破坏,释放致热源,从而引起受者在短时间发生输血反应 [6] 。因此,通过去除供血中的白细胞成分可避免由于受者产生的抗HLA抗体而引起的非溶血性输血反应,即去除白细胞后输血。国外的调查认为,一次输入的血液中白细胞的含量小于5×10 8 ,即去除90%的白细胞,就能有效地防止非溶血性输血反应的发生。目前,第三代白细胞过滤器能够过滤掉血液中99.9%的白细胞 [7] ,预防同种免疫反应的发生。对于PRA阳性的受血者,输入去除白细胞的过滤血后能够取得令人满意的效果。
   
  本世纪60年代,Terasaki将群反应性抗体的检测应用于临床,迄今已经发展了多种检测方法,细胞毒法和酶联免疫法,后者包括:LATM法、LAT法、PRA-STAT法、细胞毒法。目前,以酶联法操作简便,结果稳定 [8]。但是由于试剂价格不菲,从而使大多数医院很难开展此项工作。本文采集60例健康成人的群体淋巴细胞作为靶细胞,依据微量补体依赖的随机淋巴细胞毒实验(RPLT)对患者的PRA进行检测 [9] ,由于所选的靶细胞数量较大,基本能够包括绝大多数HLA抗原位点,所得结果令人满意,适合大多数医疗单位开展。由于RPLT法所用的淋巴细胞未作HLA分型,无法判断PRA阳性患者体内抗HLA抗体的特异性,所以建立一个HLA抗原已知标准细胞库,对于更细致分析PRA的类型具有重要的意义。
     
  参考文献
    
  1 Katznelson S,Bhaduris,Cecka JM.Clinial aspects of sensitization.Clinical Transplants,1997,26:285.
    
  2 Terasaki P I,Moolelland JD.Microdroplet assay of human serun cytotox-ins.Nature,1964,204:998.
   
  3 张钦辉.临床输血学,上海:上海科学技术出版社,2000,313-315.
   
  4 Slichter SJ.Platelet transfusion therspy.Hemaloc/Oncology Clin of N.A,1990,4(4):291.
   
  5 徐文皓,李志强.非溶血性输血反应.中国输血杂志,2002,15(5):368.
   
  6 胡丽华,曹奎杰,乐道利,等.白细胞过滤器的临床应用.临床血液学杂志,2000,13(6):267-268.
   
  7 于洋,刘景汉,欧阳锡林,等.白细胞过滤器预防发热性非溶血性输血反应的临床观察及效果评价.中国输血杂志,2003,16(3):180-181.
   
  8 谭建明,唐孝达,周永昌.器官移植HLA-IgG抗体测定方法的比较研究.中华泌尿外科杂志,2000,21(4):367.
   
  9 戴春笋,杨俊伟,刘志红,等.群反应性抗体检测在肾移植中的应用.肾脏病与透析肾移植杂志,1998,7(2):123.
    

 作者单位:244000安徽省铜陵市人民医院检验科


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