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奥斯曼生眉液质量标准的研究

来源:《中华现代中医学杂志》 作者: 2009-8-24
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摘要: 【摘要】 目的 对奥斯曼生眉笔(液体型)的质量标准进行研究。0 ml/min,柱温:35℃,在230 nm处检测吲哚苷的含量。以乙腈∶水(25∶75)为流动相,在320 nm处检测2,3,5,4‘-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。结果 吲哚苷在8~56 μg/ml范围内线性关系良好(R2=1),平均回收率为103。...


【摘要】  目的 对奥斯曼生眉笔(液体型)的质量标准进行研究。方法 采用YMC-Pack-ODS-A(150 mm×60 mm)色谱柱,以甲醇∶水(20∶80)为流动相,流速:1.0 ml/min,柱温:35℃,在230 nm处检测吲哚苷的含量;以乙腈∶水(25∶75)为流动相,在320 nm处检测2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量。结果 吲哚苷在8~56 μg/ml范围内线性关系良好(R2=1),平均回收率为103.63%(n=6),RSD为0.79%;2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在5~45 μg/ml范围内线性关系良好(R2=0.9999),平均回收率为97.21%,RSD为1.59%。结论 该含量测定方法简便、准确、快速、有效。

【关键词】  奥斯曼生眉笔;吲哚苷;HPLC;质量标准;2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

   Research of quality standards on Osmen Plant Eyebrow Growing Pen(liquid)

    JING Li-ping,LIU Qing-hua,YU Ping.Xinjiang Osmen Biology Science and Technology Stock Co. itdcosmetics Co.Ltd,Urumchi 830001,China

    [Abstract]  Objective  To explore Osmen Plant Eyebrow Growing Pen(liquid) quality standards for research.Methods  By YMC-Pack-ODS-A column, methanol∶water (20∶80) as mobile phase,at a flow rate: 1.0 ml/min, temperature: 35 ℃, in the 230 nm detection indican by HPLC;acetonitrile∶water (25∶75) as mobile phase,in the 320 nm detection 2,3,5,4'-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside by HPLC.Results  Indican in 8~56 μg/ml linear in the range was good relations (R2=1), the average recovery rate was 103.63% (n=6), RSD was 0.79 percent; 2,3,5,4'-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside in 5~45μg/ml linear in the range was good relations (R2=0.9999), the average recovery rate was 97.21% (n=6), RSD was 1.59 percent.Conclusion  The determination is simple,accurate, rapid and effective.

    [Key words]Osmen Plant Eyebrow Growing Pen(liquid);indican;HPLC;quality standards,2,3,5,4'-Tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside

    奥斯曼生眉液是新疆药物研究所奥斯曼课题组在发掘维吾尔民间用乌斯玛草生眉育发传统经验的基础上研发而成,产品一经上市,便以它鲜明的民族性、天然性和功效性立即引起社会各方面的关注,受到消费者的青睐,显示出巨大的市场潜力。由于产品开发时间较早,为提高产品质量,我们采用高效液相法对奥斯曼生眉液中有效成分吲哚苷[1~3]和2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷[4~10]进行测定,对其质量进行分析研究。

    1   仪器与试剂

  LC-2010CHPLC色谱仪,BP211D 1/10万天平;吲哚苷对照品(天津一方科技有限公司),2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-β-D-葡萄糖苷对照品(以下简称二苯乙烯苷,中国药品生物制品检定所),色谱甲醇(Fisher ChemAlert Guide),色谱乙腈(Fisher ChemAlert Guide),乙醇为分析纯(天津化学试剂三厂),水为市售乐百氏纯净水,AB-8大孔吸附树脂(D-101)(天津市光复精细化工研究所),奥斯曼生眉液(新疆奥斯曼生物科技有限公司)。

  2   方法与结果

    2.1   吲哚苷含量测定方法[11,12]

