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IFN-γ、TNF-α联合测定对结核性胸腔积液诊断价值的探讨

来源:《中华现代内科学杂志》 作者:王贺金周德 2008-6-13
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摘要: 【摘要】 目的 探讨IFN-γ、TNF-α测定对结核性胸腔积液的诊断价值。方法 采用双抗体夹心ELISA法对结核性及癌性胸腔积液IFN-γ、TNF-α测定。结果 结核性胸腔积液组IFN-γ、TNF-α与癌性胸腔积液组差异有统计学意义(P<0。两项指标对诊断结核性胸膜炎的敏感性分别是89。...


【摘要】    目的 探讨IFN-γ、TNF-α测定对结核性胸腔积液的诊断价值。方法 采用双抗体夹心ELISA法对结核性及癌性胸腔积液IFN-γ、TNF-α测定。结果 结核性胸腔积液组IFN-γ、TNF-α与癌性胸腔积液组差异有统计学意义(P<0.01);两项指标对诊断结核性胸膜炎的敏感性分别是89.4%、86.3%,特异度分别是85.8%、84.3%;同时测得诊断阳性率为85.3%。结论 IFN-γ、TNF-α联合测定对结核性胸膜炎的诊断具有一定临床意义。

【关键词】  结核性 胸腔积液 癌性 诊断

  Investigation on  diagnosis of  tuberculous hydrothorax with IFN-γ and TNF-α

    WANG He,JIN Zhou-de.Comprehensive Division of Infectious Disease Hospital of Changchun,Changchun 130123,China

    [Abstract]  Objective  To investigate the value of IFN-γ and TNF-α  in the discrimination  of tuberculous hydrothorax and carcinomatous hydrothorax.Methods  Double antibodies of ELISA Sandwich method  was used.Results  There were marked differences between tuberculous hydrothorax and carcinomatous hydrothorax in terms of IFN-γ and TNF-α.Sensitivity of the two indices in the diagnosis of tuberculous were 89.4%,86.3% respectively,specificity of the two indices were 85.8%,84.3%  repecpectively,and at the same the positive rate of diagnosis was 85.3%.Conclusion  Combination of IFN-γ and TNF-α examination provides useful assist  for the discrimination between tuberculous hydrothorax and carcinomatous hydrothorax so this methed has important clinical value.

    [Key words]  tuberculoses;hydrothorax;carcinomatoses;diagnosis

    由于胸腔积液中的癌细胞和结核杆菌的检出率低,癌性胸腔积液和结核性胸腔积液的鉴别问题一直为人们所关注。随着分子生物技术迅速发展(如PCR、胸膜原位杂交等)提供了快速诊断技术,其阳性率为60%~80%[1],但仍存在着假阳性及技术等方面问题,当缺乏病理检查依据时二者的鉴别诊断困难,临床上仍有20%~30%的胸腔积液不能确定原因。近年来有学者报道腺苷脱氨酶(ADA)、溶菌酶(LYS)、干扰素-γ(IFN-γ)对早期诊断结核性胸腔积液的价值,但国内的IFN-γ、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)联合测定报道文献较少。笔者1999年12月~2005年10月采用ELISA法同步测定了128例胸腔积液患者的血清、胸腔积液IFN-γ(γ-干扰素)、TNF-α的水平,以探讨两者在诊断结核性胸腔积液、癌性胸腔积液中的价值及指标之间的相关性。

    1  资料与方法

    1.1  标本来源  128例胸腔积液标本均为1999年12月~2005年10月在吉林省肿瘤医院及长春市传染病医院住院患者标本,并明确诊断。

    1.1.1  结核性胸膜炎组  本组68例,男40例,女28例,年龄18~67岁。诊断标准:(1)有结核中毒症状;(2)伴有肺部结核病灶;(3)胸腔积液为渗出性改变;(4)抗结核治疗2~4周有效且胸腔积液吸收快;(5)痰涂片或痰培养找到结核杆菌;(6)胸腔积液中找到抗酸杆菌;(7)胸膜活组织检查病理有典型的结核改变。

