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HPLC法测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量

来源:中华现代中医学杂志 作者:高永堂衣学龙王兆华 2005-12-26
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摘要: 【摘要】 目的 应用高效液相色谱法测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量。结论 该方法用于测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷含量,简便、快速、准确。【关键词】 龟芪壮骨颗粒。二苯乙烯苷。...


    【摘要】  目的  应用高效液相色谱法测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量。方法  采用DiamonsilTM(钻石)C18(5μm,250mm×4.6mm),乙腈-0.2%磷酸溶液(23:77)为流动相,流速:1ml/min,检测波长为320nm。结果  线性范围为0.0964~0.482μg,r=0.9998,平均回收率为98.00%,RDS=0.98%。结论  该方法用于测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷含量,简便、快速、准确。

  【关键词】  龟芪壮骨颗粒;二苯乙烯苷;高效液相色谱法
   
  Determination of 2,3,5,4-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside in Guiqizhuanggu granule by HPLC method

  GAO Yong-tang,YI Xue-long,Wang Zhao-hua.

  Dunhua Ruilong Pharmaceutical Co LTD,Duenhua 133700,China

  【Abstract】  Objective  To develop a HPLC method  to determine the content of 2,3,5,4-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside in Guiqizhuanggu granule.Methods  The HPLC method was carried out on an DiamonsilTMC18 column(5μm,250mm×4.6mm)using a mobile phase of acetonitrile-0.2% phosphoric acid water(23:77),and detection wavelength was 320 nm.Results  With a relation efficient of 0.9998. Good linear relationshipe between area and a mount was noted for 0.0964~0.482μg. The average recovery of 2,3,5,4-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside and RSD were 98.00% and 0.98% respectively. Conclusion  It was proved that the method was available,simple and accurate.

  【Key words】  guiqizhuanggu granule; 2,3,5,4-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside; HPLC

    龟芪壮骨颗粒是熟地黄、龟甲、杜仲等十八味中药组成。主要功能为补气补血,滋补肝肾,强筋壮骨。适用于腰膝酸软,气血不足等症。方中主要药物何首乌为蓼科植物何首乌的干燥块根。其有效成分之一为二苯乙烯苷。本实验采用高效液相色谱法[1,2],测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量作为该制剂的质量控制指标,以便更好地控制该产品质量。

  1  仪器与试药

  日本岛津LC-10 AT高效液相色谱仪;SPD-10A紫外检测器;KQ—250型超声波处理器;2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-β-D-葡萄糖苷对照品(购于中国药品生物制品检定所,批号:0844-200003,HPLC面积归一化法,测定含量为99.61%);龟芪壮骨颗粒由敦化市瑞隆药业有限责任公司提供;其它化学试剂均为国产,AR级。

  2  方法与结果

  2.1  色谱条件  色谱柱:DiamonsilTM(钻石)C18(5μm,250mm×4.6mm),乙腈-0.2%磷酸溶液(23:77)为流动相,流速:1ml/min,检测波长为320nm,理论塔板数按二苯乙烯苷计算,不低于3000;柱温为室温。

  2.2  对照品溶液的制备  精密称取对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.0241mg,作为对照品溶液。

  2.3  方法  内容物2g,精密称定,置锥形瓶,加氯仿40ml,超声处理(功率250W,频率20kHz)15min,滤过,药渣挥干氯仿,连同滤纸移入具塞锥形瓶中,精密加入40%乙醇25ml,称定重量,超声处理(功率250W,频率20kHz)10min,放冷,用40%乙醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。

  2.4  阴性对照溶液的制备  按处方量制备不含何首乌药材的阴性样品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl,注入液相色谱仪中,按上述条件测定,结果表明,阴性对照溶液色谱图中与对照品位置处无干扰,此法可行,见图1。

  2.5  线性关系考察  精密吸取二苯乙烯苷对照品溶液4、 8、 12、16、20μl,分别注入高效液相色谱仪中对照品HPLC色谱图供试品HPLC色谱图阴性对照HPLC色谱图

  图1  对照品HPLC色谱图、供试品HPLC色谱图、 阴性对照HPLC色谱图 略

  进行分析,以对照品进样量(μg)为横坐标,以对照品的峰面积为纵坐标作图,得一条通过原点的直线,回归方程为:Y=1930369.2X+3605.115,r=0.9998,结果表明淫羊藿苷在0.0964~0.482μg间呈良好的线性关系。

  2.6  精密度试验  精密吸取供试品溶液连续5次重复进样,测得相对偏差RSD=0.86%,测定结果见表1。

  表1  精密度实验结果 略

  2.7  稳定性试验  精密吸取供试品的溶液在 0、2、4、6h,分别进样,进行测定。结果二苯乙烯苷峰面积的RSD=0.245%,表明在6h内供试品溶液的淫羊藿苷含量稳定,测定结果见表2。

  表2  供试品溶液稳定性试验结果 略

  2.8  重现性试验  精密称取同一批号样品 5份,按供试品溶液的制备方法制备,依法进样分析,样品中二苯乙烯苷含量的RSD=1.49%,测定结果见表3。

  表3  龟芪壮骨颗粒重现性试验结果表 略

  2.9  加样回收率试验  精密称取2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷对照品适量,加入到已测知2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷含量的龟芪壮骨颗粒样品中,置具塞锥形瓶中,精密加入40%乙醇100ml,按供试品溶液的制备方法制备,进样5μl,以外标法计算含量,计算回收率,结果见表4。

  表4  加样回收率试验测定结果 略

  2.10  样品的含量测定  按上述方法,制备供试品溶液,测定三批龟芪壮骨颗粒(5g/袋)中二苯乙烯苷的含量,结果见表5。

  表5  龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷含量测定结果 略

  3  讨论

  在对方中二苯乙烯苷测定色谱条件中流动相选择时曾采用乙腈-水(25:75)、乙腈-水(20:80)、乙腈-0.2%的磷酸水溶液(22:78)、乙腈-0.2%的磷酸水溶液(24:76)进行比较实验,结果采用乙腈—0.2%磷酸水(23:77)作为流动相,二苯乙烯苷与其他杂质峰能达到较好分离。

  在供试品制备方法选择中,我们采用了冷浸12h、加热回流20min、超声处理10min三种方法进行比较试验,结果表明,超声处理和加热回流提取供试品测定其二苯乙烯苷含量相近,但加热回流提取方法供试品溶液中含有较多的杂质峰,故选用超声处理方法制备供试品。

  本含量测定方法适用于测定龟芪壮骨颗粒中二苯乙烯苷的含量,具有方法简便、快速、准确等特点。

  【参考文献】

  1  冯伟红,李曼玲.HPLC法测定补肾腰痛颗粒中二苯乙烯苷的含量.中国实验方剂学杂志,2004,10(2):4.

  2  国家药典委员会编.中华人民共和国药典.一部.北京:化学工业出版社,2000,1.

  作者单位:1 133700 吉林郭化,敦化市瑞隆药业有限责任公司

       2 133700 吉林敦化,吉林省中医中药研究院

  (编辑:守  中)


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