    2.1.1  色谱条件  色谱柱 YMC-Pack-ODS A(150 mm×6.0 mm);流动相:甲醇∶水(20∶80,v/v);进样量:10 μl;流速:1.0 ml/min;柱温:35 ℃;检测波长:230 nm。

    2.1.2  对照品溶液的制备  精密称取吲哚苷对照品10.0 mg于25 ml容量瓶中,加水稀释至刻度。精密量取10 ml于50 ml容量瓶中,加水稀释至刻度,即得80 μg/ml的标准溶液。

    2.1.3   供试品溶液的制备  取奥斯曼生眉液1 ml,加水稀释定容至5 ml,加样于已处理好的20 g大孔树脂柱中,先加100 ml的水洗脱,收集洗脱液(a),再加200 ml 10%的乙醇洗脱,收集洗脱液(b),将洗脱液a和b分别水浴蒸干,a用50%乙醇、b用纯化水溶解转移至10 ml容量瓶中并定容至刻度,即为样a和样b,样b高速离心(10 000 r/min,10 min),上清液过微孔滤膜即为供试品溶液。

    2.1.4   线性关系考察  分别精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 ml的吲哚苷对照品溶液于10 ml容量瓶中,加水稀释至刻度,即为8、16、24、32、40、48、56 μg/ml一系列标准溶液。按上述色谱条件测定,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,计算得回归方程y=34654x-8722.1,R2=1。

    2.1.5   精密度考察  准确吸取标准品溶液10 μl,重复进样6次,测定其峰面积平均为98 0127,相对标准偏差(RSD)为0.78% 。表明仪器精密度良好。

    2.1.6  稳定性试验  精确吸取10 μl供试品溶液,于上述色谱条件下2、4、6、8、10 h进样一次,共5次,峰面积平均值为16 443,RSD为1.32%。表明供试品溶液在10 h内是稳定的。

    2.1.7  加样回收试验   精密量取已知同一浓度的样b溶液25 ml 6份,加入8 μg/ml吲哚苷标准溶液2 ml,加水稀释定容至50 ml,按供试品溶液的测定方法进行测定,结果见表1,平均回收率为103.63%,RSD为0.79%。见图1~2,表1。表1  吲哚苷加样回收率试验结果

    2.2  二苯乙烯苷含量测量方法[13]

    2.2.1  色谱条件  色谱柱 YMC-Pack-ODS A(150 mm×6.0 mm);流动相:乙腈∶水(25∶75,v/v),进样量:10 μl,流速:1.0 ml/min;柱温:35 ℃;检测波长:320 nm。

    2.2.2  对照品溶液的制备  精密称取二苯乙烯苷对照品10.0 mg于50 ml容量瓶中,加水稀释至刻度。精密量取25 ml于100 ml容量瓶中,加水稀释至刻度,即得50 μg/ml的标准溶液。

    2.2.3  供试品溶液制备  上述2.1.2供试品溶液制备制得的样a,高速离心(10 000 r/min),上清液过微孔滤膜即为供试品溶液。

    2.2.4  线性关系考察  分别精密量取1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml的二苯乙烯苷对照品溶液于10 ml容量瓶中,加水稀释至刻度,即为5、15、25、35、45 μg/ml一系列标准溶液。按上述二苯乙烯苷色谱条件测定,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,计算得回归方程y=31785x+9563.2,R2=0.9999。色谱图见图3。

    2.2.5   精密度考察  准确吸取标准品溶液10 μl,重复进样6次,测定其峰面积平均为975 571.3,相对标准偏差(RSD)为0.31%。表明仪器精密度良好。

    2.2.6  稳定性试验  精确吸取10 μl供试品溶液,于上述色谱条件下2、4、6、8、10 h进样一次,共5次,峰面积平均值为29 143,RSD为0.32%。表明供试品溶液在10 h内是稳定的。