    1.1.2  恶性胸腔积液组  本组60例,男46例,女14例,年龄47~73岁,均经病理学或细胞学检查明确的恶性胸膜炎患者。

    1.1.3  健康对照组  40例均系健康工作人员。

    1.2  检测方法  试剂:IFN-γ、TNF-α检测试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。上述检测对象均采用空腹静脉血及胸腔积液,离心(400 r/min)10 min,取上清液分装,放置-20 ℃保存备用。采用酶联免疫吸附法(ELISA)严格按试剂盒所附的说明进行操作。具体步骤:(1)设标准曲线的IFN-γ、TNF-α标准浓度(500、250、125、62.5、31.25、15.60 pg/ml);(2)加入已按严格要求倍数稀释的IFN-γ、TNF-α标准液和标本100 μl至相应孔内,用封板胶纸封住反应孔。室温(20 ℃~25 ℃)120 min;(3)按洗涤方法洗板;(4)除空白孔外,每孔加按说明要求稀释的生物素标注的二抗100μl封住板孔,室温(20 ℃~25 ℃)90 min;(5)按洗涤方法洗板;(6)除空白孔外,每孔加按说明要求稀释的生物素标注的二抗100 μl封住板孔,室温(20 ℃~25 ℃)30 min;(7)按洗涤方法洗板;(8)每孔加入底物A、B(各1滴或50 μl/孔)避光10~30 min,视显色情况灵活掌握;(9)每孔加入终止液50 μl,即刻在450 nm酶标仪测定标本的吸光度,画出标准曲线,由标准曲线算出标本的IFN-γ和TNF-α水平。

    1.3  统计学方法  实验结果先行差方齐行分析,然后两样本均数比较用t或t′检验

    2  结果

    2.1  结核性胸膜炎组和恶性胸腔积液组血清和胸腔积液  TNF-α结核性胸膜炎组[(302.5±79.9)pg/ml]明显高于恶性胸腔积液组[(55.7±36.3)pg/ml],经统计学处理P<0.01。两组血清TNF-α含量[(47.2±8.9)pg/ml、(46.3±6.5)pg/ml]比较无明显差异(P>0.05)。结核性胸膜炎TNF-α水平明显高于血清含量(P<0.01),且两者之间无相关性(r=-0.0658)。结核性胸腔积液TNF-α>75 pg/ml[2]29例,癌性组5例阳性。表1  胸腔积液和血清TNF-α水平 注:胸腔积液结核组与癌性组比较,P<0.01

    2.2  结核性恶性胸腔积液组血清和胸腔积液IFN-γ水平  见表2。结核性胸膜炎组IFN-γ水平[(151.9±26.8)pg/ml]明显高于恶性胸腔积液组[(44.1±12.6)pg/ml],统计学处理(P<0.01)。两组血清含量低[(41.2±8.4)pg/ml,(36.8±7.5)pg/ml],其值相近,与健康对照组[(36.5.1±2.4)pg/ml]比较无显著差异。结核性胸膜炎的胸腔积液TNF-α水平明显高于血清组(P<0.01),且两者之间无相关性(r=-0.246),结核性胸腔积液IFN-γ>120 mg/ml[2]31例,癌性组4例阳性。表2  胸腔积液和血清IFN-γ水平注:胸腔积液结核组与癌性组比较,P<0.01

    2.3  两者对结核性胸膜炎的诊价值  见表3。同时阳性诊断率高达85.3%。表3  两项指标对结核性胸膜炎的诊断价值

    3  讨论

    由于胸腔积液中的结核杆菌和癌细胞的检出率低,结核性胸腔积液和癌性胸腔积液的问题一直为人们所关注。近年来肺癌和老年结核性胸膜炎的发病率增加,特别是周围性肺癌,早期即发生胸腔积液,此时患者的临床表现和影像学检查均不能显示异常,而老年结核性胸膜炎缺乏特异性的结核中毒症状。临床上鉴别二者办法首先抗结核治疗,无效时再考虑肿瘤。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)等细胞因子,是结核胸膜炎局部细胞免疫应答产物,从20世纪80年代开始受到国外学者的注意,结核性胸膜炎胸腔积液中TNF和IFN-γ等细胞因子浓度增高,提示结核性胸膜炎局部免疫功能增强,其诊断结核性胸膜炎的敏感性和特异性分别可达100%和93%,明显高于单独测得胸腔积液腺苷脱氨酶(ADA)活性。1990年Lshii等[3]测得结核性胸腔积液中TNF-α和IFN-γ浓度是血浆的5~30倍,并且应用胸膜原位杂交的方法检测到了TNF-α、IFN-γ mRNA,提出这两种细胞因子的升高是分枝杆菌细胞壁成分刺激胸膜腔单核细胞的结果,是胸膜腔局部免疫应答产物。大家知道ADA可用于结核性胸膜炎的辅助诊断,已写进教科书,可用于结核性胸膜炎和癌性胸腔积液的鉴别诊断。但当胸腔积液中细胞破坏时,可导致ADA含量升高。此外胸腔积液中脓性及其他坏死物质,也会引起ADA升高,因此有一定局限性。IFN-γ为辅助T细胞产生。结核性胸腔积液中的淋巴细胞受结核菌细胞壁蛋白刺激产生IFN-γ。在结核分枝杆菌抗原的刺激下产生高浓度的IFN-γ。而外周血含量低,可能与结核性胸膜炎的局部细胞免疫功能增强有关,肿瘤坏死因子是由单核细胞和巨噬细胞产生的一种多肽类细胞因子,介导多向炎症反应和免疫调节反应,具有抗感染、抗肿瘤等多种生物学活性,结核性胸腔积液中巨噬强胞功能十分活跃,在结核杆菌细胞壁的蛋白-肽多糖复合物和阿拉伯聚糖脂刺激下激发胸腔积液单核细胞引起依赖性肿瘤坏死因子释放。本文研究表明结核性胸膜炎组胸腔积液中IFN-γ、TNF-α水平均明显高于恶性胸腔积液组(P<0.01)且结核性胸腔积液与血清中二者含量无相关性,进一步说明其局部细胞免疫功能增强。文献报道[4]恶性胸腔积液中TNF-α含量低的原因可能与恶性胸腔积液中有高浓度的TNF-α抑制物有关,本文研究结果显示恶性胸腔积液TNF-α含量显著低于结核性胸膜炎组。结核性胸膜炎组TNF-α含量是恶性胸腔积液的2~5倍,与文献报道基本一致。以胸腔积液TNF-α>75 mg/ml为临界值,其诊断结核性胸膜炎的敏感性、特异性分别为86.3%、84.3%。而胸腔积液IFN-γ含量>120 mg/ml为临界值,其敏感性[5]相比基本相同。胸腔积液中IFN-γ、TNF-α同时测定阳性率达85.3%。通过对结核性胸腔积液和恶性胸腔积液IFN-γ、TNF-α含量测定研究笔者认为:(1)IFN-γ、TNF-α在结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的发生、发展、病理生理改变中起着重要作用;(2)结核性胸腔积液中IFN-γ、TNF-α含量明显高于恶性循环性胸腔积液组,具有显著差异,有助于结核性和恶性胸腔积液的鉴别;(3)胸腔积液中IFN-γ、TNF-α的联合检测结核性胸膜炎的诊断提供了一项辅助手段,具有一定的临床意义。

【参考文献】
  1 Dewit D,Maurtents G,Sceyn L,et al.Vestudy of theplymerase yeaction and conrention procedures for the diagnosis of tuberculous pieral effusion.Tubercle and Lung Disease,2000,73(4):262.

2 Miyazaki Y,Koga H,Kohno S,et al.Nested polymerase chain reac-tion for detection of Mycobactenium tuberculosisin chinica sampiest.J Clin Microbio,1993,31(8):2228-2232.

3 Lshii YU,Chiyama Y,Heasegwa S.Detection of tumornecrosis factor/ca checitin pieura/eff usion of patients with lung cancer.Cancer Clin EXP Immunol,1998,80:350.

4 Barnesp F,Fong S,Brennan PJ,et al.Loca prodnction of eumorenecrosis factor and TNF-gamma in tuberculous pieuriti.SJ Immnnol,1990,105:149.

5 EstnerL,Jose S,De Via Aivar EZ,et al.Diangnosis of tuberculous pieurisy using the biologie parameters aaenosine deaninase lysotyme and inte feron gamma.Chest,2003,103:458.

(编辑:陆 华)


作者单位:130123 吉林长春,长春市传染病医院综合科


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