    2.2.7  加样回收试验   精密量取已知同一浓度的样b溶液25 ml 6份,加入5 μg/ml吲哚苷标准溶液3 ml,加水稀释定容至50 ml,按供试品溶液的测定方法进行测定,结果见表2。平均回收率为97.21%,RSD为1.59%,见图4。表2  二苯乙烯苷加样回收率试验结果

    2.3  样品的测定  分别取三批奥斯曼生眉液,每一批样品分别按2.1.2项下供试品溶液制备方法平行做3份,分别按吲哚苷和二苯乙烯苷测定的色谱条件进行测定,计算样品中吲哚苷和二苯乙烯苷的平均含量。结果见表3。表3  三批奥斯曼生眉液测定结果

    3  讨论

  奥斯曼生眉液中含有大青叶、何首乌等中药材,其主要成分为吲哚苷和二苯乙烯苷,因此该产品选择吲哚苷和二苯乙烯苷作为含量测定指标。为确定样品的制备方法,笔者曾用乙醇醇沉法精制供试品溶液,但样品分离效果不好。后改用大孔吸附树脂,分别用100 ml水、10%乙醇、20%乙醇和30%乙醇洗脱,分别收集洗脱液,按吲哚苷和二苯乙烯苷HPLC色谱条件测定,结果在水洗脱液中测到了二苯乙烯苷,在10%、20%的乙醇洗脱液中测到了吲哚苷,而30%乙醇洗脱液中两种成分都未测到。在吲哚苷HPLC测定的色谱条件的选择上,我们对不同比例的甲醇和水进行了实验,结果发现甲醇∶水(20∶80)能使样品很好的分离,且峰形较好。

【参考文献】
  1 刘新民.青黛色素(有待于化妆品界利用的植物性色素).北京日化,2001,63(2):8.

2 刘新民.青黛色素(有待于化妆品界利用的植物性色素续).北京日化,2001,64(3):4.

3 顾月翠,付建平,李咸章.大青叶中靛甙的分析研究.中草药研究资料-靛玉红专辑,1979,17:18-20.

4 边秀娟,包国荣.电子自旋共振法测定何首乌中大黄素、二苯乙烯苷清除超氧阴离子自由基的实验研究.福州中医学院学报,2002,12:13.

5 刘厚淳,陈万生.何首乌水溶性成分2,3,5.4’-四羟基二苯乙烯2-O-β-D葡萄糖苷体外抗氧化作用研究.药学实践杂志,2000,18(4):232-234.

6 Yong C,Mingfu W.2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl radical-scavenging active components from polygonum multiflorum Thunb.Journal of Agricultural and Food Chemistry,1999,47(6):2226-2228.

7 Teguo PW,Deffieux G,Vercauteren J,et al.Isolation,identification and an tioxidant activity of three stilbene glucosides newly extracted from Vitisvinifera cell cultures.Journal of Natural Products,1998,61(5):655-657.

8 Ryu Geonseek,Ju Jeung Hon.The radical scavenging effects of stilbene glucosides from Pogonum multiflorum.Archives of Pharmacal Research,2002,25(5):636-639.

9 赵小凌,苗小春.中草药何首乌抗皮肤衰老作用研究.北京日化,1995,1:34-36.

10 徐光,张礼萍,陈力芳,等.二苯乙烯苷类化合物对蛋白激酶C的抑制作用.药学学报,1994,29(11):818-822.

11 李玲,乔传卓.高效液相色谱法直接测定马蓝中吲哚甙含量.药物分析杂志,1992,12(5):302.

12 李玲,乔传卓.马蓝药材中吲哚甙分解问题的研究.中国药学杂志,1993,28(6):346.

13 唐斌,尚北城,张青,等.何首乌中二苯乙烯甙的含量测定.西南国防医药,2004,14(5):496-498.

(本文编辑:丁 平)


作者单位:1 830001 新疆乌鲁木齐,新疆奥斯曼生物科技有限公司 2 830004 新疆乌鲁木齐,新疆药物研究所


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